肠黏膜相关菌群与老年溃疡性结肠炎患者疾病活动程度的相关性

林家达，温必盛，陈绵富，苏庆辉，刘 阳

溃疡性结肠炎（Ulcerative colitis，UC）是一种直肠慢性非特异性炎症性疾病，重度患者多见每日多次血性腹泻，伴发热、严重腹痛等症状，肠道菌群发生明显紊乱，最终可引起肠源性感染，严重威胁患者的生命健康［1］。目前国内外对UC患者黏膜相关菌群研究报道相对较少［2］。本研究观察肠黏膜相关菌群与老年UC患者疾病活动程度的相关性，旨在为临床疾病的诊治及防控提供参考依据。

1 对象与方法

1.1对象 选择2016年10月～2019年10月定安县人民医院消化科收治的UC患者90例，设为观察组，另选择同期进行体检的90名健康对照者为对照组。观察组中男50例，女40例；年龄50～85岁，平均（62.25±3.26）岁；体质量指数（BMI）14.26～28.41 kg/m2，平均（18.23±4.32）kg/m2；轻度活动45例，中度活动32例，重度活动13例。对照组中男47名，女43名；年龄50～85岁，平均（63.32±3.35）岁；BMI 14.25～28.36 kg/m2，平均（18.25±4.26）kg/m2，两组基础资料信息比较差异无统计学意义（P＞0.05）。本次研究开展之初上报本院伦理委员会，经准许后实施。

纳入标准（1）患者均符合UC的诊断标准［3］；（2）对照组身体各指标均无异常；（3）研究对象均对本研究知情同意，并签署知情同意书。排除标准（1）因肠道致病菌、真菌及结核分枝杆菌以及病毒等病原体引起的肠道感染者；（2）免疫类疾病及感染性疾病者；（3）血液疾病或恶性肿瘤者；（4）心、肝、肾等脏器功能严重障碍者；（5）妊娠及哺乳期患者。

1.2方法 所有受试者均由同一名经验丰富的内镜医师对UC患者及健康对照者进行结肠镜检查，在结肠观察结束后退镜时使用一次性活检钳在乙状结肠钳取3块新鲜组织，观察组从乙状结肠的病变部位钳取组织标本，对照组从乙状结肠的正常肠黏膜钳取组织标本。以0.1%的焦碳酸二乙酯（DEPC）水洗2次，0.2 mol/L盐酸、10 mg/l溶菌酶分别消化15～20 min，随后以0.1%的DEPC水浸泡10 min，滴加封闭液后于55℃封闭2 h。结束后，将稀释好的0.4 mol/L的细菌探针于37℃平衡后滴加于组织上，加盖玻片以橡胶胶水封固，后于38℃避光存放16～18 h。后使用柠檬酸钠缓冲液洗4次，每次15 min，于暗处静置15 min后用荧光显微镜进行观察并摄片。在荧光显微镜下计数细菌总数，每块组织沿上皮层随机计数3个高倍镜视野（高倍镜视野的长度为200μm），取其中位数进行比较，并记为细菌数/200μm。探针选自广州外显子生物技术有限公司，以EREC482探针检测梭菌属、Bac303探针检测拟杆菌属、E.coli1531探针检测肠杆菌属、TaqMan探针检测肠球菌属、Lab158探针检测乳酸杆菌属、Bif164探针检测双歧杆菌属。

1.3观察指标 （1）对比两组肠黏膜菌群数量，包括梭菌属、拟杆菌属、肠杆菌属、肠球菌属、乳酸杆菌属、双歧杆菌属。（2）对比不同活动程度老年UC患者肠黏膜菌群数量，活动程度根据溃疡性活动Mayo评分判定［4］。评估项目包括：排便次数、便血情况、内镜情况、医师评价，各项根据严重程度分为0～3分，总分3～5分为轻度活动（45例）、6～10分为中度活动（32例）、11～12分为重度活动（13例）。（3）分析老年UC患者疾病活动情况与肠黏膜相关菌群数量的相关性。

