山东地区酸枣仁样品质量分析

李占芳 魏春芬

山东省东营市食品药品检验中心，山东东营 257091

酸枣仁为鼠李科植物酸枣Ziziphus jujuba Mill.var. spinosa（Bunge） Hu ex H. F. Chou 的干燥成熟种子[1]，主要用于治疗虚烦不眠、惊悸多梦、体虚多汗、津伤口渴等症，是中医临床首选的安神药[2]。现代研究表明酸枣仁具有镇静催眠、镇痛抗惊厥、降血脂及抗血小板聚集、抗缺氧及抗心律失常、抗衰老、抗辐射等作用[3]。由于主流商品酸枣仁野生资源减少，市场资源供不应求，因此控制市场酸枣仁的质量情况，查出不合格药材，才能保证其临床疗效的发挥。本文通过对山东各地市场酸枣仁药材质量的分析，掌握本省酸枣仁市场质量状况，为保证酸枣仁临床疗效和药品监督提供依据。

老鳜鱼，这就是我们找你谈的话题。有人说，四细狗请你吃了炖鸡喝了地瓜烧，你不但没杀他，还成了他的腿子哩。是这样吗？我们想知道你去杀他，当年的那些细节。

1 材料

1.1 仪器

岛津LC-20AT高效液相色谱仪（二极管阵列检测器）（日本岛津制作所；出厂编号：L20154970517US）；梅特勒XS205DU电子分析天平（瑞士梅特勒；出厂编号：1128491122）；台式超声波清洗机BRANSon 580（美国brabson；出厂编号：BIX101300860）；离心机LDZ5-2（北京雷勃尔仪器有限公司；出厂编号：L010606071）；硅胶G薄层板（德国默克薄层层析板）。

1.2 样品与试剂

山东各地市搜集的覆盖本品种的生产、经营和使用单位酸枣仁样品36批，编号1～36号。对照品酸枣仁皂苷A（110734-200611）、斯皮诺素（111869-201102）、胭 脂 红（111771-201302）、赤藓红（111772-201202）和酸性红73（111773-200701），均购自中检院。乙腈、甲醇为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。见表1。

表1 样品来源

2 方法与结果

2.1 药材性状分析

通过外观性状观察，发现36批样品中有9批样品性状不合格。多为染色的理枣仁和掺伪染色的理枣仁，酸枣仁和理枣仁来源、功效和主治有明显的不同。其中酸枣仁为鼠李科植物酸枣Ziziphus jujuba Mill.var. pinosa（Bunge） Hu ex H. F. Chou 的干燥成熟种子，功效为养心补肝，宁心安神，敛汗，生津。主要用于治疗虚烦不眠、惊悸多梦、体虚多汗、津伤口渴等症。而理枣仁来源于鼠李科植物滇刺枣Ziziphus mauritiana Lam.的干燥成熟种子，具有清热止痛，收敛止泻的功效，用于烧烫伤，咽喉痛，腹泻，痢疾[4]。因理枣仁颜色较正品酸枣仁色浅，故伪品多为经过炮制或染色后颜色加深的理枣仁。正品和伪品比较见表2。

进行分道焊接时应根据实际的焊缝宽度选择相应的焊道道数，以分两道为例，第一道应覆盖原始焊缝的2/3位置，第二道应覆盖第一道焊缝的1/2位置，以保证焊缝整体成形平整。如需要分3道或3道以上焊接时，应先焊坡口两侧后焊中间。

表2 酸枣仁正品和伪品比较

2.2 样品有效成分分析

打造谷子“种养加”产业链。2018年5月，保加利亚公司与华大小米产业股份有限公司签署了合作协议，由华大小米提供种子资源、技术支持并派驻专家在保加利亚基地进行全程管理和指导，使试种与科研齐头并进，对几十个品种的谷子进行气候、土壤等自然环境的比对，择优在保加利亚进行推广。目前已经开始试种的1800亩谷子长势良好。

