2018—2020 年四川省兽医系统实验室检测能力比对

尹灿友，李 丽，邓 飞，邱明双，邵 靓，周莉媛，陈 斌，裴超信，吉色曲伍，李英林

（1.西昌市农业农村局西乡片区畜牧兽医中心站，四川西昌 615000；2.四川省动物疫病预防控制中心，四川成都 610041；3.凉山州动物疫病预防控制中心，四川西昌 615000）

为加强兽医系统实验室能力建设，提高全省兽医系统实验室检测能力，四川省动物疫病预防控制中心按照农业农村部《兽医系统实验室考核管理办法》[1]、《兽医系统实验室考核工作实施方案》[2]、《关于开展兽医系统实验室检测能力比对工作的通知》以及四川省农业农村厅《关于开展全省兽医系统实验室检测能力比对工作的通知要求》等文件有关要求，于2018—2020 年组织开展了全省地市（州）级兽医实验室检测能力比对工作。全省21 个地市（州）级兽医实验室按要求在规定时间内完成了盲样领取、检测、正式报告出具和结果上报等流程。比对结果既可客观反映四川省地市（州）级兽医实验室检测能力及水平，也可反映出存在的问题。本文对2018—2020 年四川省兽医系统实验室检测能力比对结果进行了梳理分析，以期提高兽医实验室检测能力，更好地发挥兽医实验室作用。

1 材料与方法

1.1 比对项目

四川省历年比对项目为3 个，包括1～2 个病原学检测项目和1～2 个血清学检测项目。2018—2020 年涉及的比对项目包括：禽流感病毒核酸检测（RT-PCR 方法）、口蹄疫病毒核酸检测（RT-PCR/荧光RT-PCR 方法）、猪瘟病毒抗体检测（ELISA方法）、禽流感病毒抗体检测（HA/HI 方法）、非洲猪瘟病毒核酸检测（荧光PCR 方法）以及O 型口蹄疫病毒抗体检测（固相竞争ELISA 方法），共计6 个项目。

1.2 比对项目采用方法及标准

2018—2020 年四川省地市（州）级兽医实验室比对项目、采用方法和标准，详情见表1。

表1 比对项目、方法及标准

1.3 比对样品

2018 年每个比对项目设置5 份盲样，2019—2020 年每个比对项目均设置6 份盲样。样品均由相应国家参考实验室或试剂公司提供，经四川省动物疫病预防控制中心验证、编号和封装后，由参与比对的21 个地市（州）级兽医实验室派专人在指定时间统一领取，并要求在12 h 内送达参与比对的实验室。

1.4 比对试剂

参与比对的21 个地市（州）级兽医实验室采用的试剂均来自同一厂家、同一批次，由四川省动物疫病预防控制中心统一采购、验证并发放。比对试剂厂家及批号见表2。

表2 比对试剂名称、厂家及批号

1.5 结果判定标准

比对项目结果的参考值及判定标准见表3。

表3 比对结果参考值、判定标准

2 比对结果

2018 年全省整体平均正确率为95.59%，其中禽流感病毒核酸检测16 个市（州）结果完全正确，口蹄疫病毒核酸检测19 个市（州）结果完全正确，猪瘟病毒抗体检测21 个市（州）结果完全正确；2019 年全省整体平均正确率为97.09%，其中禽流感H9 亚型抗体检测17 个市（州）结果完全正确，口蹄疫病毒核酸检测21 个市（州）结果完全正确，猪瘟抗体检测19 个市（州）结果完全正确；2020年全省整体平均正确率为97.88%，其中禽流感H5亚型抗体检测17 个市（州）结果完全正确，非洲猪瘟病毒核酸检测19 个市（州）结果完全正确，口蹄疫抗体检测21 个市（州）结果完全正确。具体结果见表4。

表4 2018—2020 年全省各地市（州）级兽医实验室比对结果

3 分析与讨论

3.1 就总体水平而言

2018—2020 年连续3 年的比对结果正确率都在95%以上，说明四川省地市（州）级兽医实验室检测能力处于较高水平，能满足非洲猪瘟、禽流感等重大动物疫病检测需要；就各年整体正确率来看，2019 年全省平均正确率（97.09%）较2018 年（95.59%）上升了1.50 个百分点，2020 年（97.88%）较2019 年上升了0.79 个百分点，正确率总体呈逐年上升趋势。

