糖尿康片超微粉制备工艺与质量标准研究*

王亚宁 刘风林 杨 娜

糖尿康片[豫药制字Z20120840(汴)]是开封市中医院经河南省食品药品监督管理局审批的医疗机构制剂，主要由黄芪、玄参、黄连等6味药物组成，临床应用于气阴两虚型2型糖尿病，在20余年的应用中，疗效确切[1]。受医疗机构制剂条件的影响，本制剂最初的制备工艺是鬼箭羽提取成浸膏，而其他五味药均是原粉入药，然后进行常规的中药片剂生产，因此，服用量相对较大。特别是对于病情相对严重的患者来说，服药的依从性受了很大的影响，进而也影响了患者疾病的转归[2，3]。随着其应用人群的不断扩大，越来越多的患者反映糖尿康片服用量较大，虽然其具有“纯中药制剂疗效好、不良作用小”等优点[4]，但仍然不能满足广大病友的需求，因此，本研究旨在探索并建立糖尿康片超微粉制备工艺的质量标准，为该制剂进一步的研究提供依据。

1 材料、仪器与试剂

1.1 实验药品糖尿康片由开封市中医院制剂室提供(批号20200219、20190723)。

1.2 对照品盐酸小檗碱对照品(批号110781-201813)，购自中国药品生物制品检定所。

1.3 实验仪器与试剂高效液相色谱仪、超声波清洗器、三用紫外分析仪、甲醇、乙醇、盐酸、乙腈等。

2 实验方法

2.1 浸出物取糖尿康片20片，粉碎后过2号筛。置于带塞锥形瓶中精密加水100 ml后进行冷浸。在前6 h的浸泡过程中经常振摇，然后再静置18 h后。快速应用干燥的滤器进行过滤，精密量取20 ml续滤液置已提前处理好的蒸发皿(干燥恒重)中，水浴蒸干，放置于恒温干燥箱内干燥3 h，然后放置于干燥皿中冷却半小时，然后快速精密称定、计算[5]。

2.2 TLC鉴别本品内控质量标准药材为黄连：取本品2片，用研钵研碎后置于锥形瓶中，加乙醇10 ml后密塞，超声15 min，滤过，将滤液置于蒸发皿中，水浴蒸干。用2 ml乙醇溶解残渣，即得供试品溶液。精密称取盐酸小檗碱对照品0.5 mg，置1 ml容量瓶中，加甲醇少量溶解，然后加甲醇置刻度，即得0.5 mg/ml的对照品溶液。照薄层色谱法，分取上述溶液各2 μl，点于硅胶G薄层板上，置层析缸内展开(乙酸乙酯∶丁酮∶甲酸∶水为10∶7∶1∶1)，取出晾干于365nm紫外光下检视[5]。

2.3 含量测定本品的内控质量标准药材为黄连，其测定目标成分为盐酸小檗碱[6]。

2.3.1 色谱条件与系统性实验色谱柱为DiarnonsilTM Cl8、流动相为0.033 mol/L 磷酸二氢钾溶液:乙腈(70∶30)，设定流速(1.0 ml/min)，检测波长(265 nm)，柱温(25 ℃)，进样量为每次10 μl，理论塔板数(以盐酸小檗峰计算)不小于4000。

2.3.2 对照品溶液的制备精密称定盐酸小檗碱对照品9.95 mg，置于50 ml容量瓶中，先用少量盐酸甲醇溶液(1∶99)溶解后，再稀释至刻度作为贮备液(0.199 mg/ml)。精密量取1 ml上述贮备液置于10 ml 容量瓶，用流动相稀释至刻度，即得对照品溶液。

2.3.3 供试品溶液的制备取糖尿康片10片，研碎过3号筛，糖密称取0.40 g至锥形瓶中，加入盐酸甲醇溶液(1∶99)25 ml，密塞。精密称定重量后，放置水浴锅中加热(温度60 ℃、时间15 min)，然后超声30 min后取出，放至室温后精密称定重量，用盐酸甲醇溶液(1∶99)补足损失的重量(与第1次相比)。混匀后过滤，精密量取1 ml续滤液置10 ml容量瓶，用流动相稀释至刻度，即得供试品溶液。

2.3.4 供试品溶液的制备取样品10片，研细，过3号筛，精密称定0.4 g，加入盐酸:甲醇溶液(1∶99)25 ml，精密称定重量，60 ℃水浴中加热 15 min，取出，超声处理 30 min，室温放置过夜，精密称定重量，用盐酸∶甲醇溶液(1∶99)补足减失的重量，摇匀，过滤，精密量取续滤液1 ml，置10 ml 量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得。

