抗中性粒细胞胞质抗体、抗心磷脂抗体联合β2-MG对早期糖尿病肾病诊断的应用价值

白芳 杨雪芬 马莹

(东营市人民医院肾内科，山东 东营 257091)

糖尿病肾病(DN)是现今发现的由糖尿病引起的严重性和危害性最大的肾脏损伤疾病，属于糖尿病微血管并发症之一。目前DN尚无特效治疗方式，临床期一旦出现大量蛋白尿，治疗往往难以奏效，因此对早期DN患者病情进行诊治至关重要〔1，2〕。现有临床诊断指标多是通过糖尿病的发病因素进行分析所得，大多为糖代谢指标、肾脏血流动力学指标、氧化应激指标、炎症指标等，其中β2-微球蛋白(MG)的表达情况及其与相关指标的联合检测在DN患者诊断的加之分析是当下研究的热点〔3〕。此外，众多学者通过研究发现自身抗体在DN的发生发展中发挥重要作用，主要包括抗心磷脂抗体(ACLA)、抗中性粒细胞胞质抗体(ANCA)，但关于自身抗体与β2-MG联合应用于DN诊断的研究报道甚少〔4，5〕。本研究通过对早期DN患者和早期糖尿病患者的自身抗体和β2-MG表达情况进行检测与分析，以期为DN患者的临床诊治提供理论依据。

1 资料与方法

1.1一般资料 经医学伦理研究委员会审核通过后，将2017年5月至2019年3月在东营市人民医院肾内科就诊的早期DN患者纳入DN组(60例)，男36例，女24例；体重指数(BMI)21～29 kg/m2，平均(25.61±1.86)kg/m2；年龄62～75岁，平均(73.56±9.32)岁；病程2～17年，平均(8.53±3.78)年。另将同期在医院内分泌科就诊的早期糖尿病患者纳入糖尿病组(60例)，男33例，女27例；BMI 22～30 kg/m2，平均(25.70±1.83)kg/m2；年龄61～77岁，平均(74.35±9.25)岁；病程2～16年，平均(8.26±3.32)年。纳入标准：①早期糖尿病患者符合世界卫生组织(WHO)糖尿病诊断标准中2型糖尿病的诊断要求〔6〕；②DN患者符合DN的相关诊断标准，并根据病史、临床表现、辅助检查或经肾脏活检病理检查确诊为DN者〔7〕；③根据Mogensen分期判断属于早期DN，即患者白蛋白排泄率为30～300 mg/24 h，尿白蛋白排泄率持续升高20～200 μg/min，尿白蛋白/尿肌酐为 30～300 μg/mg〔8〕；④精神正常，对研究知情且自愿参与；⑤无恶性肿瘤病史；⑥所有DN患者为2型糖尿病继发。排除标准：①遗传因素所致DN者；②伴有心、肝、脑等重要器官功能严重障碍者；③尿病急性代谢紊乱性疾病(酮症酸中毒等)者；④严重传染性疾病、酒精成瘾史、药物滥用史、肾功能损伤病史及肾脏疾病史；⑤伴有紫癜性肾炎、系统性红斑狼疮性肾炎等疾病。两组一般资料差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性，且所有患者知情同意。

1.2方法 所有患者入组后给予临床常规基础对症治疗。并于治疗前对两组各项指标进行检测，主要为自身抗体和血清指标。包括ACLA、ANCA及β2-MG，其中ANCA包括核周型ANCA (pANCA)、胞质型ANCA (cANCA)、不典型 ANCA(aANCA)，比较两组抗体及β2-MG表达情况，并对各项指标与DN的相关性进行Logistic回归分析，比较各检测方法准确性。

1.2.1检测标本 分别采用真空无抗凝管抽取两组空腹静脉血 3～6 ml，3 000 r/ min离心10 min后，采用1.5 ml Eppendorf 管取血清，并保存于 -20℃待测。

1.2.2检测方法 所有仪器为德国罗氏诊断有限公司提供的免疫分析系统(型号：cabas 8000)。①pANCA、cANCA、aANCA水平采用间接免疫荧光法进行测定，检测仪器由欧蒙杭州医学实验诊断有限公司提供，型号：EUROBMⅡ，首先于待检标本片上滴加磷酸盐缓冲液(PBS，0.01 mol/L)保持10 min 后擦去，然后滴加稀释后的荧光标记抗体(欧蒙杭州医学实验诊断有限公司，批号：CF200721AC)溶液并保温0.5 h，浸泡、振荡后采用荧光显微镜进行观察，对照显示为(+)或(-)，且待检标本特异度荧光染色强度达到“”以上可判定为阳性。②ACLA水平采用酶联免疫吸附试验进行检测，试剂及仪器均为欧蒙杭州医学实验诊断有限公司提供，型号：ST-360，所有操作严格按照试剂盒进行；③β2-MG采用散射比浊法(定量)进行检测，β2-MG>3.0 mg/L为阳性，所用仪器由德国罗氏诊断有限公司提供，试剂由美康生物科技股份有限公司(批号201106204)提供。

1.3统计方法 采用SPSS22.0软件进行χ2检验、Logistic回归分析。

2 结 果

2.1两组抗体及β2-MG表达比较 DN组抗体及β2-MG阳性率高于糖尿病组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 两组抗体及β2-MG表达比较〔n(%)，n=60〕

