贝克曼库尔特DXI800全自动化学发光分析仪检测雌二醇的性能验证

冯泓琳，邓 钫，张红星，康金锁

1.云南省阜外心血管病医院检验科，云南昆明 650000；2.中国医学科学院北京协和医学院阜外医院实验诊断中心，北京 100037

雌二醇水平检测被广泛应用于卵巢肿瘤、先兆流产等疾病的辅助诊断及临床治疗监测[1-2]，随着检验技术不断发展，检测雌二醇的方法越来越多，包括化学发光免疫分析法、放射免疫法、酶免疫测定法、酶联免疫吸附试验法、色谱法等，但化学发光免疫分析法因其自动化程度高、及时性强、灵敏度和特异度高等优点，被临床广泛应用[3]。由于激素类检测试剂盒也有其劣势，如灵敏度不能满足临床需求等，对于新型试剂盒，国内外相关指南要求在试剂应用于临床之前，实验室必须对检测系统的主要分析性能进行评价[4-5]。ISO[6]强调未经修改而常规使用已确认的检验程序前，应经过实验室的独立验证。实验室应从制造商或方法开发者处获得相关信息，以确定检验程序的性能特征。实验室进行的独立验证，应通过获取客观的证据证实检验程序的性能与其声明相符。卫生行业标准WS/T 420-2013[7]指出临床实验室应对所用的检验方法或商品试剂盒进行验证。根据CNAS-CL38[8]要求，性能验证内容至少应包括正确度、精密度和可报告范围。本文将根据美国临床和实验室标准协会(CLSI)颁布的EP系列文件，对贝克曼库尔特DXI800全自动化学发光分析仪检测新一代雌二醇试剂盒的精密度、正确度、线性范围、临床可报告范围和携带污染率进行验证和评价。

1 资料与方法

1.1一般资料 根据CLSI系列文件要求收集云南省阜外心血管病医院患者标本，所有标本离心后均无明显溶血、脂血、黄疸等，符合实验要求。按试剂说明书指示，标本在-20 ℃冰箱中最多可保存4周，有相关研究显示在-20 ℃冰箱中保存7 d对雌二醇检测结果无影响[9]。将标本分装后于-20 ℃冰箱冻存并在7 d内完成性能验证实验。

1.2仪器与试剂 美国贝克曼库尔特DXI800型全自动发光分析仪；新一代雌二醇原装配套试剂(货号B84493，批号966016)；配套校准品(批号988951)；美国Bio-Rad质控品(货号370，批号40371、40372、40373)。

1.3方法

1.3.1实验准备 实验前按厂商要求对贝克曼库尔特DXI800进行保养维护，每日完成室内质控，结果均显示合格，操作人员均规范培训，熟练掌握仪器操作和了解整个实验方案。

1.3.2精密度验证 根据EP15-A2[10]文件要求，配制低水平(260.11 pg/mL)、高水平(2 815.54 pg/mL)2个水平标本，2个水平已覆盖健康人和患者水平，每个水平每天重复测定4次，连续5 d。根据CLIA′88和卫生健康委员会室间质量评价中雌二醇允许总误差(TEa)为25%的要求，将验证结果与CLIA′88规定的TEa进行比较，判断其不精密度是否可以接受，批内变异系数(CV)<1/4TEa，总CV<1/3TEa[11-12]，结果属于临床可接受水平，验证通过。

1.3.3正确度验证 根据EP15-A2[10]和CLIA′88文件要求，本研究选择偏倚评估的方法，选择国家卫生健康委临床检验中心2020年第二次内分泌室间质评的5份内分泌室间质评质控品进行验证，计算均值与室间质评质控品靶值的偏倚，偏倚<1/2TEa认为偏倚属于临床可接受水平，验证通过。

1.3.4线性范围验证 根据EP6-A[13]和WS/T 408-2012[14]文件要求，推荐验证实验采用4～6个水平，本实验选择覆盖仪器说明书标识线性范围(15～5 200 pg/mL)的高水平(5 032.31 pg/mL)、低水平(31.26 pg/mL)标本各一份，将高水平和低水平按0∶4、1∶3、2∶2、3∶1、4∶0的比例配制成5个水平，每个水平测定2次。以X表示理论值，Y表示实测值，用直线回归方程对数据进行统计，得直线回归方程Y=bX+a，计算r，得到的线性范围与厂家声明的比较，在线性范围内且b在1.00±0.03范围，r≥0.990，每个水平的实测值与理论值的偏差≤1/2TEa为通过。

1.3.5临床可报告范围验证 根据EP6-A[13]和CNAS-GL037[15]文件要求，选择高水平(水平超过厂家标识的线性范围上限值)标本。将高水平(9 801.22 pg/mL)标本用生理盐水稀释到水平接近线性范围的上1/3区域内，记录稀释倍数，重复测定3次，记录原始数据，计算回收率(R)，R=测定值/理论值×100%，R可接受范围为90%～110%，可接受范围内最大的稀释倍数为超过线性范围上限标本的最大稀释倍数。临床可报告范围下限为线性范围下限，可报告范围上限为线性范围上限×最大稀释倍数。

1.3.6携带污染率验证 根据EP10-A2[16]文件要求，选择高水平(2 558.73 pg/mL)和低水平(22.14 pg/mL)标本各一份，依次测高水平标本3次(H1、H2、H3)、低水平标本3次(L1、L2、L3)，计算试验结果以公式携带污染率=|(L1-L3)|/|(H3-L3)|×100%计算。