2.3.5 测定分别将对照品溶液和供试品溶液注入液相色谱仪中，以峰面积按外标法进行测定并计算。

2.3.6 线性关系考察精密量取对照品贮备液0.6 ml、0.8 ml、1.0 ml、1.2 ml、1.4 ml，分别置 10 ml 量瓶中，用流动相稀释至刻度，则上述对照品的浓度分别为11.94 μg/ml、15.92 μg/ml、19.90 μg/ml、23.88 μg/ml、27.86 μg/ml，以上述色谱条件进样(各20 μl)，按上述色谱条件进样，进样量分别为 0.2388 μg、0.3184 μg、0.3980 μg、0.4776 μg、0.5572 μg。

2.3.7 精密度实验以上述对照品溶液进行重复进样5次。

2.3.8 稳定性实验以上述供试品溶液每隔2 h进行进样，共6次。

2.3.9 重复性实验以上述方法分别制备5份供试品溶液，进行测定。

2.3.10 加样回收率实验精密称定适量已知含量的样品6份，分别精密加入12 ml对照品溶液，照上述方法测定并计算回收率。

2.3.11 样品含量测定取2批次样品，照上述供试品制备方法制备并测定其中盐酸小檗碱含量。

2.3.12 空白实验取阴性模拟制剂(不含黄连)，照上述方法制备供试品并进行测定。

3 结果

3.1 浸出物糖尿康片冷浸物平均含量为0.3220 g。见表1。

表1 糖尿康片浸出物含量

3.2 线性关系以盐酸小檗碱的进样量 X(μg)对峰面 Y进行线性回归(n=5)，得回归方程：Y=4.3223×107X-1.7298×105，r=0.9999。结果表明：盐酸小檗碱在 0.2388～0.5572 μg 范围内的线性关系良好。

3.3 精密度实验盐酸小檗碱峰面积的RSD值为1.24%(n=5)。见表2。

表2 精密度实验

3.4 稳定性实验盐酸小檗碱的 RSD 为 1.46%(n=6)。见表3。

表3 稳定性实验

3.5 重复性实验5份供试品测得盐酸小檗碱的RSD 为 0.95%(n=5)见表4。

表4 重复性实验

3.6 加样回收率实验取6组样品，依法进行回收率测定。见表5。

表5 6组样品加样回收率测定

3.7 样品含量测定取3批样品，按供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定其中盐酸小檗碱含量。见表6。

表6 3批样品盐酸小檗碱含量测定

3.8 空白实验照上述方法制备阴性溶液(不含黄连)，照TLC法测定，于365 nm紫外光下检视与对照品溶液相应的位置上，未呈现相同的荧光斑点。

4 讨论

糖尿康片是由开封市中医院庞国明主任医师在多年的临床经验和参考前人治疗糖尿病经验的基础上，总结出的经验方。本研究在糖尿康片一般制法的基础上，应用超微粉碎对其原料进行处理后按一般工艺制片，对新工艺下糖尿康片的质量标准进行研究，探讨其稳定性、可行性。

本组实验结果显示，应用冷浸法处理糖尿康片，其浸出物的平均含量为0.3220 g，RSD为0.63%，说明经超微粉碎处理，其浸出物含量较稳定；此外，线性实验结果显示，盐酸小檗碱对照品在 0.2388～0.5572 μg 范围内的线性关系较为良好。而且以对照品溶液进行重复进样5次，其RSD值为1.24%，表明该仪器精密度良好；在相同的色谱条件下，于室温0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、10 h、12 h后依次进样进行测定，其RSD 为 1.46%，提示盐酸小檗碱供试品在12 h内较为稳定；以同一样品重复制作5份供试品溶液，测定其盐酸小檗碱含量，RSD为1.50%，提示该实验有较好的重复性；精密称定适量已知含量的样品6份，分别精密加入对照品溶液，测得盐酸小檗碱的平均回收率为100.35%，RSD值为0.17%。最后对2批糖尿康片分别进行测定，2批次糖尿康片中盐酸小檗碱的平均含量分别为2.82 mg和2.84 mg，总平均含量为每片2.83 mg。

综上所述，应用本次实验方法制备供试品效果好，干扰成分少，各组分的分离能够达到实验目的，此次研究中建立的质量控制方法对超微粉制备的糖尿康片切实可行，其方法简单，且精密度、重复性良好，结果差异小，准确度高，适用于此工艺下制备的糖尿康片质量控制。