壮药龙盘止咳方通过调控p38 MAPK/NF-κB/NLRP3通路减轻急性支气管炎小鼠肺损伤*

韦 杏， 邹 敏， 李崇进， 农志飞， 蓝毓营△

（1广西中医药大学壮医药学院，广西南宁 530001；2广西国际壮医医院儿科，广西南宁 530200；3茂名市中医院儿科，广东茂名 525000；4广西中医药大学第一附属医院儿科，广西南宁 530023）

急性支气管炎是一种由病毒、细菌或理化因素（如冷空气和粉尘等）引起的以急性咳嗽为表现的下呼吸道炎症。据报道，大多数患者治疗方法不恰当或无效［1］，多达60%的急性支气管炎抗生素处方不合理［2］，增加了抗生素抗药性的患病率和医疗成本［3-4］。因此，医师面临着提供循证有效的症状控制疗法的挑战。中医在本病治疗上具有独特优势，可调理体质，从根本上减少疾病发生和反复发作。壮药作为中医药学的一个组成部分，在治疗上也获得明显的疗效。壮药龙盘止咳方（Longpan-Zhike decoction，LPZKD）由龙脷叶、鱼腥草、不出林、柿叶、盘龙参及甘草组成，治疗小儿急性支气管炎（风热犯肺证）疗效显著，且安全性好［5］，但其作用机制尚不明确。

炎症因子是本病发病过程中的重要组成部分，核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（nucleotidebinding oligomerization domain-like receptor protein 3，NLRP3）与许多炎性疾病的发生发展密切相关，是最重要的炎症小体类型之一［6］。NLRP3 炎症小体的过度激活，在呼吸道的大多数病毒感染过程中能够导致炎症反应和组织损伤［7］。核因子κB（nuclear factor-κB，NF-κB）是NLRP3炎症小体激活的重要因素，两者之间存在正相关关系［8］。p38 丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）可通过NF-κB 调节细胞肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白细胞介素1β（interleukin-1β，IL-1β）和IL-18 的表达，介导肺损伤［9-10］。在急性支气管炎模型中，p38 MAPK 通路被激活，参与了呼吸道炎症反应［11］。故本研究旨在探究壮药龙盘止咳方对急性支气管炎发挥保护作用的潜在机制，以期为更广泛的应用提供实验参考。

材 料 和 方 法

1 动物

SPF 级KM 小鼠80 只，4 周龄，雌雄各半，体质量（20±2）g，购自济南朋悦动物繁育有限公司，合格证号为SCXK（鲁）2019-0003。在温度（20±2）℃、湿度45%～55%、12 h光照/12 h黑暗周期的条件下饲养，可自由饮食和摄水。实验经广西中医药大学伦理委员会批准，并严格遵守《实验动物的护理和使用指南》的指导原则。所有小鼠适应性饲养7 d，然后开始实验。

2 主要药品、试剂及仪器

壮药龙盘止咳方含龙脷叶10 g、鱼腥草10 g、不出林5 g、柿叶5 g、盘龙参5 g 和甘草5 g，这些药材均购自北京同仁堂；上述药材加入8 倍量的水分充分浸泡30 min，煎煮40 min，过滤药液，药渣再加入6 倍量的水继续煎煮40 min 后过滤药液，合并两次药液，煎煮浓缩至100 mL，1 mL相当于生药0.4 g。

p38 MAPK 特异性抑制剂SB203580 和CelLytic™NuCLEAR™提取试剂盒（NXTRACT）购自Sigma-Aldrich；HE 染色试剂、RIPA 裂解液和BCA 试剂盒购自碧云天生物科技公司；小鼠TNF-α、IL-1β 和IL-18 ELISA 检测试剂盒购自武汉贝茵莱生物科技有限公司；Trizol、PrimeScript™RT 试剂盒和SYBR®Premix Ex Taq™Ⅱ试剂盒购自TaKaRa；RT-qPCR 引物购自上海吉玛基因（GenePharma）；兔源Ⅰ抗（p38 MAPK、p-p38 MAPK、NF-κB p65、NLRP3、cleaved caspase-1、β-actin 和histone H3）和山羊抗兔IgG（H+L）购自Cell Signaling Technology。

iMark680 多功能酶标仪、蛋白转膜装置和Quantity One 4.6.2 软件（Bio-Rad）；Prism®7300 型荧光定量PCR系统（ABI）；BX61电动显微镜（Olympus）。

