黄瓜籽蛋白对颈总动脉血栓模型大鼠血清TXB26-keto-PGF1α和T-PA的调节作用

王 萍，陈丽艳，孙银玲，姚 琳，董 坤，高 辛，王伟明

(黑龙江省中医药科学院·黑龙江 哈尔滨 150036)

随着生活质量的提高，血管栓塞性疾病的发病率逐年提高，成为人口死亡的主要原因[1]。针对抗栓药物存在的问题，亟须开发一种副作用小的新型抗栓药物[2]。黄瓜籽为葫芦科植物黄瓜(CucumbersativusL.)的干燥成熟种子。据记载其具有续接筋骨、祛风等功效，主治骨折筋伤、风湿痹痛、老年痰喘[3]。前期研究结果表明，黄瓜籽生品和炮制品具有抑制血栓形成和抗凝血作用[4]。本文观察了黄瓜籽蛋白对颈总动脉血栓模型大鼠血清TXB2、6-keto-PGF1α、T-PA的调节作用，探讨其抗血栓机制。

1 材料

1.1 动物 健康成年SD大鼠，雌雄各半，体质量(200±20)g，由哈尔滨医科大学实验动物学部提供，合格证号：SCXK(黑)2019-001。

1.2 药物与试剂 黄瓜籽蛋白：黑龙江省中医药科学院自制，批号：20190306；蚓激酶肠溶胶囊：珠海博康药业有限公司批号：20181003。石油醚：宇富精细化工有限公司；氯化钠：天津市科密欧化学试剂有限公司；水合氯醛：成都市科龙化学试剂厂；三氯化铁：天津市致远化学试剂有限公司。大鼠血栓素B2(TXB2)、6-酮前列腺素F1α(6-keto-PGF1α)、大鼠组织型纤溶酶原活化剂(T-PA)试剂盒：均为南京建成科技有限公司

1.3 仪器 BSA224S型电子天平：赛多利斯科学仪器(北京)有限公司；KE·WEI RW-52AA型电热恒温水浴锅：北京六一仪器有限公司LG10-2.4A型高速离心机：北京京立离心机有限公司；M200多功能酶标仪：TECAN。

2 方法

2.1 黄瓜籽蛋白提取 取生黄瓜籽，粉碎后，加入石油醚，脱脂，离心过滤，药渣自然风干后，加入0.14 mol·L-1氯化钠溶液于4 ℃浸提8 h，取上清液加硫酸铵分级沉淀、透析、冻干得到黄瓜籽蛋白冻干粉，保存于-20℃冰箱备用[5-7]。

2.2 动物分组及给药方法 大鼠常规喂养3 d进行随机分组，模型对照组(生理盐水10 mL·kg-1·d-1)、阳性对照组(蚓激酶肠溶胶囊2 5000 IU·kg-1·d-1)和黄瓜籽蛋白低、中、高剂量组(黄瓜籽蛋白提取液5 000、25 000、12 5000 IU·kg-1·d-1)[8]，每组10只，连续灌胃给药14 d，末次给药1 h后用水合氯醛麻醉，采用FeCl3诱导大鼠颈总动脉血栓[9]，腹主动脉取血，收集样本血液后，3 000 r·min-1进行离心10 min,收集血清，分装备用。

2.3 大鼠血清TXB2、6-keto-PGF1α、T-PA检测 酶联免疫吸附分析法(ELISA)测定。按试剂盒操作即可

3 结果 见表1。

表1 各组大鼠血清TXB2、6-keto-PGF1αT-PA含量比较

4 讨论

目前对于黄瓜籽的研究报道较少，除了少量的关于黄瓜籽生品和炮制品具有抑制血栓形成和抗凝血作用的报道外[4]，在其提取成分的抗凝及溶栓方面的研究尚处于起步阶段。因此本研究对黄瓜籽蛋白的抗凝及溶栓作用进行了研究，为后续黄瓜籽的临床应用提供理论依据。

血栓是血液中的凝血因子被激活形成纤维蛋白原所致，血凝、抗凝和纤溶形成动态平衡[10-11]，而T-PA是人体血液中重要的纤溶酶原激活剂，能够激活体内纤溶系统的纤溶酶原，降解沉积血管壁的纤维蛋白为可溶性的片段[12]，维持机体凝血和抗凝血、纤溶系统的动态平衡，预防血栓形成。血栓素A2(TXA2)和前列环素(PGI2)是具有代表性的血管活性物质，其代谢产物TXB2与6-keto-PGF1α的平衡是诊断血栓病变的重要指标[13-14]。

本文实验结果表明，黄瓜籽蛋白可以降低血栓模型大鼠血清TXB2水平，升高T-PA、6-keto-PGF1α水平，证实其对于血栓模型大鼠具有抗凝溶栓作用。