1.4统计学处理 采用SPSS 19.0软件对数据进行处理，符合正态分布的计量资料以（±s）表示，组间比较行t检验，多组间行单因素方差分析，偏态分布的计量资料以中位数（范围）表示，组间差异比较采用Mann-Whitney U检验，多组间比较采用Kruskal-Wallis检验；计数资料以（%）表示，采用χ2检验；相关性采用Pearman秩相关分析检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1对比两组肠黏膜菌群数量 观察组肠黏膜内梭菌属、拟杆菌属、乳酸杆菌属、双歧杆菌属菌群数量显著低于对照组，肠杆菌属、肠球菌属菌群数量显著高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 两组受检者肠黏膜菌群数量［细菌数/200μm，中位数（范围）］

2.2对比不同活动程度老年UC患者肠黏膜菌群数量 重度活动程度老年UC患者肠黏膜内梭菌属、拟杆菌属、乳酸杆菌属、双歧杆菌属菌群数量显著低于中度、轻度活动患者，肠杆菌属、肠球菌属菌群数量显著高于中度、轻度活动患者，中度活动程度老年UC患者肠黏膜内梭菌属、拟杆菌属、乳酸杆菌属、双歧杆菌属菌群数量显著低于轻度活动患者，肠杆菌属、肠球菌属菌群数量显著高于轻度活动患者，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2对比不同活动程度老年UC患者肠黏膜菌群数量［细菌数/200μm，中位数（范围）］

2.3老年UC患者疾病活动情况与肠黏膜相关菌群的相关性分析 老年UC患者疾病活动情况与梭菌属、拟杆菌属、乳酸杆菌属、双歧杆菌属菌群数量呈负相关，与肠杆菌属、肠球菌属菌群数量呈正相关（P＜0.05）。见表3。

表3 90例老年UC患者疾病活动情况与肠黏膜相关菌群的相关性分析

3 讨论

UC是一种慢性非特异性炎症类疾病，患者通常会出现腹痛、腹泻、黏液脓血便等肠道症状，病灶区主要分布在大肠黏膜和黏膜下层，具有连续性及弥漫性的特质，可反复发作，对患者日常工作及生活具有较大影响［5］。

本研究中观察组肠黏膜内梭菌属、拟杆菌属、乳酸杆菌属、双歧杆菌属菌群数量显著低于对照组，肠杆菌属、肠球菌属菌群数量显著高于对照组，UC患者由于长期腹泻、肠道炎症的存在，肠道菌群发生明显紊乱，肠球菌、肠杆菌等机会性致病菌大量增殖并移位，而乳酸杆菌、双歧杆菌等典型的优势菌群则减少，这种菌群变化是UC患者发病的重要原因［6］。

在本研究中，重度活动程度老年UC患者肠黏膜内梭菌属、拟杆菌属、乳酸杆菌属、双歧杆菌属菌群数量显著低于轻度活动患者，肠杆菌属、肠球菌属菌群数量显著高于轻度活动患者，其原因在于每个菌群属下面有多个分类，菌群属数量在相对平衡状态下可维持患者肠道定植抗力，而肠道定植抗力可有效抑制肠道内潜在致病菌群数量［7-8］。因此UC患者病情越重代表其肠道内上皮细胞损伤越严重，当肠道黏膜被破坏即会加重肠道菌群紊乱的情况［9］。在本研究中老年UC患者疾病活动情况与梭菌属、拟杆菌属、乳酸杆菌属、双歧杆菌属菌群数量呈负相关，与肠杆菌属、肠球菌属菌群数量呈正相关。因此可检测UC患者肠道菌群变化情况能够为疾病活动程度的判断提供帮助。

综上所述，UC患者肠道菌群变化情况与UC患者疾病活动程度有密切联系，需引起临床重视。