不同品牌串联质谱仪新生儿遗传代谢病筛查结果比对

唐诚芳， 韦青秀， 秦剑荣， 唐 芳， 刘思迟， 蒋 翔， 黄永兰

[1. 广州市妇女儿童医疗中心新生儿筛查中心，广东 广州 510180；2. 珀金埃尔默医学诊断产品（上海）有限公司，上海 201203]

随着串联质谱技术在临床的广泛应用及新生儿遗传代谢病筛查覆盖面的扩大[1]，各新生儿筛查中心遗传代谢病筛查能力要求被大大提高。同一筛查中心会采用多台串联质谱仪来检测同一项目，以满足临床需求。临床实验室采用的国际标准ISO/IEC 17025[2]和ISO 15189[3]均对不同系统检测结果的可比性提出了明确要求，强调通过比对试验实现不同检测系统测定结果可比的重要性。本研究参考美国临床实验室标准化协会（the Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI）EP9-A2文件[4]，对广州市妇女儿童医疗中心新生儿筛查中心的2台串联质谱仪进行验证，对新生儿筛查的9个氨基酸项目[丙氨酸（alanine，ALA）、瓜氨酸（citrulline，CIT）、甘氨酸（glycine，GLY）、亮氨酸（leucine，LEU）、甲硫氨酸（methionine，MET）、苯丙氨酸（phenylalanine，PHE）、脯氨酸（proline，PRO）、酪氨酸（tyrosine，TYR）、缬氨酸（valine，VAL）]、12个酰基肉碱项目[乙酰肉碱（acetyl carnitine，C2）、丙酰肉碱（propionylcarnitne，C3）、丁酰肉碱（isobutyryl carnitine，C4）、异戊酰肉碱（isovaleryl carnitine，C5）、戊二酰肉碱（glutaryl carnitine，C5DC）、己酰肉碱（hexyl carnitine，C6）、辛酰肉碱（octyl carnitine，C8）、葵酰肉碱（decyl carnitine，C10）、月桂酰肉碱（lauroyl carnitine，C12）、肉豆蔻酰肉碱（nutmeg carnitine，C14）、棕榈酰肉碱（palmitoyl carnitine，C16）、十八碳酰肉碱（octadecyl carnitine，C18）]和游离肉碱（free carnitine，C0）项目进行比对分析和偏移评估，判断其临床可接受性，为实现不同检测系统之间筛查结果的可比提供依据。

1 材料和方法

1.1 仪器和试剂

QSight 210MD串联质谱仪（简称QSight 210MD，美国PerkinElmer公司）及配套校准品，UPLC I-Class Xevo TQD串联质谱仪（简称Xevo TQD，美国Waters公司）及配套校准品，NeoBase试剂盒（批号670969）购自美国PerkinElmer公司。

1.2 干血斑样本的采集及制作

参照《新生儿疾病筛查滤纸血片采集和递送及保存专家共识》[5]的要求，在家属知情同意的情况下，采集新生儿出生后3～7 d的足跟血，滴至whatman903滤纸片上，自由扩散形成血斑，自然晾干，充分干燥4 h，制成干血斑。

1.3 方法

1.3.1 批内与批间精密度分析 取试剂盒配套的高、低值质控品，在1 d内连续测定3次，计算变异系数（coefficient of variation，CV），即批内精密度；连续测定5 d，计算CV，即批间精密度。

1.3.2 相关性分析 按实验室标准操作规程，每天收集8份新生儿干血斑样本，编为1～8号，每天按1→8、8→1的顺序在QSight 210MD和Xevo TQD上进行检测，检测时间不超过2 h，间断测定5 d，记录全部结果。以Xevo TQD为参考仪器（Y），QSight 210 MD为比对仪器（X），绘制散点图，建立2台仪器检测结果的直线回归方程（Y=bX+a），计算r值。每批样本均需加入空白和质控，确保质控在控。按CLSI EP9-A2文件[4]要求，对检测结果进行离群值分析，以4倍相对标准差的均值为判断限，剔除有明确人为误差的结果。根据r值判断比对仪器检测结果分布范围是否合适，若r≥0.975或r2≥0.95，判定为X取值范围合适，直线回归方程的斜率（b）和截距（a）可靠；若r<0.975或r2<0.95，判定为比对仪器检测结果精密度较差或X取值范围不合适，直线回归方程的b和a不可靠，须扩大样本量重新测定。