3.2 就检测方法而言

对于核酸检测，在检测禽流感和口蹄疫病毒核酸时，2019 年采用的荧光RT-PCR 正确率高于2018 年的普通RT-PCR，同时2020 年采用荧光PCR 开展非洲猪瘟病毒核酸检测比对时正确率也高达98.41%，这与荧光RT-PCR/PCR 的特异性、灵敏度、自动化程度高于普通RT-PCR/PCR 有关。对于抗体检测，ELISA 方法和HA-HI 试验都是兽医实验室常见的血清学检测方法，ELISA 因为采用商品化试剂盒且结果判定使用仪器读数，而HA-HI试验因红细胞需自备且结果判定受人为主观因素影响，因此ELISA 方法正确率略高于HA-HI 试验。

4 存在问题

4.1 部分实验室设备条件差

2018 年有2 个市（州）因兽医实验室条件限制而无法开展病原学检测，另外有个别实验室因凝胶成像系统故障无法显示电泳结果。2019 年个别市（州）因实验室设备配置太低无法开展多重荧光病原学检测，也有实验室因设备配套设施不完善而影响检测结果。

4.2 部分实验人员对某些检测方法不熟悉，检测能力有待提高

2020 年口蹄疫抗体检测采用固相竞争ELISA方法。该方法是OIE 在国际贸易中口蹄疫血清学检测指定方法之一，既可定性又可测定效价。检测结果显示：只有6 个实验室能将阴阳性对照和被检样品的效价完全判定正确，而部分实验室仅能正确判定阴阳性，但对说明书中效价判定方法理解不到位；另有个别实验室只作了定性检测，未按要求进行效价测定。2020 年虽然大部分市（州）非洲猪瘟病毒核酸检测正确率能达到100%，但仍然有个别市（州）实验室出现假阴性（漏检）结果或/和Ct 值偏差较大的情况。

4.3 部分检测结果报告不规范

四川省历年比对均要求各市（州）实验室不仅报送检测结果，也要求提交检测原始记录及检测报告。但从检测报告和原始记录上看，连续3 年均有部分实验室存在记录和报告不详尽、不完整、不规范的问题。比如凝胶电泳图清晰度差或未标注泳道，HA 试验报告中数据填写不规范，未填写阴、阳性对照结果以及缺少ELISA 试验的OD 值。

5 建议

5.1 加强兽医实验室建设，更新完善检测设施设备

目前，各地高度重视兽医实验室建设工作，动物疫病防控工作正逐步构建以全面开展实验室监测预警和疫病净化为重点的新防疫理念。四川省兽医实验室系统已初步建成了省、市、县三级兽医实验室的分工格局，但个别市（州）兽医主管部门在推进兽医实验室建设中重视程度不够，进展缓慢。需进一步提高认识，不断加强兽医实验室建设，加大支持力度和资金投入，更新完善检测设施设备[3]。

5.2 加强实验室技术人员培训，提升检测能力和水平

各市（州）实验室应当不断加强内部培训和规范化建设，完善实验室质量管理体系和生物安全管理体系，提升实验室能力和管理水平。建议进一步稳定和强化兽医实验室人员队伍和能力建设[4]，加强与省级动物疫病预防控制中心和其他市（州）级单位之间的交流、培训，稳步推进实验室管理体系更上新台阶。

5.3 继续推进兽医系统实验室考核工作，加强比对考核

全省兽医实验室考核是在农业农村部统一组织下的兽医行业实验室检测能力认可工作[5]。同时，市（州）级实验室检测能力是全省动物疫病监测工作的重要技术支撑。截至目前，四川省大部分市（州）级实验室通过了全省兽医实验室考核，仍未通过实验室考核的市（州）、县（区）需抓紧进行实验室条件建设，完善仪器设备和技术人员配置。比对项目涉及的疫病（禽流感、口蹄疫、猪瘟、非洲猪瘟）均属于一类动物疫病，因此围绕这几类动物疫病开展的实验室比对工作紧紧抓住了当前重大动物疫病防控的重点。比对结果正确率未达到100%的地方需认真总结，及时查找和纠正问题，做到持续改进，不断提升。建议继续推进动物疫病防控系统兽医实验室考核工作，稳步推进生物安全监管，定期开展比对核查工作。