银花感冒颗粒(无糖型)的成型制备工艺研究

林晓，秦昌金，谢晓燕，王浩骅，王坤

(1.山东省食品药品检验研究院，山东 济南250101；2.青岛西海岸新区皮肤病防治站，山东 青岛266400；3.栖霞市皮肤病医院，山东 烟台264000；4.山东新宝医药有限公司,山东 济南 250131)

颗粒剂是指中药材的提取物与适宜辅料或与部分药材细粉混匀，制成的颗粒状剂型[1]，具有分散性、附着性、聚集性、分离性、吸湿性等均较小[2]，易溶解、吸收和服用方便的特点。银花感冒冲剂由金银花、连翘、防风、桔梗和甘草5味药组成的中药制剂，收载于《国家卫生部药品标准·中药成方制剂(第二册)》，具有清热、解毒、利咽等功效，用于治疗感冒发热、头痛、咽喉肿痛等症，临床应用广泛[3]。在参考银花感冒口服液[4]基础上，本试验采用水提醇沉技术，以糊糊、可溶性淀粉和乳糖为稀释剂，试验了银花感冒的无糖型颗粒成型工艺，现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器 BSA6202S-CW型电子分析天平(德国赛多利斯)；高效液相色谱仪(日本岛津 LC-15C)，SPD-20紫外检测器，7725i型进样阀；SinoPak C18(4.6 mm×200 mm，5 μm)色谱柱；DXJHNS型酒精回收塔(湖北维华机械有限公司)；RE-52A旋转蒸发器(杭州聚莱仪器有限公司)

1.2 试药 金银花(亳州市普泽药业销售有限公司，批号：180101)；连翘(亳州市普泽药业销售有限公司，批号：180101)；防风(亳州市普泽药业销售有限公司，批号：180102)；桔梗(亳州市普泽药业销售有限公司，批号：180103)；甘草(亳州市普泽药业销售有限公司，批号：180101)；绿原酸对照品(中国食品药品检定研究院，批号：110753-201716)；银花感冒颗粒(自制，批号：20180514-1)；阴性对照品(自制，批号：20180510-1)；乙腈为色谱纯，水为重蒸水；其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 含量测定

2.1.1 色谱条件与系统适应性试验[5]以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.4%磷酸(10∶90)为流动相；检测波长为327 nm。理论板数按绿原酸峰计算应不低于5 000。

2.1.2 对照品溶液 取绿原酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加50%甲醇制成每1 mL含40 μg的溶液，即得。

2.1.3 供试品溶液 取样品约0.6 g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，密塞，称定重量，超声处理(功率400 W，频率50 kHz)30 min，放至室温，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，即得。

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，测定，即得。

2.1.4 阴性对照溶液 按处方称取不含金银花药材饮片，按“2.1.3”项下方法，制得不含金银花阴性对照溶液。

2.1.5 专属性 分别取绿原酸对照品溶液，供试品溶液以及阴性对照溶液，按照上述色谱条件进样测定，阴性对照在绿原酸峰处无干扰,见图1～3。

图1 绿原酸对照品HPLC图

图2 银花感冒颗粒(无糖型)HPLC图

图3 不含金银花阴性对照HPLC图

2.1.6 线性关系 精密称取绿原酸对照品10.48 mg，置100 mL棕色量瓶中，加50%甲醇，振摇，溶解并稀释至刻度，作为贮备液；分别精密量取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0和6.0 mL各置10 mL棕色量瓶中，分别用50%甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品线性溶液，分别精密吸取上述溶液各10 μL，注入液相色谱仪，以峰面积值(A)为纵坐标以对照品溶液浓度(C)为横坐标，进行线性回归。得线性回归方程为：A=571 967C+10 417，r=0.999 8，在10.48～62.88 μg·mL-1浓度范围内，绿原酸峰面积与浓度的线性关系良好。

2.1.7 精密度试验 取浓度为41.92 μg·mL-1的对照品溶液，在相同的色谱条件下，重复进样6次，结果绿原酸峰面积RSD为0.76%，精密度良好。

2.1.8 重复性 制备6份供试品溶液，在相同色谱条件下测定，结果RSD为0.50%，重复性良好。

2.1.9 稳定性 取同一供试品溶液，分别在0、2、4、6、8、10 h进样测定，结果绿原酸峰面积RSD为0.56%，供试品溶液在10 h内稳定。

2.1.10 加样回收率试验 精密称取绿原酸对照品10.12 mg，置50 mL棕色量瓶中，加50%甲醇，振摇，溶解并稀释至刻度，作为贮备液； 取同一批已知含量的银花感冒颗粒(无糖型，批号：8023001，含量：0.94 mg·g-1)，精密取6份，照供试品项下方法处理，分别加入绿原酸对照品溶液(200.98 μg·mL-1)2.5 mL，混匀后测定，计算绿原酸回收率，平均回收率为100.26%，RSD为0.68%，回收率良好。

2.2 工艺研究

2.2.1 提取工艺研究 通过预试验及参考相关文献，确定用水提取法，试验中选择加水量、提取时间与提取次数作为考察因素，以提取液中绿原酸含量及干膏的出膏率为评价指标，用L9(34)正交表进行银花感冒颗粒的提取试验，提取用因素水平、正交及方差分析见表1～4。

绿原酸含量测定：取各提取液10 mL，75 ℃水浴蒸干，残渣加50%甲醇溶解并转移至25 mL量瓶中，作为供试品溶液。另取绿原酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加50%甲醇制成每1 mL含40 μg的溶液，作为对照品溶液。照“2.1”含量测定项下方法测定，即得。