1.3.3 临床可接受性能判断 由于新生儿遗传代谢病筛查项目较多，且目前尚无一致的医学决定水平（Xc），因此本研究比对时使用本实验室的参考区间。另外，除C0参考区间上、下限均有临床意义外，其他筛查项目的参考区间下限无太大的临床意义[6]。因此，C0项目选择参考区间上、下限，其他项目均选择参考区间上限作为Xc处的浓度值。将该值代入回归方程，计算实验方法（Y）与比对方法（X）之间的绝对系统误差（systematic error，SE）和相对系统误差（SE%），SE=｜Yc-Xc｜，SE%=｜Yc-Xc｜/Xc×100%。以我国国家卫生健康委临床检验中心全国室间质量评价允许总误差（allowable total error，TEa）（氨基酸为25%、肉碱为30%）的1/2为标准，在参考区间上限处的预期偏差应<1/2 TEa[7]。

2 结果

2.1 精密度评价

QSight 210MD和Xevo TQD各比对项目的批内和批间精密度均<7%，符合临床要求。见表1。

表1 QSight 210MD和Xevo TQD批内、批间精密度分析

续表1

2.2 相关性分析

QSight 210MD与Xevo TQD除C5DC、C6、C8项目r<0.975外，其他项目的r值均>0.975。见表2。

表2 QSight210MD与XevoTQD检测各项目的相关性

2.3 临床可接受性能评价

将C0参考区间上、下限及其他项目参考区间上限分别代入各回归直线方程，计算SE和SE%。所有项目的SE%均<1/2 TEa。见表3。

表3 QSight 210MD和Xevo TQD的临床可接受性能评价

3 讨论

串联质谱技术在新生儿遗传代谢病筛查方面具有广阔的应用前景，国外已将其广泛用于新生儿及高危遗传代谢病常规筛查[8]。在国内，北京、上海、广州等地也已将串联质谱（衍生化法）用于新生儿遗传代谢病筛查[9-10]。随着串联质谱遗传代谢病筛查技术的推广，相关专家共识[11]的出台，国内越来越多的新生儿筛查中心开始将串联质谱用于遗传代谢病筛查[12]，样本的前处理也逐步采用快速、简单的非衍生化法。目前，随着可用于新生儿遗传代谢病筛查的串联质谱仪的型号和品牌的增多，同一筛查中心用于检测同一项目的串联质谱仪可能为不同型号，从而形成了不同的检测系统。因此，评价不同串联质谱检测系统之间的一致性程度至关重要。串联质谱检测在新生儿筛查中有较完整的质量控制体系[13]，但关于不同串联质谱仪在临床应用中的比对分析尚未见报道。本研究结果显示，QSight 210MD和Xevo TQD的批内、批间精密度均较好（CV<7%），能满足临床要求。2台仪器除C5DC、C6、C8的r值<0.975外，其他项目的r值均>0.975，符合临床要求。原因可能是Xevo TQD的检测结果只能精确到小数点后2位，而大部分新生儿C5DC、C6、C8水平为0～0.1 μmol/L，加上用于新生儿遗传代谢病筛查的串联质谱仪的灵敏度相对较低，所以C5DC、C6和C8项目的r值未能达到0.975。

由于新生儿遗传代谢病筛查的项目较多，部分项目因浓度太低而无法用于比对，美国临床实验室改进修正法规（the Clinical Laboratory Improvement Amendments of 1988，CLIA'88）亦无此类项目的参考允许误差，因此本研究采用全国室间质量评价TEa的1/2作为判断标准。临床可接受性能评价结果显示，QSight 210MD与Xevo TQD比对项目的SE%均低于全国室间质量评价TEa的1/2，达到临床可接受水平。

综上所述，QSight 210MD与Xevo TQD之间除C5DC、C6和C8项目外，其他项目相关性均良好，所有项目的SE%临床均可接受，能够满足临床要求。对不具有可比性的项目，有必要针对不同检测系统建立不同的参考区间。目前，实现不同串联质谱检测系统遗传代谢病筛查结果可比仍存在不少问题，如无公认的TEa标准等，需要进一步研究加以解决。在实际工作中，若出现操作人员更换、仪器更换部件和试剂、使用中出现较大偏差等情况，应对仪器进行比对分析。如比对不一致，应及时找出原因并解决问题，确保检测结果的准确。