3 主要方法

3.1 模型的建立与分组 适应性饲养7 d 后，随机选取16 只小鼠作为对照，其余小鼠采用烟熏法建立急性支气管炎模型［12-13］。具体操作为：将小鼠置于自制烟熏箱（用有机玻璃制作，80 cm×80 cm×80 cm）中，取刨花和烟叶各50 g，于每天8：00 和15：00 各烟熏1 次，每次30 min，连续7 d。当小鼠出现咳嗽、流涕、呼吸急促、精神萎靡、形体消瘦、聚集、眯眼等表现后，停止烟熏，从对照组和造模小鼠中各随机选取4 只小鼠（雌雄各2 只），处死后取气管和肺组织，4%多聚甲醛固定，石蜡包埋，进行HE染色，观察小鼠气管和肺组织病理变化。对照小鼠光镜下显示：肺内各级支气管结构正常，肺泡结构清晰，肺泡腔内无渗出，未见炎症细胞浸润；造模小鼠可见支气管壁增厚，黏膜充血、水肿，管壁和管腔内炎症细胞浸润，且肺组织有渗出液，明显水肿、充血，肺泡间隔增宽、肺泡壁增厚，肺泡腔内和肺泡之间有炎症细胞浸润，提示造模成功。

将造模成功的60 只小鼠随机分为模型（model）组、SB203580（5 mg/kg［14］）组、高剂量（10.4 g/kg）龙盘止咳方（LPZKD-H）组、低剂量（5.2 g/kg）龙盘止咳方（LPZKD-L）组、龙盘止咳方（10.4 g/kg）+SB203580（5 mg/kg）组（LPZKD+SB203580 组），每组12 只，雌雄各半。剩余12 只对照小鼠设为对照（control）组。给药时，SB203580 组小鼠按照10 mL/kg 的剂量灌胃生理盐水，然后腹腔注射5 mg/kg 的SB203580；龙盘止咳方各剂量组按照10 mL/kg 的剂量灌胃相应的药物；龙盘止咳方+SB203580 组小鼠先按照10 mL/kg 的剂量灌胃10.4 g/kg 的龙盘止咳方，然后腹腔注射5 mg/kg 的SB203580；对照组和模型组灌胃和腹腔注射等体积的生理盐水。每天1次，连续给药1周。

剂量换算：给药剂量按平均体质量70 kg 成人的体表面积换算，小鼠体质量按20 g 计，对应给药剂量为成人的9.1 倍；壮药龙盘止咳方成人每日给药剂量相当于生药40 g，则小鼠每日给药剂量为5.2 g/kg，因此设置龙盘止咳方的低、高剂量分别为5.2 和10.4 g/kg。

3.2 小鼠一般状态观察及体质量测定 观察给药前后各组小鼠的一般状态变化，包括咳嗽、流涕、呼吸急促、活动度、毛色等，并测定体质量。

3.3 支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid，BALF）中炎症相关因子的测定 处死小鼠，放入75%乙醇中浸泡2 min，然后暴露气管，行气管插管，结扎右肺，用注射器将0.3 mL 的生理盐水溶液缓慢注入左肺后回抽，重复以上过程3 次，合并3 次灌洗液（共计0.70 mL，回收率约为77.78%），纱布过滤去除黏液后离心（4 ℃、447×g离心10 min），取上清保存于-20 ℃冰箱。按照ELISA 试剂盒说明书进行操作，检测各组小鼠BALF 中TNF-α、IL-1β 和IL-18水平。

3.4 肺组织病理学观察 取出小鼠的肺组织，生理盐水冲洗后，滤纸吸干表面水分；取右侧肺组织，4%多聚甲醛固定，乙醇梯度脱水，石蜡包埋，连续切3 μm 薄片，二甲苯脱蜡，梯度乙醇脱苯1 min，蒸馏水冲洗。苏木精染色8 min，自来水冲去浮色，1%盐酸酒精分色，伊红染色5 min，自来水流水洗至无色，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树脂封片，光镜下观察肺组织病理学变化，根据肺泡腔或肺泡间质炎症细胞浸润、肺泡间隔增宽、肺泡腔出血和肺泡壁厚度进行病理学评分，按程度“无、轻、中、重”分别计“0、1、2、3 分”，取评分之和为肺损伤评分，评分越高，损伤越严重。每只小鼠肺切片任取5 个独立区域进行评分。

