食品中瘦肉精检测存在的问题及解决方法分析①

方荣谦

（厦门市产品质量监督检验院 福建厦门 361000）

1 GB/T 22286标准检测瘦肉精存在的问题

GB/T 22286 标准作为重要的瘦肉精检测手段，方法较准确，检出限低，常用于畜禽肉及副产品中的莱克多巴胺、克伦特罗等β-受体激动剂（即瘦肉精）残留量的检测。在《国家食品安全监督抽检实施细则》2019 版、2020 版规定，猪、牛、羊及其他畜肉中的莱克多巴胺等瘦肉精的检测方法均采用该标准方法。然而该标准在实际使用过程中，由于步骤繁多，操作复杂，不同检测人员对标准细节的理解也不尽相同，以及标准所用的仪器设备更新换代，比如可用自动固相萃取装置代替手动萃取，或仪器参数设置不同等诸多原因，会引起检测结果的显著偏差。

2 GB/T 22286 标准在实际检测过程中的解决方法

2.1 简化提取过程中沉淀蛋白的步骤

GB/T 22286 需要将已酶解、加过内标的样品用高氯酸将pH 调节至1，离心后取上清液用氢氧化钠溶液调为11，再用有机相进行液液萃取，萃取后的有机相用氮气吹至干，最后用合适溶剂溶解残渣才能进入下一步的净化步骤。整个过程操作步骤多，不仅费时费力，还使得整个方法的A类不确定度变大。由于该步骤的主要目的是沉淀固体杂质和蛋白，避免在净化步骤中堵塞固相萃取柱，因此简化该步骤。实际操作中，对于生猪肉和生牛肉样品，无需用高氯酸调节pH，直接将加过内标且混合均匀的样品离心，上清液用滤纸过滤，滤液澄清即可用于下一步净化。简化后的方法可行且操作简单，无论是使用自动固相萃取装置进行净化，还是手动操作净化，均不会造成固相萃取柱堵塞。简化后的步骤数量大幅减少，缩短了检测时间，还提高了检测方法的精密度。

2.2 自动固相萃取净化参数的优化

自动固相萃取仪是一种能够自动化运行固相萃取方法中包括活化、上样、清洗、洗脱等步骤的固相萃取装置，广泛应用于食品中农残、真菌毒素和兽残分析的样品前处理。按同时处理样品的批量数区分，自动固相萃取仪可分为单通道固相萃取仪和多通道固相萃取仪。通道数越多，同时处理样品的批量越多，可节省更多的前处理时间，特别是萃取步骤中上样的时间。自动固相萃取仪的特点是稳定、可靠，能够充分体现自动化的长处，将实验过程的人工随机误差降至最低。GB/T 22286 中并无提到净化过程是采用自动固相萃取还是手动固相萃取装置。因此，实验室常采用自动固相萃取装置更省心省力。

GB/T 22286 详细描述了固相萃取的各个参数，包括活化、上样、清洗、洗脱等步骤所需的溶剂种类和数量，规定过程流速应控制在0.5 mL/min。如采用手动方式，检验人员对流速的控制都比较熟悉，直接掐着秒表数液体滴下来的数量换算成体积即可。如采用自动方式，由于大部分自动萃取装置都可以在仪器面板或软件的操作界面直接设置流速参数，理论上操作应该更会简单，且过程不用人工干预，平行性也会更好。然而在实际操作中往往会遇到流速不一致的问题。比如在洗脱这一步设置流速成0.5 mL/min 的时候，由于仪器的滞后效应，洗脱过程流速远远小于0.5 mL/min，不仅达不到慢速洗脱的效果，而且还可能使洗脱液滞留在萃取柱中，使得待测目标物损失。在多通道固相萃取仪中还可能造成各通道流速不一致，导致实验平行性不好。值得注意的是，标准方法中流速控制在0.5 mL/min，是指实际流速，不是仪器上设置的流速。标准方法里仅用1mL 洗脱液在自动萃取装置净化，有时无法完全把目标物洗脱下来，导致回收率降低，检测数值偏小。建议将洗脱液增大为2～5 mL，充分将目标物洗脱下来。经调整参数之后的检测回收率及检测结果重复性均有明显提升。

2.3 内标加入方式的改进

在检测分析中，为了保证操作符合标准方法的要求，常常使用内标法定量。内标法可补偿检测过程中待测物在样品前处理，仪器响应等方面误差，使定量结果更加准确［1］。GB/T 22286 标准前处理步骤繁多，待测目标物在诸多复杂操作中很容易损失，如果用外标法定量会造成检测数值重复性差，加标回收率数值也明显偏低。因此，有必要加入内标。一般的检测方法是内标直接加入待测样品中，混合均匀即可进行下一步操作。GB/T 22286 加入内标后需要在振荡器中振荡15 min，以使内标物充分混合，与待测目标物处于相同状态。如果加入内标后不振荡或振荡时间不够，则内标大部分游离于待测样品及待测目标物之外，检测结果会造成内标数值偏大，使得内标校正后的待测目标物检测值明显偏低。在实际检测中，为了更好发挥内标作用，加入内标后把振荡时间延长至30 min，或在振荡15 min 之后再静置30 min，让内标与基质能够得到充分混合。

3 GB/T 22286标准应用优化实践的结论

瘦肉精检测过程复杂，方法精密度相对较差，本文通过简化前处理中沉淀蛋白的处理，优化固相萃取设置参数，改进内标的加入方式，使检测时间大幅减少的同时提升了检测精密度和方法回收率，大大增强了检测数据的准确性。