1 935例妊娠期女性阴道微生态及B族链球菌检测结果分析

邱德稳,钟 师,汤 旭,曾 辛

江西省妇幼保健院检验科，江西南昌 330006

女性阴道是一个处于动态平衡的微生态系统，该系统包括阴道微生物菌群组成、阴道局部的解剖构造、内分泌系统和免疫系统4个部分。正常情况下，乳酸杆菌是阴道菌群中的优势菌，维持着阴道内的酸性环境，但是由于某些原因，如年龄增大、月经紊乱、药物和不洁性行为等可引起阴道微生态平衡被破坏，其他病原微生物取代乳酸杆菌成为优势菌，进而引发阴道、宫颈的炎症及其他生殖系统疾病[1-3]。妊娠期是女性的一个特殊生理时期，受雌激素和孕激素水平持续增高及机体免疫抑制的影响，妊娠期女性阴道内环境和微生物菌群会发生相应的变化，使女性更易发生阴道感染，而妊娠期的阴道感染又会造成胎膜早破、宫内感染、自发性早产和新生儿感染等一系列不良的妊娠结局[4-7]。B族链球菌(GBS)是一种可能导致不良妊娠结局和新生儿严重感染的革兰阳性球菌。通常情况下，GBS是一种寄居于直肠和阴道的条件致病菌，健康人只是带菌，并不致病，但在妊娠期，由于激素水平的变化，阴道前庭腺体和阴道分泌物增加，外阴处于湿润状态，容易导致GBS大量繁殖[8]。研究表明，妊娠期GBS感染不仅可引起胎膜早破、早产及新生儿的感染，还可导致母体产时和产后感染。本研究拟通过对南昌地区1 935例妊娠期女性阴道微生态和GBS检测结果的分析，了解妊娠期女性阴道微生态和GBS的定植状况，为科学指导本地区妊娠期女性阴道感染性疾病的防治提供依据。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2019年7月至2020年6月在本院产检的妊娠期女性1 935例为研究对象，年龄23～45岁，平均(32.3±4.9)岁。按照年龄分为3组：≤26岁(361例)、>26～<36岁(1 134例)、≥36岁(440例)；按照孕周分为3组：孕早期组(妊娠0～13周，517例)、孕中期组(妊娠>13～27周，985例)、孕晚期(妊娠>27～40周，433例)；按是否感染GBS分为GBS阳性组(135例)和GBS阴性组(1 800例)。所有研究对象在研究开始前均无阴道用药史且无任何检查禁忌证并排除其他妊娠期疾病。本研究所有研究对象均知情同意，本研究获得本院伦理委员会审批。

1.2方法

1.2.1标本采集 用蘸有生理盐水的无菌棉签在阴道侧壁1/3处及后穹隆处旋转3圈以上，采集阴道分泌物标本3份，立即送检。

1.2.2盐水湿片显微镜镜检 (1)制片：将1份采集的阴道分泌物标本直接均匀涂在滴有生理盐水的玻片上。(2)镜检：低倍镜下观察有无滴虫、假丝酵母菌菌丝等；高倍镜下观察白细胞、上皮细胞、杆菌、球菌的数量，寻找有无假丝酵母菌菌体及孢子并对标本进行需氧菌性阴道病(AV)评分。

1.2.3comet-800阴道微生态检测分析系统检测 取第二份阴道分泌物标本上机进行阴道微生态检测。检测分为两个部分：(1)干化学，检测过氧化氢酶、白细胞脂酶、唾液酸苷酶和pH值；(2)革兰染色，阴道分泌物标本涂片后干燥固定，革兰染色后使用该系统在油镜下检测标本的菌群情况，包括乳酸杆菌比例、菌群密集度、菌群多样性及Nugent评分，并对该标本的微生态状况进行评价。

1.2.4荧光定量PCR检测GBS感染情况 取第3份标本行荧光定量PCR检测，检测严格按照操作说明书进行。

1.3评判标准 (1)阴道微生态平衡：乳酸杆菌比例≥70%；其他杂菌<30%；菌群密集度2～3个“+”；菌群多样性2～3个“+”；白细胞0～10个/高倍镜视野且无脓细胞及其他特殊病原体。(2)阴道微生态失衡：观察或检测到线索细胞或唾液酸苷酶阳性且Nugent评分≥7分，判定为细菌性阴道病(BV)；AV评分≥3分，判定为AV；观察或检测到假丝酵母菌菌丝、菌体或孢子，判定为外阴阴道假丝酵母菌阴道病(VVC)；观察或检测到阴道毛滴虫，判定为滴虫性阴道炎(TV)；检测到两种或两种以上项目则判定为多重感染；未检测到特殊病原体判定为未明确特殊病原体。

1.4统计学处理 所有数据均采用GraphPad Prism 8.0软件进行分析，计数资料以例数或百分率表示，组间比较采用χ2检验或Fisher确切概率法。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1所检标本的总体情况 1 935例女性阴道分泌物标本中，阴道微生态平衡者1 379例，占所检标本的71.3%，失衡者556例，占所检标本的28.7%。阴道微生态失衡者检出情况：VVC 304例，占15.7%；BV 85例，占4.4%；TV 5例，占0.3%；AV 8例，占0.4%；多重感染52例，占2.7%。另有未明确特殊病原体微生态失衡者102例，占5.3%。所检标本中，GBS阳性者135例，占7.0%，所有GBS阳性者阴道微生态均失衡；GBS阴性者中阴道微生态失衡421例，占21.8%。

