含乳饮料中乙酰磺胺酸钾的检测方法优化

□ 谢 衍 中央储备粮梧州直属库有限公司

乙酰磺胺酸钾又名安赛蜜，为人工合成甜味剂，易溶于水，难溶于乙醇等有机溶剂，在空气中不吸湿，对热、酸稳定，是目前世界上稳定性最高的甜味剂之一。乙酰磺胺酸钾可与其他甜味剂混合使用，适用于烘烤食品、酸性饮料及供糖尿病人的食品和低能量食品中[1]。

安赛蜜在1983年被FAO/WHO联合食品添加剂专家委员会列为A级食品添加剂，并推荐日均摄入量为0～ 15 mg/kg。安赛蜜在人体内不代谢、不积蓄，100%以原形物质从尿中排出体外[2-3]。在GB 2760-2014中，对于饮料类，乙酰磺胺酸钾的限值 为0.3g/kg[4]。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

市售乳饮料，4份；甲醇，色谱纯；乙腈，分析纯；乙酰磺胺酸钾标准品，纯度99.0%，Dr.Ehrenstorfer GmbH。乙酰磺胺酸钾标准贮备液：称取纯度为99%的乙酰磺胺酸钾标准品10.50 mg到10.00 mL容量瓶，用水定容至刻度，摇匀，配制成浓度为1.039 5 mg/mL的溶液。亚铁氰化钾溶液（92 g/L）：称取92 g亚铁氰化钾，加入适量水溶解，用水定容至 1 000 mL。乙酸锌溶液：称取22.0 g乙酸锌溶于少量水中，加入30 mL冰乙酸，用水定容至100 mL。10%硫酸溶液：量取10 mL浓硫酸，慢慢用水定容至100 mL。其余有机试剂均为国产分析纯。

1.2 仪器与设备

1290液相色谱仪，美国安捷伦科技有限公司；AllegraX-15R离心机，美国贝克曼公司；CPA2250电子分析天平，赛多利斯科学仪器（北京）有限公司；VXR振荡器，德国IKA公司。

1.3 方法

1.3.1 色谱条件

色谱柱：JADE-PAK ODS-AQ 3.5 μm 100 mm×2.1 mm；流动相：0.02 moL/L乙酸铵-甲醇（90∶10）；流速： 0.40 mL/min；柱温：35 ℃；检测波长：214 nm；进样量：1 μL。

1.3.2 GB/T 5009.140-2003的方法

取样品2.50 g，加水约20 mL摇匀后，离心15 min，待水溶液流至柱表面时，用0.02 mol/L硫酸铵-甲醇-乙腈-10%硫酸洗脱。收集洗脱液 25 mL，摇匀，经0.22 μm微孔滤膜过滤，进高效液相色谱仪分析。

1.3.3 改进方法

取样品2.50 g至50 mL离心管，加水20 mL，加入乙酸铅2 mL和亚铁氰化钾2 mL，用水定容至 25.0 mL，振荡离心3 min，取上清液5.00 mL至15 mL离心管中，再加入1.00 mL10%硫酸和5.00 mL乙腈，振荡2 min，离心3 min，上清液乙腈层经0.22 μm微孔滤膜过滤，进高效液相色谱仪分析。

2 结果与分析

2.1 GB/T 5009.140—2003检测方法

2.1.1 国家标准方法检测结果

取市售的某4种含乳饮料，编号分别为T1、T2、T3和T4。称取这4种样品各2.50 g（精确到0.01 g），每份样品称取2份，并按照GB/T 5009.140-2003的方法进行检测，得到结果：T1为125 mg/kg，T2为 138 mg/kg，T3为230 mg/kg，T4未检出。

2.1.2 国家标准方法的回收率

称取4份T4样品各2.50 g，编号为T4-ADD-1、T4-ADD-2、T4-ADD-3和T4-ADD-4加入乙酰磺胺酸钾标准溶液0.80 mL，余下步骤按照GB/T 5009.140-2003的方法测定乙酰磺胺酸钾的含量，回收率分别为90.8%、92.2%、91.9%和95.6%，平均回收率为92.6%。