3.5 免疫组化法检测肺组织NF-κB p65的表达 取3.4 石蜡包埋肺组织，切片；将切片于3% H2O2中在37 ℃下放置30 min 以灭活内源性过氧化物酶活性。然后在微波炉中用0.01 mol/L 柠檬酸盐缓冲液进行抗原修复8 min，滴加Ⅰ抗（NF-κB p65，1∶100），4 ℃箱孵育过夜，加入Ⅱ抗（1∶300，生物素标记的山羊抗兔IgG 聚合物）并在37 ℃下孵育40 min。室温DAB染色2 min 后，苏木精复染，室温3 min。光学显微镜观察NF-κB p65蛋白阳性表达，用Image-Pro Plus 6.0计算平均吸光度。

3.6 RT-qPCR 检测肺组织NLRP3、ASC、caspase-1和IL-1β 的mRNA 水平 左侧肺组织分为两部分，一部分液氮速冻后，-80 ℃冰箱保存，用于Western blot实验；另一部分用于RT-qPCR实验。使用Trizol从各组肺组织中提取总RNA，按照试剂盒说明书将RNA反转录为cDNA，进行RT-qPCR 扩增。反应体系（20 μL）：cDNA（200 ng/μL）2 μL，SYBR®Premix Ex TaqTM（2×）10 μL，上、下游引物（序列见表1）各0.4 μL，ddH2O 7.2 μL。反应条件：94 ℃预变性10 min；95 ℃变性15 s，60 ℃退火20 s，75 ℃延伸20 s，40 个循环。以GAPDH 为内参照，采用2-ΔΔCt法计算目的基因相对表达量。

建议：男性肝脏的承受能力是每天40克酒精，女性减半。一般40克酒精相当于含酒精6度的啤酒1000毫升，含酒精12度的红酒500毫升，含酒精度50度的白酒100毫升。

表1 RT-qPCR引物序列Table 1. RT-qPCR primer sequences

3.7 Western blot 检测肺组织p38 MAPK/NF-κB/NLRP3 通路相关蛋白的表达 取-80 ℃冰箱保存的肺组织，加入RIPA 裂解液研磨后，置于冰上，静置后离心，提取上清液为总蛋白溶液，并采用CelLytic™NuCLEAR™提取试剂盒提取细胞核中的蛋白质。用BCA 法测量蛋白浓度后取等量蛋白质样品（每孔30 μg），在10% SDS-PAGE 凝胶上进行电泳分离，然后转移到PVDF膜上，5%脱脂奶粉封闭，加入相应Ⅰ抗（抗p38 MAPK、p-p38 MAPK、NF-κB p65、NLRP3 和cleaved caspase-1 抗体按照1∶1 000 比例进行稀释，抗β-actin 和histone H3 抗体按1∶2 000 比例进行稀释）于4 ℃下孵育过夜，HRP 标记的羊抗兔IgG Ⅱ抗（1∶5 000）室温孵育1 h，随后洗涤膜并使用Super ECL Plus 超灵敏发光溶液进行显色。使用Quantity One 4.6.2 软件测量每个条带的灰度。以目的蛋白灰度值与β-actin 或histone H3 灰度值的比值作为各目的蛋白的相对表达量。

4 统计学处理

采用SPSS 22.0、GraphPad Prism 9.0 和Image-Pro Plus 6.0 软件进行统计分析。数据以均数±标准差（mean±SD）表示。多组间比较采用单因素方差分析（one-way ANOVA），组间有差异进一步采用SNK-q检验进行两两比较。以P＜0.05 为差异有统计学意义。

结果

1 壮药龙盘止咳方对小鼠一般状态及体质量的影响

对照组小鼠精神状态良好，毛色顺滑有光泽，较活跃，未出现咳嗽和气喘等症状；模型组小鼠精神萎靡，倦怠，毛色暗淡无光泽，活动减少，好聚集扎堆，出现咳嗽、流涕、呼吸急促等症状，且饮食减少，体质量较对照组显著降低（P＜0.05）；给药后，与模型组相比，SB203580组和高、低剂量龙盘止咳方组小鼠状态有不同程度的改善，活动和饮食量增加，咳嗽、呼吸急促等症状减轻，体质量有所增加，但差异无统计学意义（P＞0.05）；龙盘止咳方+SB203580 组小鼠一般状态改善程度优于SB203580 组和高剂量龙盘止咳方组。各组小鼠体质量的变化见表2。