1.4统计学处理 采用Excel2010和SPSS17.0统计软件进行数据分析，相关性分析采用Pearson相关，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1精密度验证 低水平、高水平标本雌二醇的批内CV分别为2.3%、5.5%，均<1/4TEa(6.25%)，总CV分别为4.5%、6.2%，均<1/3TEa(8.33%)，验证通过，结果见表1。

表1 精密度验证结果

2.2正确度验证 临检中心室间质评质控品检测结果均值与靶值之间的偏倚在-1.55%～11.48%，均<1/2TEa(12.5%)，验证通过，结果见表2。

表2 正确度验证结果

2.3线性范围验证 线性范围验证5个不同比例稀释水平测定结果显示，测定均值与理论值的直线方程为Y=0.981X-25.592,b=0.981，r=0.997，P<0.05，满足要求(b在1.00±0.03范围内，相关系数r≥0.990)；最大稀释偏差绝对值在1.56%～11.88%，均<1/2TEa(12.5%)。结果见表3，散点图见图1。本研究验证的线性范围为26.87～5 089.79 pg/mL，与厂家声明的范围(15～5 200 pg/mL)接近，验证通过。

图1 雌二醇线性范围线性结果

表3 5个系列水平雌二醇检测结果

2.4临床可报告范围验证 将高水平(9 801.22 pg/mL)标本用生理盐水稀释2倍、4倍、5倍、6倍后，各重复检测3次取均值，计算R，R在90%～110%为合格，结果见表4。其中只有2倍稀释后结果(100.34%)合格，故雌二醇临床可报告范围为26.87～10 179.58 pg/mL。

表4 临床可报告范围结果

2.5携带污染率验证 本试验携带污染率为0.14%，符合要求(<1.0%)，验证通过。

3 讨 论

贝克曼库尔特DXI800全自动化学发光分析仪采用微粒子化学发光原理定量检测标本，与传统方法相比，具有准确度高、灵敏度高、稳定性好、无放射污染、检测速度快且操作简单等优点。虽然贝克曼库尔特DXI800全自动化学发光分析仪检测系统采用配套的试剂和标准品，但是每个实验室在水质、电压稳定性、实验室温湿度和人员操作习惯等方面存在差异，实际分析性能与厂家提供的性能参数不一定一致。良好的仪器性能是保证结果可靠性的前提条件，GB/T 22576-2008[17]明确指出，临床实验室使用厂家已严格评估的检验方法或试剂盒之前，应验证相关分析性能以证实在本实验室能达到厂家声明的性能指标。有关性能验证的文献较多，定量检测雌二醇的性能验证还鲜有文献报道，相关研究显示，雌二醇性能验证结果重复性好、正确度高、线性良好、灵敏度高，能满足临床实验室工作需要[12,18]。目前关于贝克曼库尔特DXI800全自动化学发光分析仪对新一代雌二醇试剂盒性能验证的相关文献较少，因此本研究依据CLIA′88、ISO15189和CLSI等标准文件的相关要求对新一代雌二醇试剂盒进行了性能验证。

精密度是指测量程序在相同条件下，对同一标本进行多次测量所得结果之间的一致性，是表示测定结果中随机误差大小程度的指标[11]。精密度是反映仪器性能的首要指标,也是其他性能验证评价的基础。本研究根据EP15-A2文件验证贝克曼库尔特DXI800新一代雌二醇试剂盒精密度。结果显示，低水平、高水平标本雌二醇的批内CV分别为2.3%、5.5%，均<1/4TEa，总CV分别为4.5%、6.2%，均<1/3TEa，均符合要求。说明新一代雌二醇试剂盒精密度高，重复性好，随机误差较小，可达到临床可接受水平。

准确度是表示检测结果是否可靠的重要指标之一。本研究根据EP15-A2[10]文件验证结果显示，临检中心室间质评质控品检测结果均值与靶值之间的偏倚在-1.55%～11.48%，均<1/2TEa，符合要求。因此新一代雌二醇试剂盒准确度高，检验结果可靠。

线性范围代表仪器的检测能力，关系到是否能为临床提供可靠的数据，线性范围越宽表示厂家提供的试剂更适用于临床[19]。本研究显示，所验证线性范围与厂家标识范围相近，在26.87～5 089.79 pg/mL内雌二醇具有良好的线性关系(r>0.990，P<0.05)，且最大稀释偏差<1/2TEa，符合要求，但此线性范围低值为26.87 pg/mL，略高于贝克曼库尔特试剂说明书低值15 pg/mL，表明不同实验室之间存在差异。临床可报告范围验证显示2倍稀释后结果合格，因此雌二醇临床可报告范围为26.87～10 179.58 pg/mL。说明新一代雌二醇试剂盒线性范围良好，可报告范围较宽,可以满足绝大部分临床标本的测量需求。

携带污染率是干扰检测结果准确性的重要因素之一，是标本检测前后受其他标本污染的情况。它是全自动化学发光分析仪内上一个标本的残留量相对于下一个标本的输入量加上一个标本的残留量的总体积比，它是一个常数，不受前后两个标本差值大小的影响[20-21]。本研究检测数据通过公式携带污染率=|(L1-L3)|/|(H3-L3)|×100%计算，结果为0.14%，符合要求(<1.0%)。表示仪器运行时标本之间交叉污染影响较小。

综上所述，本研究依据CLIA′88、ISO15189和CLSI等相关文件，在贝克曼库尔特DXI800全自动化学发光分析仪上对新一代雌二醇试剂盒进行性能验证，在每日严格把控质量的情况下，仪器精密度高，准确度高，线性范围良好，可报告范围较宽，且携带污染率低，结果均符合实验室质量要求，能够较好地满足临床需求。