免疫细胞化学染色技术在胸水病理诊断中的应用

龙爽

【中图分类号】R446.6 【文献标识码】B 【DOI】10.12332/j.issn.2095-6525.2021.15.285

在疾病过程中，当胸膜腔内的液体产生过快或吸收过慢时，就会形成胸膜腔积液，即“胸水”。患者和家属问：为什么胸水送到病理科，已经出了病理诊断，还要做免疫组化染色协助诊断？为什么免疫组化要检查6～7个标记物？本文详细与患者介绍免疫组织化学染色技术在胸水病理诊断中的应用价值。

1 人体正常胸膜腔的解剖学和组织学结构是什么？

人体内肺被胸膜所包绕着，包绕肺的那一层浆膜叫浆膜的脏层，脏层向外延伸到体腔壁形成浆膜的壁层。脏层和壁层互相连接形成一个完整的不与外界相通的封闭腔，即为胸膜腔。

胸膜腔起源于间质细胞胚层，胸膜内面衬以间皮，间皮由单层扁平细胞构成，被其下的结缔组织、血管和神经等所支撑。在无疾病状况时，间皮的脏层和壁层之间被一薄层润滑液所分隔，以消除运动时两层之间的摩擦。

2 胸膜超微结构是什么？

在透射电镜下观察，可发现间皮细胞由一层连续的单层细胞互相连接而成，中间有缝隙连接，表面有微绒毛向体腔伸展。在间皮细胞两极有许多泡饮小泡。胸膜腔内润滑液的流动由间皮细胞调节，扫描电镜证实间皮细胞表面衬以等长的短微绒毛。正常间皮细胞的微绒毛太短以致在光镜下无法看到;如果见到长的微绒毛，往往意味正处在疾病过程之中。

3 病理医师将胸水如何分类以及其组成成分是什么？

引起胸水的原因很多，首要原因是炎症性疾病，其次是肿瘤。病理医师则将胸水分为非癌性积液（即良性积液）与癌性渗出液两种。

良性积液其细胞成分包括团簇状的间皮细胞、巨噬细胞、红细胞、淋巴细胞、粒细胞、浆细胞、巨核细胞、其他造血细胞等、其他良性细胞，如阿绍夫细胞、肝细胞、呼吸道来源的细胞、鳞状细胞、脂肪细胞和横纹肌细胞等、色素、结晶和其他无机物等等。

一般在渗出液中的恶性肿瘤细胞可以分为三类：一是大细胞或非常大细胞，多见于各种类型转移癌、恶性黑色素瘤、肉瘤与一些间皮瘤等;二是小细胞，大多数恶性淋巴瘤、许多幼年时期的恶性肿瘤和特殊类型的癌（如胸部的小细胞癌，燕麦细胞癌）属于这种类型;三是中等大小的细胞，多见于各种乳腺癌、肺癌、胃癌等表现为这种类型。

有时，在渗出液中可以发现两种肿瘤存在，有研究发现1例男性，有慢性淋巴细胞性白血病和腺癌，推测可能是肺来源的，同时在胸腔渗出液中被发现。

4 不同类型细胞制备法在免疫细胞化学中的应用？

细胞学样本常用制备方法大致有种：（1）细胞蜡块的制备;（2）细胞离心制片技术;（3）液基薄片细胞制片技术;（4）直接涂片技术;（5）微孔薄膜滤过技术。

病理技师根据胸水标本的性质，选择不同的处理方法。总的原则如下图。

静置

↓

取液

↓

离心

↓

沉淀物的处理

↓

↓                            ↓

涂片       富集沉淀物，4%中性甲醛液固定

↓                            ↓

↓             富集细胞，制备细胞蜡块

↓                            ↓

常规染色                  免疫細胞化学染色

5 免疫细胞化学技术是什么？

随着细胞学和免疫组织化学的发展，免疫细胞化学技术在细胞学领域的应用得以进一步推广，为细胞学诊断提供了更多的信息，有助于解决细胞学疑难病例的鉴别诊断难题。

（1）免疫组织化学也称为免疫细胞化学，是基于免疫学的理论和技术，具有特异性强，敏感性高，定位准确、形态与功能相结合等优点。用已知抗体与抗原发生特异性结合，并通过化学反应使标记在结合后的特异性抗体上的显色剂（如荧光素、酶、金属离子和核素）显色，已确定组织细胞内抗原的存在对其进行定位、定性及半定量研究。

（2）免疫细胞化学的操作步骤是复杂的，包括第一抗体、第二抗体等的应用，抗体应用后还要震洗，还要设置相应的对照。它包括直接法、间接法、ABC法及酶聚合物法等。

（3）目前采用的免疫细胞化学方法大致可以分为：细胞培养免疫组化、细胞涂片免疫组化、细胞蜡块免疫组化三种。前一种方法多用于实验室，后两种方法各有优点，目前国内外更多使用细胞蜡块。

6 实际工作中，免疫细胞化学在胸水中的应用

实际工作中，细胞学病理医师要正确鉴别肿瘤细胞和反应性间皮细胞。为了提高诊断的准确性，一般选用一组敏感性和特异性较强的抗体联合用于诊断。一般情况下，CEA、EMA、BRST-3的组合可解决大部分细胞样本中上皮源细胞的鉴别问题。如果需要鉴别腺癌和间皮瘤，可应用E-ca、CD15、MOC31、Calretinin、CK5/6的组合。在胸水中，常需进行良性间皮细胞、间皮瘤和转移癌的鉴别，以及判断胸水中肿瘤细胞的原发部位。在胸水中，乳腺癌和肺癌最多见，在腹水中，卵巢癌和消化道癌较多见。

7 常用于胸水鉴别诊断的抗体分类

常用于胸水鉴别诊断的抗体有以下两类：

第一类是上皮标记物，包括EMA（有助于肿瘤细胞和反应性间皮的鉴别，但不能单独应用此抗体鉴别癌和间皮瘤。）、CEA（在多种癌细胞中阳性表达，是区分癌和间皮瘤的良好标记物。）、上皮细胞粘附分子（文献报道中，该抗体对于腺癌的敏感性在60%～100%之间，而在间皮瘤中就有4%的弱表达。）、CD15（是粒细胞相关抗原，最初认为是霍奇金淋巴瘤中R-S信保的特异性标志，后来发现其在非霍奇金淋巴瘤和多种腺癌中均表达。）、MOC31、BRST-3、E-ca、TTF-1、CA19-9、CA15-3等。

第二类是间皮标记物，包括Calretinin（是一种神经特异性钙结合蛋白，是间皮细胞和间皮瘤较为敏感的标记，可表达于良、恶性间皮细胞;在腺癌细胞中不表达或仅表达胞浆着色。）、HBME-1（是间皮细胞抗体，一般仅表达间皮细胞，而不存在于其他正常细胞中。）、CK5/6（是一种高分子量细胞角蛋白，有研究表明在间皮瘤中的表达为90%～100%，在腺癌中的表达是0%～26%。）、WT-1、D2-40等。

通过对胸水细胞的病理诊断，可以协助临床医师明确诊断、设计治疗方案以及预测疗效等等，有利于患者获得最佳的治疗。