表2 各组小鼠给药前后体质量的变化Table 2. Changes in body mass of mice before and after administration（g. Mean±SD.n=12）

2 壮药龙盘止咳方对小鼠BALF 中TNF-α、IL-1β和IL-18水平的影响

与对照组相比，模型组小鼠BALF 中TNF-α、IL-1β 和IL-18 水平显著升高（P＜0.05）；与模型组相比，SB203580 组和高、低剂量龙盘止咳方组小鼠BALF中TNF-α、IL-1β 和IL-18 水平显著降低（P＜0.05）；与SB203580 组和高剂量龙盘止咳方组相比，龙盘止咳方+SB203580 组小鼠BALF 中上述炎症因子水平显著降低（P＜0.05），见表3。

表3 各组小鼠BALF中TNF-α、IL-1β和IL-18水平Table 3. The levels of TNF-α，IL-1β and IL-18 in BALF of mice in each group（ng/L. Mean±SD.n=12）

3 壮药龙盘止咳方对小鼠肺组织病理损伤的影响

对照组小鼠肺内各级支气管结构正常，上皮细胞排列整齐，无变性坏死等损伤性改变，支气管黏膜未见充血、水肿，肺泡结构清晰，肺泡上皮细胞及肺间质结构正常，肺泡腔内无渗出液，未见炎症细胞浸润；模型组小鼠可见支气管壁增厚，管径明显变小，气管和支气管黏膜可见明显的充血、水肿，管壁和管腔内炎症细胞浸润，肺组织有渗出液，肺泡间隔增宽、肺泡壁增厚，肺泡腔内和肺泡之间有炎症细胞浸润。与对照组（0.64±0.08）相比，模型组小鼠肺组织损伤评分（7.38±0.11）显著升高（P＜0.05）；与模型组相比，SB203580 组（5.65±0.06）、高剂量龙盘止咳方组（5.49±0.08）和低剂量龙盘止咳方组（6.15±0.09）小鼠肺组织上述病理损伤有不同程度的改善，肺组织损伤评分显著降低（P＜0.05）；与SB203580 组和高剂量龙盘止咳方组相比，龙盘止咳方+SB203580 组小鼠肺组织损伤评分（4.25±0.09）显著降低（P＜0.05）。见图1。

Figure 1. Pathological changes of mouse lung tissues（HE staining，scale bar=50 μm）. A：control group；B：model group；C：SB203580 group；E：LPZKD-H group；D：LPZKD-L group；F：LPZKD+SB203580 group. The structure of the bronchus at all levels in the lungs of the control group mice was normal，and there was no obvious inflammatory cell infiltration. The alveolar walls were thickened，and there was inflammatory cell infiltration in the alveolar cavity and between the alveoli in the model group. The above-mentioned pathological damage of mouse lung tissues in SB203580 group，LPZKD-L group，LPZKD-H group and LPZKD+SB203580 group were attenuated to varying degrees.图1 小鼠肺组织病理学变化

4 壮药龙盘止咳方对小鼠肺组织NF-κB p65 蛋白阳性表达的影响

对照组小鼠肺组织部分细胞质呈棕黄色；模型组小鼠肺组织可见NF-κB p65呈强阳性表达，分布于支气管黏膜上皮细胞和肺泡上皮细胞，且其阳性表达不仅分布在阳性细胞的胞质内，胞核中也呈阳性反应，平均吸光度显著高于对照组（P＜0.05）；与模型组相比，SB203580 组、高剂量龙盘止咳方组、低剂量龙盘止咳方组和龙盘止咳方+SB203580 组小鼠肺组织细胞核内呈NF-κB p65 阳性表达的细胞数显著减少，平均吸光度显著降低（P＜0.05）；且龙盘止咳方+SB203580 组NF-κB p65 核阳性表达的细胞数较SB203580 组和高剂量龙盘止咳方组显著减少，平均吸光度显著降低（P＜0.05），见图2、表4。

表4 各组小鼠肺组织NF-κB p65阳性表达的平均吸光度Table 4. Average absorbance of NF-κB p65 positive expression in lung tissues of the mice in each group（Mean±SD.n=12）