表3 酸枣仁含量测定酸枣仁皂苷A、斯皮诺素

3 样品染色分析

3.2.2 供试品溶液的制备 取3.1.1项下的供试品溶液，作为供试品溶液。

3.1 薄层定性分析

3.1.1 供试品溶液的制备 取1、3、22、34号酸枣仁样品各2 g（不粉碎），加70%乙醇5 ml，超声提取20 min，离心（3000 r/min），取上清液作为供试品溶液。

应力腐蚀开裂的影响因素分别是：应力、环境、材料。油罐罐底在服役过程中所受应力情况十分复杂；由于长期处于罐底水的环境中，受罐底水中的酸度、矿化度和盐度的影响，其应力腐蚀敏感性很大，尤其是柳屯原油库的罐底水中Cl-的含量很高，很容易引起罐底的局部腐蚀，而局部腐蚀往往又是引起应力腐蚀的最基本前提，会增大罐底钢材的应力腐蚀开裂敏感性。因此，油罐在介质和应力的双重作用下必然会具有应力腐蚀倾向。在油罐的生产运行中，为延缓油罐罐底的腐蚀，经常对罐底实施阴极保护，而阴极极化电位大小也会影响应力腐蚀开裂的敏感性。

3.2.1 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基键合硅胶为填充剂；以甲醇为流动相A，以0.05 mol/L醋酸铵为流动相B，按下表进行梯度洗脱；检测波长为508 nm。理论板数按酸性红73峰计算，应不低于2000。见表4。

3.1.4 结果 薄层色谱中，在与对照品酸性红73相对应的位置上出现了相同的颜色的斑点。薄层图谱见图1。

图1 4批染色样品薄层图谱

3.2.4 测定法 将供试品溶液和对照品溶液各10 µl，注入液相色谱仪。

按照《中华人民共和国药典》2020年版一部[1]酸枣仁项下的检测方法，测定了36批酸枣仁的酸枣仁皂苷A和斯皮诺素的含量。从液相测定结果看有9批伪品酸枣仁皂苷A未出峰或峰值很小，结果不合格，有4批正品酸枣仁斯皮诺素含量不合格。结合样品性状，该9批不合格品性均为炮制理枣仁或染色理枣仁。理枣仁和酸枣仁虽然都有酸枣仁皂苷A和酸枣仁皂苷B两种成分，但理枣仁这两种成分含量极低，大部分样品检测不出。对4批斯皮诺素不合格的酸枣仁进行认真分析，该4批正品中普遍存在着种仁瘪，掺杂非药用部位枣壳多，这与酸枣仁的黄酮类成分斯皮诺素均在种仁胚乳内，种仁瘪者胚乳有的为空，再加上其非药用部位枣壳多，故斯皮诺素含量不合格，为酸枣仁劣质品。可能与采收早，种仁不饱满，导致种仁中的黄酮类成分斯皮诺素减少。出现低于标准的情况。见表3。

3.2 样品染色液相分析

取1、34号样品，参照五味子补充检验方法[7]，照高效液相色谱法测定，进一步确定两个样品染色物为酸性红73。

3.1.3 方法 照薄层色谱法《中华人民共和国药典》2020年版四部0502）试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各5µl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-正丁醇-乙醇-氨水-水（1∶3∶3∶1∶1）为展开剂，展开，取出，晾干。在可见光下检视。

表4 梯度洗脱程序

《中华人民共和国药典》2010年版一部增补本酸枣仁标准项下对酸枣仁粉末颜色描述为棕红色[5]。本研究在实验过程中,发现质量好的酸枣仁粉末多为黄白色，有的为棕红色，随着炮制品程度加深粉末颜色变深棕褐色。查阅文献有的描述酸枣仁粉末颜色为黄白色或棕红色[6]。有的描述为棕红色、棕褐色、紫褐色[7]。故酸枣仁多为浅黄白色或棕红色或棕褐色。实验中观察到样品1、3、22、34号酸枣仁粉末多呈明显的粉红色。 参照五味子染色补充检验方法[8]，对4个样品进行了薄层层析和高效液相定性分析。因五味子染色补充检验方法为通用的检查染色方法，故无须阴性对照。具体实验如下。

