门氏柴胡理中颗粒制备工艺研究

丁 雯 ，靳贝贝 ，卫春红 ，梁惠珍 ，孙振华 ，门九章 ，裴香萍

（1.山西中医药大学，山西晋中030619； 2.山西振东安特生物制药有限公司，山西晋中030619）

门氏柴胡理中颗粒由柴胡、黄芩、姜半夏等药味组成，其功效为和胃健脾、疏肝利胆，方中柴胡为少阳主药，清透少阳半表之邪从外而解为君；黄芩清泻少阳半里之热为臣；半夏降逆和中为佐；片姜黄活血行气、通经止痛，开少阳经络之瘀滞；白术健脾益气，燥湿利水；甘草调和诸药，引诸药直达病所。方中药味合用共奏健脾、化痰、疏肝、利胆之效。该方为门九章教授多年临床实践的经验方，目前在临床中主要以传统汤剂或配方颗粒使用，疗效显著，受到广大患者的一致好评。为进一步方便临床患者使用，服务于更多的临床患者，试验拟在保持传统汤剂的基础之上，采用正交试验法，以提取次数、提取时间、加水量为考察因素，以出膏量结合方中黄芩中主要成分黄芩苷含量，优选提取工艺，然后对辅料配比及颗粒成型性、溶化性、吸湿性、流动性等因素进行考察，以确定最佳制备工艺，为门氏柴胡理中颗粒的基础研究、医院中药制剂的开发研究及临床应用提供参考。

1 仪器与试药

Waters e2695 高效液相色谱仪，2998 紫外检测器，Empower 工作站，超声波清洗机（型号SB-5200DT，宁波新芝生物科技有限公司），分析天平（型号FA3204B，上海精科天美科学仪器有限公司），数显恒温水浴锅HH-2 型（杰瑞尔电器有限公司）。

姜半夏（批号17010104，产地河南），柴胡（批号 16040101，产地山西），姜黄（批号 160801，产地四川），白术（批号160401，产地浙江），黄芩（批号160828，产地山西），炙甘草（批号 16101101，产地甘肃），均购自万民大药房。黄芩苷对照品（批号161028）购自上海融合医药科技有限公司；糊精购于辽宁东源药业有限公司，蔗糖购于湖南九典制药股份有限公司。

2 方法与结果

2.1 门氏柴胡理中颗粒提取工艺

将处方中各药材按照处方比例进行水煎煮，合并煎液，浓缩至稠膏状，低温干燥，称重，备用。

2.2 黄芩苷含量测定

2.2.1 对照品溶液的制备 黄芩苷对照品3.0 mg，精密称定，置于25 mL 容量瓶中，加甲醇制成每1 mL含120 μg 的对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备 精密称取门氏柴胡理中颗粒 5 g，加甲醇 50 mL，称重，超声 20 min，放冷，以甲醇补足失重，摇匀，滤过，滤液蒸干，取续滤液，作为供试品溶液。

2.2.3 绘制标准曲线 精密吸取对照品溶液，分别取 0.2 mL、0.4 mL、0.8 mL、1.0 mL、1.2 mL、1.6 mL、2.0 mL 稀释至2 mL 容量瓶中，得不同浓度的对照品溶液。精密吸取上述对照品溶液各10 μL，依法测定其峰面积值。以进样量（μg）为横坐标，以峰面积值为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为y=2 907 186.561 0x+21 224.436 6，相关系数r＝0.999 8。结果表明，黄芩苷在 0.12 μg~1.2 μg 范围内线性关系良好。

2.2.4 精密度试验 精密吸取黄芩苷对照品溶液各10 μL，重复进样6 次检测，记录峰面积值，根据所得峰面积值进行计算，结果表明，黄芩苷的峰面积RSD 为0.98%，表明仪器精密度良好。

2.2.5 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别在0 h、2 h、4 h、8 h、12 h 时进行进样检测，记录峰面积值，计算RSD 为1.26%，表明供试品溶液在12 h内测定结果稳定。

2.2.6 重复性试验 称取同一批样品5 g，精密称定，共6 份，分别按照供试品溶液制备方法进行提取，计算含量。黄芩苷样品平均含量为0.527 mg/g，RSD 为2.13%，表明此方法重复性良好。

