疟疾快速免疫诊断技术的应用研究进展

王敬军

天津市蓟州区人民医院检验科，天津 301900

疟疾是因疟原虫感染引起的虫媒传染病，主要以蚊虫叮咬为媒介，或输入携带疟原虫者血液所致［1］。疟疾呈周期性、反复发作，发作期间易导致水电解质紊乱、微循环及血循环异常，持续反复发作则会导致贫血、脾肿大等，威胁患者生命安全。临床需及时诊断，以尽早采取治疗，做好防疫，避免疟疾大范围感染。疟疾的临床诊断包括表现、实验室检查、分子生物技术等多种方法，各有其优势。快速免疫诊断技术用于诊断寄生虫感染的常用方法，具有快速、简便等多种优势［2］。本文就疟疾的常规诊断方法及快速免疫诊断技术的应用展开一一叙述。

1 常规诊断方法

1.1 临床表现

从人体感染疟原虫开始主要分为潜伏期、发冷期、发热期、出汗期四个阶段。潜伏期是感染至发病时间，与感染疟原虫类型及感染途径相关；发冷期先是四肢末端发凉，之后迅觉背部、全身发冷，可持续10 min，甚至1 h；寒战停止后进入发热期，且寒战程度越重，体温越高，甚者可达到40℃，且持续数小时，严重者剧烈头痛、顽固性呕吐，甚至抽搐或不省人事；发热后期全身出汗，持续2～3 h体温降至正常，精神轻快，进入间歇期，患者可正常生活与工作［3-4］。因疟疾临床表现具有周围性，临床可根据患者表现做出初步诊断。但寒战、发热、出汗等表现为非典型症状，与伤寒、血吸虫病等症状相似，特异性较差，临床需联合其他方法明确诊断。

1.2 镜检法

镜检法则是采集患者外周血，制作长厚和薄血膜血片，经溶血染色处理后在显微镜下直接观察是否含有疟原虫，进而得到诊断结果［5］。镜检法在疟疾诊断中应用时间较长，也是唯一可鉴别疟原虫类型的检测技术，是疟疾诊断的金标准。但镜检法对操作、染色、临床经验等要求较高，在基层实际应用中受限，且费时费工，难以达到快速检验效果［6］。

1.3 聚合酶链式反应（PCR）

PCR是一种核酸扩增技术，可提高反复扩增疟原虫特异性基因片段，并增强分析信号，以扩增DNA片段，以便于临床检出，在疟疾诊断中具有较高的敏感性及特异性，且能够预防样品污染，减少操作过程中DNA的降解及丧失［7-8］。但该技术对操作水平及实验条件要求高，成本投入也较大，临床难以推广应用。

2 快速免疫诊断技术

免疫诊断是应用免疫学技术、理论、方法测定免疫状态、诊断各类疾病的技术，免疫诊断试剂盒广泛应用于医院、体检中心、血站等多种医疗服务机构，在疾病筛查诊断中应用价值高。免疫诊断试剂在诊断试剂盒中品种最多，广泛应用于医院、血站、体检中心。目前所用的疟疾快速免疫诊断技术为免疫胶体金技术（ICS），是一种以胶体金为示踪标志物应用于抗原抗体的新型免疫标记技术，无需进行标记物结合及自由标记物分离，避免加样、洗涤等繁琐步骤，临床操作快速、简便，无需特殊仪器及培训，利于现场快速检测［9］。

2.1 分子基础

ICS及时在疟疾中的快速诊断主要为抗原检测，其中主要靶抗原为疟原虫富组氨酸蛋白-Ⅱ（HRP-Ⅱ）、疟原虫乳酸脱氢酶（pLDH）和疟原虫谷氨酸脱氢酶（pGDH）。HRP-Ⅱ是疟原虫消化血红蛋白的产物，属于血溶性抗原，包含大量组氨酸，在疟疾患者血、尿中均可检出，在恶性疟疾及日疟诊断中特异性高［10］。pLDH为疟原虫体内代谢酶，pGDH是疟原虫生成还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸的代谢物，均具有种属特异性，其酶催化作用、免疫化学特点、理化特点等与人体其他生物组织差异大，在疟疾诊断中特异性高［11］。同时，人体红细胞内无谷氨酸脱氢酶（GDH），故pGDH可作为疟原虫感染标志物，也是疟疾药物治疗的靶酶。

2.2 临床应用

随着疟疾快速免疫诊断技术的发展，疟疾快速诊断试纸（RDT）大量应用于疟疾诊断中，检测时无需其他特殊设备、试剂等，根据说明书操作即可在短时间内得到诊断结果，易掌握，诊断结果特异性高，且较为直观、快速。李明等［12］研究发现，疟原虫快速诊断试纸（RDT）在疟疾诊断中的敏感性远高于镜检法及巢式PCR。同时，试剂盒稳定性高，易于携带，适用于基层医院及现场诊断，推广价值高。金嘉杰等［13］调查发现，RDT试纸广泛应用于江苏基层医疗机构。进一步证明疟疾快速免疫诊断技术在基层医院的推广应用价值。但钱稳吉等［14］调查发现，RDT试纸在基层临床医师中的使用评价低于疾控人员及检验人员，临床需对基层医疗人员进行相关培训指导，以确保RDT试纸的规范使用。

2.3 局限性

快速免疫诊断技术虽具有快速、简便、直观等多种优点，但镜检法仍是目前诊断疟疾的金标准。现阶段临床应用的各种RDT试纸是针对日疟和恶性疟的指导，难以有效鉴别卵形疟、三日疟、未知疟［15］。同时，不同类型RDT试纸特异性、灵敏性不同，HRP-Ⅱ的基因多态性也会对RDT试纸检测结果造成影响，且若患者伴有免疫系统疾病也会影响检测结果。因此，临床在检测难以明确的疟疾时需联合其他检测方法，以提高疟疾诊断准确性。莫嘉延等［16］研究发现，在基层医疗机构中采取RDT与镜检串联检验结果更加可靠，特异度、灵敏度、阴性预测值、阳性预测值均高于RDT与镜检单独检测，使用范围更加广泛。

3 小结

疟疾作为虫媒传染病，发病率及死亡率均逐年降低，但境外输入病例仍持续发生，临床不可忽视疟疾的防控。疟疾快速免疫诊断技术是基础医疗机构疟疾筛查诊断的常用方法，具有快速、简便、直观、可靠等多种优点。但该技术仍有一定假阳性、假阴性的发生，且难以有效鉴别疟原虫类型，临床需联合镜检等技术，以明确诊断。同时，目前进口试剂盒在一定程度上限制疟疾快速免疫诊断技术的推广，临床还需加强相关试剂盒的研发，以进一步降低试剂盒价格，推动疟疾快速免疫诊断技术发展及基层推广。