青海不同产区羌活抗菌活性比较

李美雎，刘 叶，尚 军，陈海娟

(青海师范大学生命科学学院，青海 西宁 810008)

羌活为伞形科植物羌活(Notopterygiumincisum)或宽叶羌活(Notopterygiumforbesii)的干燥根茎和根。性味与归经：辛、苦，温，归膀胱、肾经。功能与主治：散寒、驱风除湿、止痛。用于风寒感冒，头痛项强，风湿痹痛，肩背酸痛[1]。羌活化学成分复杂，主要含有香豆素、挥发油、甾醇、氨基酸、有机酸等[2～7]。其中羌活含有2个活性成分falcarindiol(镰叶芹二醇)和phenethyl ferulate(苯乙基阿魏酸酯)，对金黄色葡萄球菌有明显的抗菌活性[8，9]。

实验通过天然药物体外抗菌活性筛选方法，筛选出羌活抗菌活性部位，并以金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、产气杆菌(Enterobacteraerogenes)、大肠杆菌(Escherichiacoli)、变形杆菌(Proteusvulgaris)、阴沟肠杆菌(Enterobactercloacae)、铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)、粪肠球菌(Enterococcusfaecalis)评价不同产地羌活抗菌活性，以期为羌活抗菌活性药物开发提供基础数据。

1 研究方法

1.1 材料

1.1.1 仪器 隔水恒温培养箱、可调微量移液器(1 000 μL、200 μL、50 μL)、超声波清洗器 (SB-5200TDT)、立式压力蒸汽灭菌锅(LS-35HD)、无菌操作台、台式低速离心机(TD5A)。

1.1.2 药品与药材 取采挖于青海省红军沟、松多、久治、大通、互助等地的羌活药材，将其粉碎后过60目筛，密闭保存，备用。阳性药物青霉素钠购买于中诺药业(石家庄)有限公司。

1.1.3 实验菌株 金黄色葡萄球菌、产气杆菌、大肠杆菌、变形杆菌、阴沟肠杆菌、铜绿假单胞菌、粪肠球菌这7株用于羌活活性部位筛选和抗菌活性比较的指示菌均来自于中国普通微生物菌种保藏中心，于-20 ℃低温冰箱冻存，实验前3～4 h复活使用。

1.2 方法

1.2.1 羌活抑菌活性部位制备 将羌活药材粉碎，过60目筛，以料液比1∶8，用无水乙醇超声提取2 h，共3次，过滤，合并滤液，减压浓缩，得羌活粗提取物浸膏。加水将其制成混悬液，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，浓缩，干燥，备用。

1.2.2 供试品溶液的制备 精密称定各羌活提取物，加入1 mLDMSO超声溶解，摇匀，精密量取0.2 mL样品液于10 mL容量瓶中，加25%的DMSO定容至刻度，即供试品溶液。

1.2.3 阳性药溶液的制备 将青霉素钠(80万单位)用25%DMSO稀释至5万单位；空白组设为25%DMSO溶液。

1.2.4 菌悬液的配置 将实验菌活化后，加入无菌水轻轻刮下菌苔并按1∶9的比率稀释成1×104倍，即菌悬液，备用。

1.2.5 抑菌活性考察

1.2.5.1 给药方案及分组 空白组加入240 μL25%DMSO溶液；阳性组加入240 μL5万单位青霉素钠；实验组加入240 μL羌活不同部位供试品溶液，每组设3个平行组，重复3次。

1.2.5.2 抑菌活性部位筛选及比较 在无菌条件下，用营养琼脂培养基制备不同产地的羌活抑菌活性部位，运用牛津杯法考察羌活不同提取部位的抗菌活性，用游标卡尺测量抑菌圈直径并记录数据。

