高效液相色谱法测定牛奶中咪唑啉酮类除草剂——灭草烟的含量

沈 雪，赵福阳，吴 越，崔新宇

（牡丹江医学院，黑龙江牡丹江 157000）

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

高效液相色谱仪（美国赛默飞U3000）；十二孔固相萃取装置；Seq-Pak C18固相萃取柱；旋转蒸发仪。0.45 μm 超微孔滤膜；标准物质灭草烟（咪唑烟酸，纯度≥99%）。甲醇为色谱纯，二氯甲烷、丙酮、乙腈为分析纯。

1.2 实验方法

1.2.1 样品的处理

准确称取牛奶样品1 g 于离心管之中，取2 个离心管分别标号为Y1（样品1）、Y2（对照1）作为两个样品样管，用二氯甲烷定容至10 mL，涡旋混合，离心机离心，转速为4 000 r/min。取下层有机层5 mL 于容量瓶之中，用二氯甲烷定容至10 mL 以待净化。

1.2.2 样品净化

将样品提取液沿SPE C18柱（活化后使用）的管壁缓缓倾入。在流速约为2 mL/min 的条件下将5 mL 丙酮、5 mL 乙腈、5 mL 甲醇，依次加入SPE 柱进行淋洗。用5 mL 体积比为5 ∶95的5%氨水-甲醇混合溶液进行洗脱。

1.2.3 样品的浓缩

在45 ℃下将待浓缩溶液蒸发至近干，使用流动相溶解并定容。溶液用0.45 μm 的有机相滤膜过滤之后加入进样瓶中进行高效液相色谱分析。

1.2.4 标准溶液的配制

准确称取适量灭草烟标准品（精确至 0.000 1 g）于50 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容，配制成10 mg/mL标样储备液，储存于冰箱内。灭草烟标准储备液用甲醇稀释成2 mg/mL、4 mg/mL、6 mg/mL、8 mg/mL 和10 mg/mL 标准溶液。

1.2.5 HPLC 条件

色谱柱：C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；柱温：35 ℃；进样量：5 μL；检测波长：240 nm；流动相：甲醇∶水=90 ∶10，需要用磷酸调节pH 值为3.5，经过滤膜过滤并脱气；流速，1.0 mL/min[1-5]。

1.2.6 样品的测定

灭草烟根据色谱保留时间定性，外标法定量。以灭草烟质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线。根据标准曲线计算试样溶液浓度，按式（1）计算土壤样品中乙草胺和烯草酮的残留量[6-8]。

式中，X-牛奶中灭草烟的质量，mg；ρ-试样溶液中灭草烟的质量浓度，mg/mL；V-所配的溶液体积，mL。

2 结果与分析

2.1 标准曲线的绘制

不同浓度梯度的标准样品，所测得的色谱图见图1，测得样品色谱图见图2，标准曲线图见图3，线性方程为y=546 883x+17 754，r=0.999 7，线性范围2～10 mg/mL。

图1 灭草烟标准样品的色谱图

图2 灭草烟检测样品的色谱图

图3 灭草烟标准曲线图

2.2 回收率实验和精密度计算

取不含待测物品的样品，按照1.2 方法分3 组，每组5支加标回收样品管，进行加标回收实验和精密度计算，结果见表1。在6～10 mg/mL 的标准物质的添加条件下，实验的加标回收率在84%以上，相对标准偏差为5.7%～7.5%，实验证明本方法准确度和精密度较为良好。

表1 不同浓度灭草烟的加标回收率

3 结论

本实验对牛奶中灭草烟的测定过程中，采用二氯甲烷作为提取剂，C18固相萃取小柱进行萃取、净化。利用高效液相色谱法检测样品牛奶中咪唑啉酮类除草剂灭草烟的残留，本次实验所得线性方程为y=546 883x+17 754，r=0.999 7，线性范围2～10 mg/mL。加标回收率84%以上，相对标准偏差为5.7%～7.5%。本方法准确度和精密度较为良好，可广泛推广应用。