干膏率：精密量取各提取液45 mL，置已恒重的蒸发皿中，先在80 ℃浓缩至近干后移至烘箱中在105 ℃干燥至恒重，取出，冷却至室温，称定，按下式计算：

干膏率%=干膏量/药材量×100%

表1 成型因素水平表

表2 成型正交试验及结果

表3 成型试验方差分析表

表4 药材出膏率方差分析

由表2～4分析，以绿原酸含量和干膏率分别为指标进行评价，因素B(提取次数)有显著性意义(P<0.01)，因素B3(提取3次)明显优于B1(提取1次)、B2(提取2次)，故选B3；因素A与C虽无显著性意义，但考虑在实际生中绿原酸含量、生产成本、生产效率等因素，故选择A2与C2，最终确定认为A2B3C2为最佳工艺，即药材用8倍量水提取3次，每次1.5 h。

2.2.2 醇沉工艺研究

2.2.2.1 醇沉浓度试验 取金银花160 g、连翘160 g、防风160 g、桔梗160 g和甘草80 g，每份计720 g，置10 L圆底烧瓶中，加水7.2 L，加热回流提取(8倍量水提取3次，每次1.5 h)，合并3次提取液，过滤，80 ℃浓缩至ρ=1.15～1.25)，制成清膏，平行制备4份，分别缓缓加入乙醇，搅匀，调整至不同乙醇浓度进行醇沉，在2～8 ℃条件下静置48 h，滤取上清液，测定绿原酸含量与干膏率，结果见表5。

表5 醇沉浓度试验结果

结果：调整乙醇浓度达70%，进行醇沉，绿原酸含量与出干膏均合适，故选择以醇沉浓度为70%。

2.2.2.2 醇沉后静置时间试验 按 “2.2.2.1”项下方法制备清膏4份，分别缓缓加入乙醇，边加边搅匀，使乙醇浓度达70%，在2～8 ℃条件下分别静置不同时间，滤取上清液，测定绿原酸含量与干膏率，结果见表6。

表6 醇沉后静置时间试验结果

结果：药液在2～8 ℃条件下静置48 h，分层明显，容易过滤，故选择静置时间为48 h。

2.2.3 成型工艺研究 取金银花160 g、连翘160 g、防风160 g、桔梗160 g和甘草80 g，每份计720 g，置10 L圆底烧瓶中，加水7.2 L，加热回流提取(8倍量水提取3次，每次1.5 h)，合并提取液，滤过，浓缩(80 ℃，ρ=1.15～1.25)，制成清膏，边加边搅匀，使乙醇浓度达70%，在2～8 ℃条件下静置48 h，滤取上清液，浓缩成稠膏(80 ℃，ρ=1.35～1.45)，干燥(80 ℃)，粉碎成细粉，平行制备5份，分别加入稀释剂制软材，以16目尼龙网筛制粒，75 ℃干燥，16目筛整粒，结果见表7。

表7 稀释剂的选择及成型工艺研究结果

结果：在成型试验中，以可溶性淀粉、糊精和乳糖的不同比例混合物为颗粒剂赋形剂，并对各用量进行了考察，结果以处方5中赋形剂与干膏粉混合后制粒时，制粒容易，不粘网，颗粒成型率最佳。

2.3 中试工艺验证 在上述优化工艺的基础上，进行了3批中试生产，每批投料400倍处方量，对3批成品率及绿原酸含量进行验证，结果见表8。

表8 银花感冒颗粒中试工艺验证结果

由上述结果可知，通过银花感冒颗粒(无糖型)3批中试验证，颗粒的成型率与质量均符合要求，工艺稳定，适用于生产。

3 讨论

3.1 绿原酸是由咖啡酸与奎尼酸形成的酯，其分子结构中有酯键、不饱和双键及多元酚3个不稳定部分，在从植物提取过程中，往往因为水解和分子内酯基迁移而发生异构化，或氧化等作用而引起有效成分的提取率明显下降[6]。为减少绿原酸在生产过程中的损失，我们选择了干燥温度不超过80 ℃。

3.2 绿原酸对照品溶液在自然光下稳定性较差，易产生分解，因此含量测定操作中应注意闭光，选择采用棕色量瓶[7]。在银花感冒颗粒供试中制备选择试验中，对比了加热回流与超声各提取30 min，两种提取方法对绿原酸含量的影响，结果超声处理和回流提取两种方法中绿原酸含量无明显差别，因超声处理更简便，故提取方法确定为超声提取。

3.3 可溶性淀粉是可溶颗粒的良好稀释剂，并有矫味及黏合作用；糊精为白色或微带黄色的细腻粉末，不溶于醇，微溶于水，能溶于沸水成黏胶状溶液，黏性强，并呈弱酸性[8]。乳糖易溶于水，性质稳定，无吸湿性，与大多数药物不起化学反应，对主药含量测定的影响较小，是很好的稀释剂[9]。在颗粒的成型试验中，试验了醇沉后上清液浓缩成稠膏，以最大密度1.45(80 ℃)时将稠膏加入赋形剂制粒，制粒较难，粘网，需用赋形剂较多，颗粒(无糖型)服用量较大；经多次成型试验选择了将稠膏干燥，粉碎成细粉，以可溶性淀粉、糊精和乳糖为赋形剂，结果制粒的可操作性，颗粒质量明显优于以稠膏制粒或以单种辅料为赋形剂制粒。

3.4 为验证优选的银花感冒颗粒(无糖型)最佳生产工艺的可行性，我们进行了3批中试生产，质量合格，银花感冒颗粒(无糖型)生产工艺稳定可靠，适应于工业化生产。