1.2.6 数据处理 数据分析采用SPSS17.0进行方差分析，数据以x±s(此公式表示数值偏差平均数的变动范围，其中x表示平均数，s表示方差)表示。

2 结果与分析

2.1 羌活不同部位的抑菌作用

由表1可知，羌活5个活性部位对粪肠球菌和大肠杆菌均表现出较强的抗菌效应，与空白对照组相比除了水层对粪肠球菌和大肠杆菌抗菌效应差异不显著外，其它部位差异有统计学意义(P<0.01)。且不同部位间的抗菌效应强弱不同，其中石油醚、水层及正丁醇3个部位对粪球菌抑菌效应差异不显著，无统计学意义(P<0.05)；水层部位对大肠杆菌抑菌效应差异不显著，无统计学意义(P<0.05)；氯仿部位与其它4个部位相比，对两种菌的抑菌效应均较强，差异极显著(P<0.01)，故选取氯仿部位作为宽叶羌活抑菌活性部位。

表1 羌活不同部位间的抑菌作用

2.2 不同产地羌活的抑菌作用

由表2可知，不同产地羌活对受试菌均表现出一定的抗菌活性。与空白组相比红军沟、互助、大通产地羌活均有统计学意义(P<0.05或0.01)；松多、久治产地羌活除对铜绿假单胞菌的抑菌效应无统计学意义之外，对其它菌的抑菌效应均具有统计学意义(P<0.05或0.01)。其中，对阴沟肠杆菌抗菌效应最强的是红军沟产地的羌活，显著高于其它产地羌活，差别有统计学意义(P<0.05或0.01)；对大肠杆菌抗菌效应最强的是松多产的羌活，显著高于其它产地羌活，差别具有统计学意义(P<0.05或0.01)；对产气杆菌抗菌效应最强的是松多产的羌活，显著高于久治产的羌活，差别具有统计学意义(P<0.05或0.01)，与其它产地羌活差别不显著；对变形杆菌抗菌效应最强的是红军沟产地的羌活，与其它产地羌活差别不显著；对粪肠球菌抗菌效应最强的是红军沟产地的羌活，显著高于其它产地羌活，差别具有统计学意义(P<0.05或0.01)；对铜绿假单胞菌抗菌效应较弱，整体效果不佳；对金黄色葡萄球菌抗菌效应最强的是久治产的羌活，与互助产羌活相比差异显著(P<0.05或0.01)，与其它地区产羌活差异不显著。

表2 不同产地羌活抑菌作用比较

3 讨论

自从磺胺类药物和青霉素应用于临床上，抗菌药物得到广泛使用，但是细菌对抗菌药物产生耐药性的问题也日益突出，严重威胁人类健康，中药发展几千年的实践经验证明不少中药具有抗菌活性、副作用小、很少产生耐药性等特点，现在人们更倾向于选择中药进行抗菌研究[10]。有研究报道，复方川紫方具有抗菌消炎、通络止痛、行气活血散瘀等功能，由川芎、紫草、羌活等十余味药组成[11]。

不同产地羌活对受试菌均表现出一定的抗菌活性，但对每一种菌的抗菌活性表现出一定的选择性，提示羌活氯仿活性部位具有广谱抗菌效应，可作为羌活抗菌药物开发物质基础。经过体外抗菌活性筛选实验结果表明，羌活的石油醚、氯仿、乙酸乙酯、水层、正丁醇5个活性部位，具有不同的抗菌效应，其中氯仿部位较其它部位抗菌效应更强(P<0.05)；不同产地羌活抗菌活性体现不一样，对7个胆囊炎相关菌的作用不同，与空白组相比，红军沟、互助、大通产地的羌活抗菌活性显著高于对照(P<0.05或0.01)，松多、久治产地的羌活除对铜绿假单胞菌的抑菌效应无差异，对其它菌的抑菌效应显著增加(P<0.05或0.01)。由于本实验将人体给药最大剂量换算为体外给药剂量，所以关于羌活氯仿活性部位量效关系还有待于进一步研究。