2.2 改进方法

2.2.1 标准曲线

精密吸取乙酰磺胺酸钾标准贮备液0.10 mL、0.20 mL、0.30 mL、0.40 mL、0.60 mL和1.20 mL分别至 不同的20.00 mL容量瓶，用乙腈稀释至刻度，摇匀，配制成浓度为 5.197 5 μg/mL、10.395 μg/mL、20.790 μg/mL、41.580 μg/mL、62.370 μg/mL和127.74 μg/mL的标准系列溶液。结果表明，乙酰磺胺酸钾在5.1975～127.74μg/mL浓 度 范围内线性关系良好。

2.2.2 改进方法的精密度试验

取浓度为62.370 μg/mL的乙酰磺胺酸钾标准溶液，按照改进方法连续进样5次。得到5次乙酰磺胺酸钾的响应值，其响应值的相对标准偏差为0.6%，小于2%，表明该方法精密度良好。

2.2.3 样品的测定

取编号为T1、T2、T3、T4的4批含乳饮料，按改进方法进行检测，结果：T1为132 mg/kg，T2为 132 mg/kg，T3为220 mg/kg，T4未检出。检测结果表明，用国家标准方法检测的结果与改进方法检测的结果相近。

2.2.4 改进方法的回收率试验

称取T3样品2.50 g（精确到0.01 g)共9份，编号分别为A、B、C、D、E、F、G、H、I。其中A、B、C样品加入乙酰磺胺酸钾标准溶液0.40 mL；其中D、E、F样品加入乙酰磺胺酸钾标准溶液 0.80 mL；其中G、H、I样品加入酰磺胺酸钾标准溶液1.20 mL，然后按改进方法进行检测。结果表明，该方法的回收率在91.71%～99.46%，RSD为0.8%～1.9%，说明该方法的结果稳定，数据可靠。

2.2.5 改进方法的空白试验

不称取样品溶液，余下步骤按改进方法操作。结果显示，空白试验无干扰，对检测结果没有影响。

2.2.6 改进方法的重现性试验

称取6份T1样品各2.50 g，编号分别为T1-1、T1-2、T1-3、T1-4、T1-5和T1-6，按照改进方法操作，6份样品响应值分别为：134.1 mg/kg、 131.1 mg/kg、131.5 mg/kg、 129.3 mg/kg、134.2 mg/kg和 134.3 mg/kg，乙酰磺胺酸钾含量平均值为132 mg/kg，RSD为1.6%。结果表明，该改进方法的重现性好，结果稳定。

2.2.7 改进方法的检出限试验

取T4样品2.50 g，加入0.15 mL浓度为62.370 μg/mL的乙酰磺胺酸钾标准液，然后按改进方法操作，得到检出限溶液，按1.3.1中色谱条件进行测定，得到乙酰磺胺酸钾的信噪比为7，检出限为3.8 μg/g，优于GB/T 5009.140-2003中4 μg/g的检出限值。

2.3 结论

在改进方法探究中，可先用水稀释样品，再利用亚铁氰化钾溶液和乙酸锌溶液反应产出沉淀的原理除去含乳饮料中的蛋白质，然后利用2 g无水硫酸镁和0.5 g氯化钠、10%硫酸和乙腈进行富集、净化，从而促使操作简单化。

3 结论

本文采用的改进方法通过用水稀释样品，用蛋白质沉淀剂除去含乳饮料中的大量的蛋白质。利用乙酰磺胺酸钾呈弱酸性的特点，在酸性条件下，抑制乙酰磺胺酸钾电离，并且利用乙腈和饱和盐溶液分层的特点，从而得到乙腈层。高速离心让水相乙腈层更好的分层，从而对样品进行净化，并把乙腈层过滤，上机测定。

结果表明，改进后的方法在 5.197 5～127.74 0 μg/mL范 围 内，相关系数为0.999，呈良好的线性关系；精密度与重现性的RSD均小于2%，满足国家标准的要求；平均回收 率 为91.77%～99.46%，RSD为0.8%～1.9%；方法检出限为3.8 μg/g，优于国家标准4 μg/g；市售的4批含乳饮料通过改进方法与国家标准方法检测相比，结果相近，精密度均小于国家标准10%的要求。由此可见，该方法有较高的可靠性和准确性。