2.2.7 加样回收率试验 采用加样回收法，取重复性试验所用样品，研细，精密称取2.5 g，加入黄芩苷对照品1.3 mg，按照“2.2.2”项下供试品溶液的制备方法，依法测定黄芩苷的含量，计算回收率，平均回收率为99.45%，RSD 为2.48%。

2.3 提取工艺研究

2.3.1 单因素考察 分别对加水量、提取时间、提取次数进行了考察，结果表明加水量10 倍，提取3 次，提取时间为1.0 h 相对总含量较大。

2.3.2 正交试验设计 出膏率及黄芩苷提出量作为考察指标，以水为提取溶剂，选择影响其提取效率的 3 个主要因素，即加水量（A）、提取时间（B）、提取次数（C）进行L（934）正交试验，确定水提取的最佳条件。

2.3.3 提取方法 处方称取各药材3 倍量，9 份，按表1 正交设计方案进行水煎煮提取，滤过，合并滤液，浓缩，60 ℃低温干燥，即得正交样品干膏。结果见表1。分别对试验数据进行方差分析，结果见表2。

表1 正交试验设计及结果

表2 方差分析结果

由表2 可知，各因素对试验结果影响的程度依次为：C>A>B，即煎煮次数> 加水量>煎煮时间。统计结果分析得出最佳组合为A3B3C3，试验最佳组合为A3B3C2，C 因素对黄芩苷的提取率有显著影响，而A 、B 因素无明显影响。由于统计结果与试验结果中C 因素不一致，试验进一步对C 因素进行了考察。结果见表3。

表3 最佳工艺的验证试验

从表3 中可以看出，对试验方案A3B3C2和A3B3C3的提取物进行测定，黄芩苷含量差异不大，以处方2 倍量进行提取，黄芩苷平均含量1 049.84 mg 左右。结合生产中的实际情况，考虑节约能源和降低成本等因素，故选择最佳提取工艺为A3B3C2，此条件为提取的最佳工艺路线，即加水量10 倍，煎煮 2 次，第 1 次 1.5 h，第 2 次 1.0 h。

2.4 成型工艺研究

2.4.1 制粒及辅料配比选择 试验选择糊精、糖粉为辅料，与干膏粉进行混合制粒，具体比例如下，见表4。

表4 不同比例辅料所制得颗粒情况

根据所制得颗粒成型情况，试验确定干膏粉∶糊精∶糖粉为 3∶2∶0。

2.4.2 湿润剂的选择 由于干膏粉与辅料混合，加入湿润剂后黏性较高，试验选择较高浓度乙醇溶液为湿润剂，软材以手捏成团，轻压即散为宜，以此筛选乙醇的浓度。结果见表5。

表5 不同浓度乙醇对制粒的影响

试验结果表明，以75%的乙醇溶液为湿润剂，软材易制粒且粒度较好。

2.4.3 颗粒成型性、溶化性、吸湿率、堆密度、休止角研究

颗粒成型性研究：将干浸膏粉按处方与相应辅料混匀，制粒。将制备好的颗粒称重，先过一号筛，再过五号筛，收集能通过一号筛，但不能通过五号筛的颗粒，称重［成型率（%）=过筛后颗粒质量/过筛前颗粒质量×100%］。结果见表6。

表6 成型率的测定结果

颗粒溶化性研究：在干燥恒重的5 mL 离心管（最小刻度0.1 mL）中加入精密称定的颗粒0.2 g，精密加入沸水5 mL，搅拌振荡5 min，3000 r/min离心15 min，弃去上清液，在80 ℃将残渣烘干至恒重，精密称定，计算溶化率［溶化率（%）=溶化颗粒质量/颗粒质量×100%］。结果见表7。