3.2.3 对照品溶液的制备 取3.1.2项下的酸性红73对照品溶液，作为对照品溶液。

从图1可以看出酸枣仁的染色情况，1号和34号样品为酸性红73染色，其余两个未知。

3.1.2 对照品溶液的制备 另取对照品胭脂红、赤藓红和酸性红73适量，分别加70%乙醇溶解并制成每毫升含0.1 mg的溶液作为对照品溶液。

3.2.5 测定结果 供试品色谱中出现与对照品相同的色谱峰，采用二级阵列检测器比较相应色谱峰的紫外-可见吸收光谱，吸收光谱也相同。见图2～7。

图2 酸性红73对照品液相

图3 酸性红73紫外光谱图

图4 1号样品

图5 1号样品

图6 34号样品

图7 34号样品

从图2～7可以看出，1号和34号样品确系酸性红73染色。

4 讨论

通过对36批样品分析，经鉴定，9批为理枣仁，不合格率高达25%，反映发现山东地区酸枣仁伪品只有理枣仁一种，但冒充现象严重，酸枣仁与理枣仁属于同科不同属，二者在大小、形态、结构上的高度相似，直观颜色略有差异，不法商家主要通过对理枣仁样品染色方法，使伪品从颜色上更接近正品，给辨别真伪酸枣仁增加了难度。

通过研究和参考多篇与酸枣仁质量控制和研究相关的文献报道[9-11]，文章极少有关于酸枣仁染色的报道。本文参考五味子染色补充检验方法，尝试对酸枣仁染色物进行了分析，染色鉴别试验发现山东地区酸枣仁存在两种染色物染色，但本研究仅筛选出酸性红73一种染色物，目前，本研究对于另外一种染色物具体为哪一种目前尚不能确定，今后继续加强这方面的研究。

山东地区36批酸枣仁中有效成分的含量测定发现，正品共27批，有4批次酸枣仁中斯皮诺素含量不合格，不合格率达14.8%，而9批理枣仁中虽然都有酸枣仁皂苷A和酸枣仁皂苷B两种成分，但这两种成分含量极低，大部分样品检测不出或峰值很小，不合格率100%；笔者又将有效成分含量含量与性状相关联发现，4批正品中普遍存在着种仁瘪，掺杂非药用部位枣壳多，酸枣仁的黄酮类成分斯皮诺素均在种仁胚乳内，故斯皮诺素含量不合格，为酸枣仁劣质品[12-13]。可能与采收早，种仁不饱满，导致种仁中的黄酮类成分斯皮诺素减少[14-15]；本研究鉴定为理枣仁的样品，其含量测定均不合格。

结合婴幼儿配方乳粉进口贸易的具体情况，参考前人的研究成果，本文认为可能影响婴幼儿配方乳粉进口的因素主要有国内市场规模、国内产量、进口平均价格、汇率水平以及国产产品和进口产品的质量安全水平等因素。

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关于酸枣仁粉末颜色，通过多批样品观察和有关文献报道，酸枣仁经炒制颜色会加深，但其颜色的深浅程度又与炒制的火候、经验有着直接关系，标准中粉末的颜色描述“棕红色”过于局限，故笔者在大量实践积累中建议将酸枣仁修改为“黄白色或棕红色”更确切。酸枣仁用量随着其药理作用的显著在逐年递增，无论从其价格还是使用量上酸枣仁无疑会成为用途广大的一味中药。通过以上分析，酸枣仁质量存在着一定问题。

本文对山东各地市搜集的覆盖本品种的生产、经营和使用单位酸枣仁样品36批，进行了性状分析，酸枣仁皂苷A和斯皮诺素含量测定并进行了染色液相分析，通过一系列的分析，发现了酸枣仁伪品并存在染色现象。本研究提示酸枣仁制剂质量管理者，从来源上把关尤为关键，更不能放松其他可能的不法手段，只有好的质量才有好的疗效。希望本研究能够为药品监督管理和控制酸枣仁药材质量提供参考依据。