强力碘对克氏原螯虾的急性毒性研究及安全性评价

刘巧凌，刘 冲，林 伟＊

（1.新县水产技术推广站，河南新县 464000；2.信阳农林学院，河南信阳 464000）

克氏原螯虾，也被称为红螯虾或淡水小龙虾，隶属节肢动物门，是近几年来我国淡水虾蟹五个主要养殖品种中产量年均增长速率最高的[1]。随着克氏原螯虾养殖规模的不断扩大，集约化养殖的持续增加，使得养殖过程中各种药物使用的剂量和频率不断增加，随之而来的水体环境污染和各种疾病的发生也不断涌现，给养殖户们带来不小的经济损失。强力碘作为一种常见的广谱杀菌消毒剂，因其价格适中、使用方法简单且安全高效的优点被越来越多的养殖户所接受。但是由于养殖户们的养殖水平不一，养殖观念的不同还有厂家指导的不足造成了养殖户们的盲目用药，有时就导致了克氏原螯虾中毒死亡。因此，为了给克氏原螯虾的用药提供科学指导，研究强力碘对克氏原螯虾的急性毒性是很有必要的。

1 试验时间、地点及条件

试验于2019年3～5月在信阳农林学院水产学院水产动物病害学实验室进行，试验用水为经过48h（小时）循环曝气的自来水，水体温度为20～23℃；水体总硬度为3.6，pH值为6.9～7.4，碱度为1.49mmol/L。

2 材料

2.1 试验动物

试验采用的克氏原螯虾均采购于罗山某养殖户，平均体长为（6.53 ±0.38）cm，平均体重为（11.72±1.25）g，试验前小龙虾先在实验室内暂养7d，每天换水一次，每次换水约1/2，并捞出运动不正常个体，暂养及试验过程中均不进行投喂，待小龙虾的存活状况达到稳定状态方能用于试验。

2.2 试验试剂

强力碘药品（有效碘浓度约为2%）购自郑州康诺生物科技有限公司，药物保存在避光阴凉处，使用时现用现配。

2.3 器材

蓝色塑料箱（53cm×35cm×12cm）、（10mL、500mL）、容量瓶（1000mL）、吸耳球、分析天平、试管刷、玻璃棒、温度计、pH测试仪、移液管等均由上海生工生物工程有限公司郑州分公司提供。

3 方法

3.1 步骤

采用静水生物试验法[2]，用强力碘进行急性毒性试验。试验开始前经过大量相关文献的查阅并拟定了预试验浓度，经预试验确定了本次试验所需强力碘溶液对试验对象的急性毒性的浓度范围（全数致死下限浓度和全部存活上限浓度）。根据预试验得到的浓度范围进行对等数间距设置6个正式试验浓度，同时设置空白对照组（空白对照组为无强力碘添加），其中每个浓度组和空白对照组都设置3个平行对照组，每个试验组放入规格大小无差异且须肢健全的健康虾10只，在20～23℃水温且完全静水停食的条件下进行试验。用药后前6h持续观察虾的存活状况，及时取出死虾，之后每24h观察记录一次试验动物中毒反应和死亡情况，发现死亡个体及时记录并捞出。

3.2 死虾判断标准

用玻璃棒触碰虾体，在3min内无刺激反应，判定死亡[3]。

3.3 数据处理

采用改良寇氏法计算半致死浓度[4]。

Xm：为最大剂量组剂量的对数值。

i：相邻两组剂量对数值之差。

P：各组动物的死亡率。

∑p：各组动物死亡率之和。

通过24h LC50和48h半致死浓度，计算出安全浓度。计算公式为：安全浓度（SC）=48h LC50×0.3 ×（24hLC50×48hLC50-1）-2[4]（2）

4 结果与分析

4.1 各浓度组不同时间的死亡情况

预试验得出的强力碘对克氏原螯虾全数致死下限浓度为3200mg/L全部存活上限浓度为800mg/L，依据此浓度范围，设置等对数间距的浓度组6个，分别 为：800mg/L、1056mg/L、1393mg/L、1838mg/L、2425mg/L、3200mg/L。每个浓度组有3个平行组，对照组也有三个空白对照，合计21组。每个浓度组依次编号，每个暂养箱放入克氏原螯虾10只。水体温度为20～23℃，水体pH值为6.8～7.5，总硬度为3.5，碱度为1.54mmol/L。各浓度组克氏原螯虾死亡情况如表1。