表7 溶化率测定结果

颗粒吸湿率研究：将底部盛有氯化钠过饱和溶液的玻璃干燥器放入25℃恒温培养箱内恒温24 h，此时干燥器内的相对湿度为75%。在已恒重的称量瓶底部放入各处方颗粒，准确称重后置于氯化钠过饱和溶液的玻璃干燥器内（称量瓶盖打开），于25 ℃恒温培养箱保存，72 h 后称量，计算吸湿率。吸湿率（%）=（吸湿后颗粒质量-吸湿前颗粒质量）/吸湿前颗粒质量×100%）。结果见表8。

表8 吸湿率测定结果

堆密度的测定：堆密度所用的体积是指颗粒及其本身空隙以及颗粒与颗粒之间空隙在内的总体积。将过筛后的颗粒放入干燥的量筒中，轻轻振动，读出其近刻度处的mL 数（V），将过筛后的质量作为M（g），两者的比值即为堆密度。结果见表9。

表9 堆密度测定结果

休止角的测定：休止角通常是指粉体堆积层的自由斜面与水平面所形成的最大角。采用固定漏斗法，将漏斗固定于水平放置的坐标纸上H 的高度处，小心地将颗粒沿漏斗壁倒入最上面的漏斗中直到坐标纸上形成的颗粒圆锥体尖端接触到漏斗口为止，由坐标纸测出圆锥底部的直径（2R），计算出休止角tga=H/R。结果见表10。

表10 颗粒休止角的测定结果

2.4.4 综合评分 对上述5 项测试结果进行综合测评，结果见表11。

表11 综合评分

综合指标=（15/最大成型性值）×成型性值+（15/最大堆密度值）×堆密度值+（最小休止角值×15）/休止角值+（20/最大溶化性值）×溶化性值+（最小吸湿率值×35）/吸湿率值

根据表中数据综合评分可看出，处方3 号的分值最高，为97.88 分，故筛选出来的最优辅料配比为干膏粉∶糊精∶糖粉=3∶2∶0。

3 讨 论

门氏柴胡理中颗粒由柴胡、黄芩、姜半夏等药味组成，首先对方中君药柴胡中的主要成分柴胡皂苷α 和d 进行了研究，柴胡皂苷α 和d 二者均为五环三萜类皂苷［1-2］，为一对同分异构体，其区别前者为β 构型，后者为α 构型，柴胡在水煎煮过程中原生皂苷转化为次生皂苷，水煎后柴胡皂苷b2 大幅增加，柴胡皂苷a、d 逐渐减少，在柴胡的质量控制中，仅控制原生皂苷柴胡皂苷a 和d尚显不足［3］。《中国药典》2020 年版一部中以柴胡为君药或臣药的中药成方制剂中，均未以柴胡中的主要成分作为检测指标［4］，故本研究中暂未将柴胡及其相关成分作为质控指标，而以方中臣药黄芩中的主要成分黄芩苷进行了定量控制，后续试验还将对该制剂的质量控制进行进一步的研究。

正交试验结果表明，加水量、提取次数2 个因素影响较显著，提取时间影响不显著，根据验证试验提取次数2 次与3 次黄芩苷含量相差不大，因此最佳组合为A3B3C2，即加水量10 倍，煎煮2 次，第 1 次 1.5 h，第 2 次 1.0 h。

本复方制粒时加入适当浓度及体积的乙醇水溶液作为湿润剂和黏合剂，制软材时，以手捏成团轻压即散为宜，参考有关文献［5-7］，通过多次摸索试验条件，所制得的颗粒剂粒度均匀、硬度适宜，根据制成的门氏柴胡理中颗粒的成型性、溶化性、吸湿性、堆密度、休止角加权分析，优化制粒条件配比为干膏粉∶糊精∶糖粉=3∶2∶0，黏合剂为 75%乙醇。本试验对门氏柴胡理中颗粒的制备工艺及成型工艺等进行了研究，为医院制剂的研发奠定了基础。

试验采用湿法制粒过程中，所制的颗粒成型性、松散度适宜。试验过程中发现乙醇浓度过低时易于黏结，颗粒成型不好；乙醇浓度高时，所制得颗粒较松散，易破碎。参考有关文献［8-9］，通过多次摸索实验条件，优化制粒配比条件，根据不同药材的特性具体分析研究，最终所制得的门氏柴胡理中颗粒粒度均匀、硬度适宜，且各项指标符合要求。