Figure 2. Positive expression of NF-κB p65 in mouse lung tissues（IHC staining，scale bar=50 μm）. A：control group；B：model group；C：SB203580 group；E：LPZKD-H group；D：LPZKD-L group；F：LPZKD+SB203580 group. Brown-yellow was positive expression. Part of the cytoplasm of the lung tissue in the control group was brownish yellow，while the lung tissue in the model group showed strong positive expression of NF-κB p65. The positive expression of NF-κB p65 in the nucleus of mouse lung tissues in SB203580 group，LPZKD-L group，LPZKD-H group and LPZKD+SB203580 group decreased.图2 小鼠肺组织NF-κB p65阳性表达

5 壮药龙盘止咳方对小鼠肺组织NLRP3、ASC、caspase-1和IL-1β mRNA水平的影响

表5 各组小鼠肺组织中NLRP3、IL-1β、ASC和caspase-1的mRNA表达水平Table 5. The mRNA expression levels of NLRP3，IL-1β，ASC and caspase-1 in mouse lung tissues of each group（Mean±SD.n=12）

6 壮药龙盘止咳方对小鼠肺组织p38 MAPK/NFκB/NLRP3通路相关蛋白表达的影响

与对照组相比，模型组小鼠肺组织中p-p38 MAPK/p38 MAPK、胞核NF- κB p65、NLRP3 和cleaved caspase-1 的蛋白水平显著升高，胞质NF-κB p65 蛋白水平达显著降低（P＜0.05）；与模型组相比，SB203580 组和高、低剂量龙盘止咳方组小鼠肺组织p-p38 MAPK/p38 MAPK、胞核NF-κB p65、NLRP3 和cleaved caspase-1 蛋白水平显著降低，胞质NF-κB p65 蛋白水平显著升高（P＜0.05）；与SB203580 组和高剂量龙盘止咳方组相比，龙盘止咳方+SB203580组小鼠肺组织p-p38 MAPK/p38 MAPK、胞核NF-κB p65、NLRP3 和cleaved caspase-1 蛋白水平显著降低，胞质NF-κB p65 蛋白水平显著升高（P＜0.05），见图3、表6。

表6 各组小鼠肺组织p38 MAPK/NF-κB/NLRP3通路相关蛋白的表达Table 6. The expression of p38 MAPK/NF-κB/NLRP3 pathway-related proteins in the lung tissue of the mice in each group（Mean±SD.n=12）

Figure 3. The expression of p38 MAPK/NF-κB/NLRP3 pathway-related proteins in mouse lung tissues. A：control group；B：model group；C：SB203580 group；E：LPZKD-H group；D：LPZKD-L group；F：LPZKD+SB203580 group.图3 小鼠肺组织p38 MAPK/NF-κB/NLRP3通路相关蛋白的表达

讨论

目前大多数患者都意识到了抗生素的耐药性，热衷于尝试替代疗法，包括中草药。中草药被广泛用于治疗急性支气管炎，在英国，许多患者认为中草药比抗生素“侵入性小”，并且愿意服用［15］，说明中草药在急性支气管炎的治疗中被越来越多的人认可和接受。

急性支气管炎属于壮医“奔唉”范畴，病位在肺，常涉及脾、肾，发病机理为外毒侵袭，阻滞于气道，使气道不通或者脏腑功能失调，肺失宣降，肺气上逆。应以疏风清热、宣肺止咳为主要法则。壮药龙盘止咳方选用道地壮药组方，方中龙脷叶，善宣肺止咳；柿叶，肃肺止咳，两药合用具通气道，调龙路之功；鱼腥草，清热解毒、消痈排脓，为“治痰热壅肺，发为肺痈吐脓血之要药”，与龙脷叶同为主药；不出林，理气化痰，主治咳嗽、咳血，与柿叶同为帮药；四药共为母药，具有解毒的功效［5］。现代药理研究表明，龙脷叶水提物可通过降低炎性因子水平，减轻哮喘模型大鼠肺组织与支气管炎性病理改变［16-17］；柿叶具有抗炎、抗氧化和保护心脑血管的作用［18-19］，并可作为一种潜在的化学治疗剂用于肺癌早期转移［18］；鱼腥草，可通过抗病反应、免疫反应和生物刺激反应等发挥治疗支气管炎的作用，还对肺炎支原体感染小鼠起抗感染作用［20-21］；甘草可通过促进免疫细胞增殖、影响体内细胞因子和抗体水平以及调控相关酶表达等增强免疫［22］。以上诸药合用共奏清宣肺气、化痰止咳、补虚扶正之功；并且所选壮药大多具有较强的抗菌抗病毒作用。本研究结果显示，急性支气管炎小鼠经壮药龙盘止咳方治疗后，小鼠咳嗽、流涕和呼吸急促等症状明显改善，BALF 中炎症因子TNF-α、IL-1β 和IL-18 水平显著降低，肺部病理损伤改善显著，且高剂量组治疗效果优于低剂量组，提示壮药龙盘止咳方可减轻急性支气管炎小鼠的肺部炎症，对急性支气管炎具有一定的治疗作用。

