冠状动脉粥样硬化性心脏病慢性心力衰竭患者血清miR－30a表达水平与心功能和心肌重构的相关性

张帆

湖州市第三人民医院心血管内科（浙江湖州313000）

随着社会生活方式以及饮食的不断变化，人们的物质生活水平不断提高，但伴随的健康问题却也日益突出，心血管疾病越来越成为影响当代居民健康的重要问题。有关研究指出，我国心血管疾病的发病率及病死率仍居高不下，病死率更是位居各类疾病之首［1］。冠状动脉粥样硬化性心脏病（coronary heart disease，CHD）与慢性心力衰竭（chronic heart failure，CHF）在心血管疾病中占据较大比例，由于其疾病进展缓慢导致其成为严重影响患者生命质量的慢性疾病［2］。有关资料显示，CHF在全世界范围内患病率为1.5%～2.0%，疾病导致的病死率高达5.6%～15.4%，CHF患者最初多是由于CHD引起，两者相互影响，使患者预后不良［3－4］。CHD患者常会由于心肌的急慢性缺血导致患者体内神经内分泌激活或产生各类炎症因子，进而导致患者心室重塑，表现为左心室肥厚、纤维化严重以及收缩功能障碍，进而加重患者心力衰竭症状［5］。然而目前对于CHD合并CHF患者的发病机制尚不明确。有关资料显示，micro－RNA可同时存在于心肌细胞以及血管内皮细胞等心血管组织内，心血管疾病发生时可在病理生理发生过程中起到基因调控作用，参与了心脏重构、冠脉血管病变以及心律失常的发生过程［6］。资料显示，左心室肥厚的患者以及小鼠体内均存在不同程度的miR－30a下调，提示miR－30a水平的变化很可能与患者左心室肥厚存在密切联系［7］。为此，本研究主要基于上述文献报道，选取我院CHD合并CHF患者为研究对象，探讨miR－30a在CHD合并CHF患者血清中表达水平及与心功能和心肌重构的相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取我院2017年10月至2019年10月收治的90例CHD合并CHF患者为研究对象，即观察组，选择40例同期确诊为CHD未合并CHF患者为对照组。

纳入标准：（1）诊断为CHD并符合CHF诊疗指南［8］的患者，包括不稳定型心绞痛、伴ST段抬高型心肌梗死等患者；（2）CHF持续时间超过半年以上；（3）患者临床资料完全；（4）患者及家属知情同意并自愿参加本研究。

排除标准：（1）合并先天性心脏病、肥厚型心肌病、心脏瓣膜病的患者；（2）合并终末期肾病的患者；（3）冠脉搭桥手术、异物植入等外科手术患者；（4）入院后早期死亡的患者；（5）存在中枢神经系统疾病导致的认知功能障碍的患者。

本研究已经湖州市第三人民医院伦理学委员会审批通过。

1.2 观察指标及试验方法

1.2.1 miR－30a的检测 采用荧光实时定量PCR检测患者外周血miR－30a水平，主要步骤包括总RNA的抽提、紫外分光光度法测定RNA浓度、逆转录取得cDNA、定量PCR、结果的处理（ΔΔCT法）。主要相关的试剂盒：trizol试剂盒购自北京百泰克生物技术有限公司；hsa－miR－30a引物购自北京天根生化科技有限公司；逆转录试剂盒购自广州翔博生物科技有限公司；荧光实时定量PCR试剂盒购自北京碧云天生物技术有限公司；miR－30a以及引物购自北京索莱宝生物技术有限公司。

1.2.2 Gensini评分 采用Gensini评分系统对各组患者冠脉狭窄程度进行评分，具体参见文献［9］。

1.2.3 心功能检查指标 通过超声检查不同心功能级患者左室射血分数（left ventricular ejection fraction，LVEF）、左心室舒张末径（left ventricular enddiastolic dimension，LVEDD）、左心房内径（left atrial dimension，LAD）以及左室重构指数（left ventricular remodeling index，LVRI）等心功能指标。

1.2.4 患者心功能分级、Gensini评分与miR－30a水平的相关性分析 采用Spearman相关性分析方法对患者美国纽约心脏协会（New York Heart Association，NYHA）分级、Gensini评分与miR－30a相关性进行分析。

1.2.5 受试者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲线 用ROC曲线评价miR－30a对CHD合并CHF患者诊断。

1.3 统计学方法 所有数据均采用SPSS 20.0统计软件进行统计分析，其中计数资料采用χ2检验进行统计分析，结果以频数（%）形式呈现；计量资料采用t检验进行统计分析，多组间比较采用单因素方差分析，结果以±s形式呈现，P＜0.05视为差异有统计学意义。心功能分级、左心室厚度与miR－30a水平的相关性分析采用Spearman相关性分析方法进行比较，并制作相关ROC曲线。

2 结果

2.1 两组患者血清中miR－30a表达水平的对比 观察组患者miR－30a表达水平明显高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 两组患者血清中miR－30a表达水平的对比 ±s

表1 两组患者血清中miR－30a表达水平的对比 ±s

项目 例数miR－30a观察组90 0.16±0.04对照组 40 0.09±0.02 t值 13.313 P值0.000

2.2 观察组患者Gensini评分与血清中miR－30a表达水平对比 根据Gensini评分的高低，将患者依次分为G1组（0～32分）36例、G2组（32～68分）26例、G3组（68～110分）16例、G4组（110～256分）12例，患者血清中miR－30a的表达水平随Gensini评分增加而增加，G1组0.07±0.01、G2组0.09±0.02、C3组0.12±0.04、G4组0.16±0.08，4组组间对比，差异均有统计学意义（P＜0.05），见图1。