表1 强力碘不同浓度各组克氏原螯虾死亡情况（n=10）

4.2 不同浓度组的半致死浓度和安全浓度计算

根据表1的数据，用公式（1）和公式（2）计算各时间段的半致死浓度和安全浓度。结果如表2。

表2 强力碘对克氏原螯虾在24h、48h、72h、96h的半致死浓度mg·L-1

4.3 中毒反应

克氏原螯虾在不同浓度的强力碘溶液中表现的中毒症状各异。高浓度组的克氏原螯虾在20分钟后出现中毒初期症状，虾四处移动，活动剧烈。此时用玻璃棒轻触虾身，克氏原螯虾会表现出正常的抵御反应。而低浓度组和对照组的克氏原螯虾则表现出正常状态，身体紧贴箱壁趴卧在箱底。高浓度组的虾在6h后活动减弱，螯足附肢收缩、僵硬。部分虾仍有爬行能力，但是移动的非常缓慢。有的虾则丧失运动能力，仰卧在箱底，步足无规律的抽动，还有一些虾则侧躺在箱底。此时用玻璃棒触碰虾体时不表现任何的抵御反应；除了高浓度组的虾在24h内全部死亡外，其他组的死亡率也有不同程度的增加，中毒死亡虾的身体僵硬呈现收缩状，和缺氧死亡虾的症状有很大的区别。

5 讨论

5.1 强力碘对克氏原螯虾的毒性强度

根据本试验的研究结果，强力碘对克氏原螯虾24h、48h、72h、96h的半致死浓度分别为1923.1mg/L、1770.1mg/L、1721.9mg/L、1721.9mg/L。强力碘对克氏原螯虾的安全浓度为449.9mg/L，根据《化学农药环境安全评价试验准则》中农药对鱼类的毒性等级的划分(剧毒,96h LC50≤0.1mg/L；高毒,96h LC50≤1.0mg/L；中毒，1.0mg/L＜96h LC50≤10.0mg/L；低毒，96h LC50＞10.0mg/L)[6]，可判定强力碘对克氏原螯虾为低毒。高晓华等的研究中聚维酮碘对克氏原螯虾的96h的LC50为13.89mg/L，安全浓度为1.39mg/L[7]，但高晓华选用的克氏原螯虾规格较大，药品的纯度及生产厂家不同，试验进行时的水温较此次试验高，说明不同环境下聚维酮碘对虾的安全浓度有较大差异，不同厂家生产的药品对虾的毒性大小不同，不同规格的的虾对聚维酮碘的敏感度也有较大区别。

5.2 强力碘在克氏原螯虾生产中的使用注意事项

强力碘是一种新型的碘的化合物，作为水产上常用的一种水体消毒药物，不仅能用于预防疾病,还有治疗作用[7]，因养殖户们的养殖观念的不同，养殖户在使用时经常加量甚至超量，但超剂量使用该药物容易产生耐药性,甚至对水生动物产生毒害作用,引起死亡,更严重的是还会给位于食物链顶端的人类带来健康隐患[8]。本试验中强力碘对克氏原螯虾的安全浓度为449.9mg/L，根据国家标准和试验结果表明强力碘对克氏原螯虾是安全的。尽管克氏原螯虾具有很强的生理适应性，但在其养殖过程中强力碘还是不宜多用的，为了达到高效、精准用药的目的，在用药之前可以进行药物敏感试验。

有些养殖户在养殖过程中把强力碘作为一种常用药物进行使用，但是强力碘对养殖动物的病害有时不产生效果的情况时有发生。原因很多，有时是养殖户自身原因，养殖户的使用方法不对，养殖户在使用时用药加量或者减量；有时是药物本身的原因，养殖户买到假药或者过期药品，还有就是保存不当造成的药物药效减小甚至消失。以上这些因素都会造成强力碘对养殖动物的病害无效。为了在克氏原螯虾的养殖过程中使药物达到应有的效果，在此提醒使用者注意三个方面的问题。首先是药物用量，可以在使用强力碘之前进行药物敏感试验以确定准确用量。其次是使用方法，因强力碘内含聚维酮碘，具有易升华、易挥发的特性，在使用时要注意温度和光照的问题，温度过高会导致碘的升华继而使药物失效，光照也会影响药物药效，因此在配置药物时温度不宜过高，施用此药时尽量选在日出前或日落后等光照不强的时间段。在碱性环境下碘制剂非常不稳定，有效碘的含量和酸碱度成反比，在使用强力碘时不要与生石灰等强碱物质合用。同样是因为含聚维酮碘，对二价金属制品会有腐蚀作用，所以在配置和保存时不要选用金属容器，尽量选用玻璃瓶等，保存在避光阴凉处。最后一定要选择正规厂家生产的通过兽药GMP认证的药品。