NLRP3 炎症小体是由NLRP3、ASC 和pro-caspase-1 形成的多蛋白复合物，其中NLRP3 是NLRP3炎症小体的活性核心，它在许多细胞中都有表达，包括先天免疫细胞［23］和肺支气管上皮细胞［24］。已有研究证实NLRP3炎症小体在呼吸道感染及肺部疾病中被激活，随后pro-caspase-1 会裂解为具有活性的cleaved caspase-1 p10/p20，进而将pro-IL-1β 和pro-IL-18 分别裂解为成熟的IL-1β 和IL-18［25］。因此，NLRP3 蛋白表达和IL-1β 水平常被用于监测NLRP3炎症小体的活化。在病毒感染和肺损伤过程中，NLRP3 炎症小体通路非常关键；靶向阻断NLRP3 炎症小体的激活，是控制肺移植后闭塞性细支气管炎的一个有前景的策略［7］。因此，我们进行了一些研究，以探讨壮药龙盘止咳方对这些促炎因子及支气管炎的影响是否与NLRP3 炎症小体有关。结果显示，在急性支气管炎小鼠模型中肺组织NLRP3、IL-1β、ASC 和caspase-1的mRNA 表达水平显著升高，而经壮药龙盘止咳方干预后上述指标的表达水平降低，提示壮药龙盘止咳方对急性支气管炎的治疗作用与抑制NLRP3炎症小体活化有关。

本研究还观察到，在急性支气管炎小鼠模型中肺组织NF-κB p65 呈强阳性表达，且NF-κB p65 在胞核中的表达水平高于胞质，而NF-κB p65从细胞质转至胞核，可通过转录翻译促进炎症因子的表达；经壮药龙盘止咳方干预后NF-κB p65的入核作用被抑制，且NF-κB 与NLRP3 炎症小体呈正相关，是NLRP3 炎症小体激活的重要因素［8］，提示壮药龙盘止咳方可能通过抑制NF-κB p65 的核移位，进而抑制NLRP3炎症小体活化。p38 是MAPK 家族控制炎症反应最重要的成员，NF-κB 是p38 MAPK 的下游信号分子，p38 MAPK 信号通路可以促进IκBα 的磷酸化和降解，进而激活NF-κB 通路［26］；抑制p38 MAPK 可抑制NF-κB 的活性进而抑制LPS 诱导的促炎介质如TNFα、IL-6和IL-1β 等细胞因子的产生，减轻肺部病理损伤［9，27］。本研究结果显示，壮药龙盘止咳方可降低肺组织p-p38 MAPK/p38 MAPK、胞核NF-κB p65、NLRP3 和cleaved caspase-1 的蛋白水平，增加胞质NF-κB p65 的蛋白水平，抑制p38 MAPK 信号通路的激活，且壮药龙盘止咳方和p38 MAPK特异性抑制剂SB203580 联合应用对p38 MAPK/NF-κB/NLRP3 通路及急性支气管炎小鼠肺部炎症的抑制作用均优于单独应用，说明壮药龙盘止咳方对肺部炎症的保护作用可能与抑制p38 MAPK 的活化有关。这表明壮药龙盘止咳方可能通过抑制p38 MAPK/NF-κB/NLRP3通路的激活，减少肺部炎症细胞因子的产生，从而减轻急性支气管炎小鼠肺损伤。

综上所述，壮药龙盘止咳方可减少肺部炎症细胞因子的产生，减轻急性支气管炎小鼠肺损伤，其作用机制可能与抑制p38 MAPK/NF-κB/NLRP3 通路的激活有关。本研究仅从炎症反应的角度初步探讨了壮药龙盘止咳方对急性支气管炎的保护机制，其发挥治疗作用的具体机制是否与机体免疫有关，仍需进一步研究。