图1 miR－30a表达水平随Gensini评分梯度上升

2.3 患者不同心功能分级下心功能指标对比 LVEF、LVRI指标水平随分级增加而逐渐降低，LVEDD、LAD指标的水平随分级增加而逐渐增加，不同分级间对比差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2 患者不同分级下心功能指标对比 ±s

表2 患者不同分级下心功能指标对比 ±s

注：*与Ⅰ、Ⅱ级比较P＜0.05；△与Ⅲ级比较P＜0.05

心功能 例数 LVEF（%） LVEDD（mm） LAD（mm） LVRI（g／L）Ⅰ、Ⅱ级 29 51.35±4.82 71.86±6.68 42.11±5.23 1.08±0.33Ⅲ级 35 45.29±4.17* 74.05±8.22* 49.59±5.03* 0.95±0.28*Ⅳ级 26 40.88±5.35*△ 77.26±8.94*△ 55.22±3.96*△ 0.84±0.31*△

2.4 心功能分级与miR－30a水平的相关性分析 经Spearman相关性分析显示，心功能分级与miR－30a水平的相关性有统计学意义（r＝0.735，P＝0.000），提示心功能分级与miR－30a水平存在正相关关系，即miR－30a水平的高表达与心功能分级的升高有明显关系。见图2。

图2 血清miR－30a的表达与心功能分级呈正相关关系

2.5 Gensini评分与miR－30a水平的相关性分析 经Spearman相关性分析显示，Gensini评分与miR－30a水平的相关性有统计学意义（r＝0.754，P＝0.000），提示Gensini评分与miR－30a水平存在正相关关系，即miR－30a水平的高表达与Gensini评分的升高有明显关系。见图3。

图3 血清miR－30a的表达与Gensini评分呈正相关关系

2.6 miR－30a对CHD合并CHF患者诊断的ROC曲线评价 ROC曲线评价结果显示，患者外周血miR－30a曲线下面积（AUC）为0.882，P＝0.000，95%置信区间为0.810～0.954，诊断的灵敏度为86.3%，特异度为82.6%，见图4。

图4 miR－30a诊断CHD合并CHF患者ROC曲线

3 讨论

近年来，随着心血管疾病发生率的增加，CHF的发生率现已较正常人群增加2～3倍［10］。疾病的不良进展常会导致患者预后较差，临床上出现各类心血管不良事件，同时可能导致患者出现多器官功能衰竭，危及生命。随着对心力衰竭患者的发病机制研究的深入，心室重构逐渐成为临床医师关注的焦点。心室重构是对机体损伤的一种代偿性反应，心血管疾病患者发生CHF时，心功能逐渐恶化，左心室射血功能逐渐衰退，进而造成神经－内分泌异常，炎性细胞浸润、信号转导机制异常，最终引起心肌重构现象的发生［11］。

micro－RNA是一类高度保守的非编码小微RNA，主要通过整合入沉默复合体，以碱基互补配对方式识别相应的mRNA，降解或抑制mRNA的翻译过程发挥基因表达调控作用［12］。自2005年miRNA－1－2首次在心脏病患者体内发现后，miRNA－126在心血管疾病发生过程中的作用研究相继被报道，其在血管的生成以及维持血管完整性方面具有重要作用［13］。miR－1在维持胚胎的生长发育、心房、心室肌细胞的成熟等方面具有重要作用，miRNA－199的表达对外周血管以及心脏表面结缔组织的发生密切相关［14］。另有研究发现，miR－208转基因小鼠体内出现心室肥厚以及β－主要组织相容性复合体（major histocompatibility complex，MHC）的上调的现象，该研究证明心室肥厚的发生可能与患者体内调的miR－208表达介导的β－MHC有关［15］。资料显示，急性心肌梗死或心力衰竭发生后，患者外周血miR－30a表达水平明显增加，并出现了明显的失调现象，同时发现下调miR－30a的表达可改善患者心肌缺血症状［16］。miR－30a亦可增加RAAS系统中血管紧张素对患者心肌肥厚的促进作用，加剧患者心肌肥厚症状［17］。Pan等［18］通过诱导miR－30a过表达或者抑制miR－30a活性的研究发现，miR－30a活性抑制后动物体内自噬相关蛋白Beclin－1表达明显上调，较诱导前升高至2.25倍；相反，诱导miR－30a过表达后动物体内Beclin－1蛋白明显下调至42.5%，结果提示miR－30a可能通过调节自噬相关蛋白Beclin－1的表达进而对心肌细胞的自噬系统产生负性调控作用。

然而，即使既往已有关于miR－30a的研究，但多局限于动物实验研究或样本量较少的研究，尤其对于miR－30a与CHD合并CHF患者心功能分级与miR－30a表达水平的相关性研究较少。因此，本研究发现，观察组患者外周血miR－30a水平明显高于对照组（P＜0.05），提示CHD合并CHF会增加miR－30a表达水平，并随Gensini评分呈梯度上升趋势，同心功能分级下，LVEF、LVRI指标水平随分级增加而逐渐降低（P＜0.05），LVEDD、LAD指标的水平随分级增加而逐渐增加（P＜0.05），提示miR－30a参与了心室肥厚以及心肌重构的发生过程，这与以往的研究［19－20］结论基本一致。同时发现心功能分级、Gensini评分与miR－30a水平均呈正相关性（P＜0.05），AUC分别0.882、0.714，提示相关性分析的准确性较高。本研究中建立的ROC曲线分析结果可知miR－30a与CHD合并CHF的发病具有显著性的相关关系，对其发病具有一定的诊断价值。

综上所述，miR－30a水平的高表达在一定程度上反映出心功能及心机重构的变化，可预测出CHD患者存在合并CHF风险，因此可将其作为特异性指标用于临床治疗中，并进一步推广。