2.2不同孕期组妊娠期女性阴道微生态结果分析 不同孕期组的妊娠期女性阴道微生态失衡状况总体上差异有统计学意义(χ2=37.91，P<0.05)。孕期的3个阶段中，孕晚期的失衡率最高(37.41%)，孕中期次之(30.25%)，孕早期最低(18.57%)。不同微生态失衡类型中BV、VVC和多重感染在3组中的差异有统计学意义(P<0.05)。其他类型的微生态失衡在不同孕期组的差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 不同孕期组妊娠期女性阴道微生态检测阳性结果[n(%)]

2.3不同年龄组妊娠期女性阴道微生态结果分析 不同年龄组的妊娠期女性阴道微生态失衡状况差异无统计学意义(χ2=1.420，P>0.05)，不同微生态失衡类型(BV、AV、VVC等)的失衡率在不同年龄组的差异均无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 不同年龄组妊娠期女性阴道微生态检测阳性结果分析[n(%)]

2.4GBS阳性组与GBS阴性组妊娠期女性阴道微生态结果分析 采用Fisher确切概率法对GBS阳性组与阴性组的阴道微生态状况进行分析发现，GBS阳性组与GBS阴性组在BV、VVC、多重感染这3种类型的感染率差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 GBS阳性组与GBS阴性组的感染率分析[n(%)]

3 讨 论

健康女性阴道内微生态平衡的维持主要依靠阴道菌群和阴道内部环境的相互制约、相互拮抗。病理状态下，随着妊娠期女性雌激素水平的不断升高，阴道黏膜复层鳞状上皮细胞的通透性增加，黏膜的屏障功能减弱，可能造成阴道菌群紊乱[9-10]。GBS是一种革兰阳性条件致病菌，主要依靠其产生的相关毒素和侵袭性酶如链球菌溶血素、链激酶、透明质酸酶等致病。妊娠期女性如果发生GBS感染会对其自身及胎儿造成严重影响。有研究已经证实，GBS是造成围生期感染的主要病原菌之一，在围生期感染原因中占首位,能引起早产，胎膜早破，新生儿败血症、肺炎、脑膜炎等不良妊娠结局，已引起临床广泛重视[11]。

本研究通过对2019年7月至2020年6月在本院产检的1 935例妊娠期女性的阴道微生态系统进行检测，了解本地区妊娠期女性的阴道微生态和GBS感染状况。检测结果显示，所检标本总体的微生态失衡率为28.7%，在不同的微生态失衡类型中，VVC的感染率最高(15.7%)，与陈涛等[12]的研究结果基本一致。VVC感染率高的原因：一方面可能是因为妊娠期女性雌激素分泌增加，阴道内糖原的水平升高[13]，从而影响阴道内的酸性环境，使得以糖原为生的乳酸杆菌减少；另一方面可能与妊娠期不良的生活习惯有关[14]。不同孕期的妊娠期女性阴道微生态失衡总体上差异有统计学意义(P<0.05)，其中孕晚期的失衡率最高，孕早期失衡率最低。BV、VVC及多重感染在不同孕期的感染率差异有统计学意义(P<0.05)，其他类型的微生态失衡在不同孕期的感染率差异无统计学意义(P>0.05)。本研究还发现，GBS在妊娠期女性中的感染率为7.0%，低于曹清芸等[15]的研究结果(10.1%)。GBS阳性患者中，VVC的感染率最高，达65.18%。此外，GBS阳性组的BV、多重感染率也显著高于GBS阴性组，与蒋玉等[16]的研究基本一致。

目前，关于年龄对阴道微生态影响的研究存在一定争议，一项国外的研究表明，年龄与各种内源性及外源性的因素共同影响阴道的微生态系统[17]。也有研究表明，26～33岁的妊娠期女性阴道微生态状况最好(较低的阴道pH值、较高的乳酸杆菌优势率)[18]。但是陈涛等[12]的研究却发现，年龄并不是影响妊娠期女性阴道微生态状况的决定因素。本研究也发现，不同年龄组的妊娠期女性阴道微生态失衡率差异无统计学意义(P>0.05)，说明年龄可能并不是影响妊娠期阴道微生态失衡的主要因素。

妊娠期女性阴道微生态状况在很大程度上影响妊娠结局，孕晚期较高的微生态失衡率要求临床医师要高度重视这一时期妊娠期女性的阴道微生态状况，对一些已经出现症状的妊娠期女性，要及时采取针对性的治疗措施以恢复其微生态平衡，对未出现症状的妊娠期女性也要定期检查以期获得良好的妊娠结局。总之，要充分重视妊娠期特别是孕中晚期女性的阴道微生态状况，加强孕期检查，降低不良妊娠结局的发生率，切实保障母婴安全。