2.2各血清学指标与DN的单因素相关性 不同ACLA〔88.89%(16/18)〕、pANCA〔81.82%(9/11)〕、cANCA〔76.92%(10/13)〕、aANCA〔84.21%(16/19)〕、β2-MG〔84.62%(22/26)〕水平下DN的发生率均具有显著差异(χ2=12.810、4.904、4.227、10.568、15.908，均P<0.05)。

2.3两组血清学指标与DN Logistic 多因素分析 ACLA、pANCA、cANCA、aANCA、β2-MG与早期DN的发生有显著相关性(P<0.05)。见表2。

表2 两组血清学指标与DN的Logistic多因素分析

2.4各检测方法准确性比较 联合检测的敏感度显著高于单独ACLA、pANCA、cANCA、aANCA、β2-MG(P<0.05)，特异度显著低于单独ACLA、pANCA、cANCA、aANCA、β2-MG(P<0.05)，联合诊断符合率显著高于单独ACLA、pANCA、cANCA、aANCA、β2-MG(P<0.05)。见表3。

表3 各检测方法准确性比较〔n(%)〕

3 讨 论

研究表明，约2/5的糖尿病患者会发生DN，且全世界范围内DN患病率仍处于增长状态〔9〕。DN的临床治疗以减少尿蛋白排泄、对症治疗而缓解病情为主，但多数DN患者往往预后较差，具有较高的死亡率，有研究发现DN患者3年死亡率接近40%〔10〕。故而，临床早期诊断并给予及时治疗对于改善预后至关重要。目前，DN的致病机制尚未完全明确，众多学者认为与高血压、血液性状改变、糖脂代谢紊乱、遗传因素、细胞因子及环境因素等多种因素密切相关。近年来，临床常采用血清学指标进行辅助检查，可在一定程度上对DN的临床诊断起到辅助作用，但单一指标检测对DN的临床诊断效率较低。此外，随着人们对糖尿病患者的研究不断深入，发现自身相关抗体及β2-MG等介导的免疫损伤与DN密切相关〔11，12〕。

本研究结果显示，DN组抗体及β2-MG阳性率显著高于糖尿病组，与王尔萍等〔13〕研究结果相似，进一步说明以上各项指标均可能与DN的发生、发展密切相关。其中，ACLA是一种自身抗体，分布广泛，主要以血小板和内皮细胞膜上带负电荷的心磷脂作为靶抗原，参与了多种免疫性疾病的发生〔14〕。王波等〔15〕研究指出，ACLA与血栓形成、血小板减少等密切相关，且血管内皮细胞的损伤可加速ACLA的活化。ANCA是一种能有效反映系统性血管炎活动性的自身抗体，可分为pANCA、cANCA、aANC，能够与中性粒细胞及单核细胞胞质中溶酶体酶发生反应而产生免疫作用。此外，ANCA还是系统性血管炎的血清标志性抗体〔16〕。β2-MG属于肿瘤抗原相关低分子蛋白，是人体白细胞抗原分子的一个β轻链，主要经肾脏代谢，是反映肾小球滤过率的敏感性指标，现有研究将其应用到恶性肿瘤病情进展速度及远期预后的评估中〔17〕。而糖尿病患者长期高血糖状态，使得内环境长期紊乱，容易导致机体血脂代谢、氧化应激、血流动力学、炎症等相关调节出现异常，且肾脏对于微血管病变较为敏感，以上反应可同时相互作用引起肾脏血管内皮细胞损伤，使其结构和功能发生改变，进而导致相关靶抗原暴露且炎症反应等加重，刺激ACLA、pANCA、cANCA、aANCA等自身抗体大量形成，β2-MG等细胞因子大量分泌。其中，抗体分泌后还能形成抗原抗体复合物，并激活补体系统，进而产生一系列的级联反应，导致肾脏血管内皮细胞进一步被破坏。

本研究结果显示，联合检测的敏感度和诊断符合率显著高于ACLA、pANCA、cANCA、aANCA、β2-MG单独检测，但特异度低于ACLA、pANCA、cANCA、aANCA、β2-MG单独检测，因血清指标联合检测具有创伤较小、方便、客观、提示作用强等优点，但由于DN发病因素复杂，单一指标检测敏感性，诊断符合率偏低，无法满足临床需要〔18〕。本研究还发现，不同ACLA、pANCA、cANCA、aANCA、β2-MG水平下DN的发生率具有显著差异，且以β2-MG 的阳性表达者DN的发生率最高，Logistic 多因素分析结果显示，ACLA、pANCA、cANCA、aANCA、β2-MG均与早期DN的发生均有显著相关性。考虑原因与β2-MG的代谢有关，因近曲小管是其在体内的唯一处理场所，在经体内淋巴、血小板等处的核细胞产生后，正常情况下能自由通过肾小球，并几乎全部由肾小管内皮细胞降解为氨基酸而被近曲小管重吸收，一旦机体肾小球滤过功能受损，将导致β2-MG浓度升高，对β2-MG进行检测有利于临床对肾损伤程度的诊断，提高糖尿病早期肾功能损害检出率〔19〕。DN是肾衰竭最常见的原因，早期肾脏损伤具有一定的可逆性，在糖尿病患者中应展开定期ACLA、pANCA、cANCA、aANCA、β2-MG联合检测，及时发现肾损伤情况并加以治疗以预防和改善DN患者的预后。

综上，DN患者抗体及β2-MG阳性率显著高于糖尿病患者，ACLA、pANCA、cANCA、aANCA、β2-MG均与DN的发生发展密切相关，早期DN患者的以上各项指标联合检测敏感性、诊断符合率较高，值得临床推广与应用。