2014-2020年上海市青浦区HIV抗体筛查和确证试验结果分析

徐秋芳,范 妤,张亚军,张相猛, 卢晓芸, 施怡茹,徐瑞芳,潘俊锋,赵锦江

艾滋病(acquired immunodeficiency syndrome，AIDS)，又称获得性免疫缺陷综合征，是由人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus，HIV)感染引起，主要通过性接触、输血、血制品以及母婴垂直传播感染的综合性疾患，是当前全球公共卫生面临的最重要威胁之一[[1-2]。根据中国疾病预防控制中心性病艾滋病防治中心的数据，近年来，我国HIV感染者正在以每年1万左右的速度加速增长。早发现、早诊断、早治疗能有效遏制艾滋病相关疾病发病率、延长生存期和防止艾滋病病毒传播[3]，根据联合国艾滋病规划署提出的“2030年终结艾滋病的流行”[4]的目标，HIV的早期检测是艾滋病防治工作的重要组成部分。本次通过对HIV抗体筛查与确证试验结果的分析，初步探讨HIV抗体筛查方法选择与确证试验间的关系，了解辖区内HIV感染状况及检测工作质量，为我区HIV检测质量控制和防治提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 标本来源 收集2014年1月至2020年12月辖区内医疗机构(筛查实验室和快检点)送检的HIV抗体筛查有反应标本，以及经本中心实验室(筛查中心实验室)筛查和复检为有反应的自愿咨询(VCT)标本和监管场所标本，共计1 374份。

1.2 筛查复检方法 标本采用四代ELISA法、三/四代化学发光法、胶体硒法进行初筛。辖区内筛查实验室多采用化学发光法+胶体硒法复检，快检点采用胶体硒法双孔或两种试剂复检，本实验室采用ELISA法+胶体硒法复检或胶体硒法双孔或两种试剂复检。

1.3 确证试验方法 筛查复检试验均呈有反应或一无一有反应的标本均采用Western Blot(WB)进行确证试验。采用新加坡MP生物医学亚太私人有限公司或IMT上海英旻泰生物技术有限公司生产的HIV 1+2型抗体免疫印迹试剂盒，试验所用试剂均由合格代理商购买，在有效期内使用，确证结果按照《全国艾滋病检测技术规范(2009年、2015年和2020年修订版)》和试剂盒说明书进行判定。

2 结 果

2.1 总体情况 1 374份复检有反应标本经过免疫印迹法进行确证后，1 156份(84.13%)为HIV-1抗体阳性；阴性为148份(10.77%)，不确定为70份(5.10%)；确证阳性病例主要集中在16～40岁，占70.76%；51～78岁占17.56%，男性∶女性为36.3∶1，其中羁押人员男性∶女性为820∶1；HIV确证阳性样本来源分布(表1)：除羁押人员外，以医疗机构门诊所占比例最高，占15.65%(215/1 374)，其次为VCT门诊，孕产期检查来源最低，仅为0.44%(6/1 374)，但HIV感染者发现途径以VCT门诊为主，医疗机构门诊其次；2014年至2020年各年份HIV抗体复检有反应标本确证阳性率呈下降趋势，阴性率呈上升趋势，差异有统计学意义(χ2=31.131，P=0.002)。表2显示中心实验室筛查有反应标本确证阳性率每年都高于92%，医疗机构筛查有反应标本确证阴性率最高达50.0%。

表1 不同来源标本HIV抗体确证结果[n(%)]Tab.1 Confirmation results of HIV antibodies in samples from different sources [n(%)]

表2 2014-2020年间不同送检机构的标本确证结果[n(%)]Tab.2 Confirmation results of HIV antibodies in samples from different institutions between 2014-2020 [n(%)]

2.2 筛查复检情况 ELISA法：筛查有反应但确证阴性标本的S/CO比值为(2.78±2.01)，筛查有反应但确证阳性标本的S/CO值为(11.45±2.49)，二者差异有统计学意义(t=16.534,P=0.000),筛查有反应但确证不确定标本的S/CO值为(5.15±3.55)。化学发光法：筛查有反应但确证阴性标本的S/CO值为(2.69±2.85)，筛查有反应但确证阳性的标本S/CO值为(313.29±481.59)，二者差异有统计学意义(t=10.856,P=0.000)，筛查有反应但确证不确定标本的S/CO值为(22.63±67.56)。

2.3 筛查复核结果与确证试验之间关系 单一ELISA法复核有反应确证阳性率为93.72%，单一胶体硒法复核有反应的确证阳性率为85.04%，单一化学发光法复检有反应的确证阳性率为30.05%， ELISA法和胶体硒法复检均有反应的确证阳性率为95.12%，胶体硒法双孔或两种试剂复检均有反应的确证阳性率为90.45%，胶体硒法和化学发光法复核均有反应的确证阳性率为78.08%，而化学发光法双孔或两种试剂复检均有反应的确证阳性率仅为1.41%，见表3。

表3 2种复检结果与确证试验之间关系[n(%)]Tab.3 Relationship between two types of retest results and confirmatory tests [n(%)]

2.4 确证条带分布情况 1 156份确证阳性样本中，gp160出现频率为100%；70份不确定样本中，p24和gp160出现频率分别为62.86%和52.86%(表4)。表5显示，确证条带含有2条及以上的样本为28份，其中13份进展为阳性，占46.43%，同时含有gp160和p24条带的有16份，10份(62.50%)进展为阳性；随访38份不确定病例，17份转阳，均为男性，ELISA 筛查标本的S/CO比值均值为8.30；16例随访无进展，化学发光法筛查标本的S/CO比值均值为4.70；其余病例失访或转其他途径进一步诊治。确证阴性病例中有11例多次送检，其中1例结合流行病学史和化学发光法复检S/CO比值为172，随访转为阳性全条带。其余10例病例，因就诊其他科室进行检测，复检采用化学发光法且有反应，9例确证均为阴性，1例出现p24条带转不确定后失访。

表4 1 156份确证阳性和不确定样本条带分布情况[n(%)]Tab.4 Band distribution of 1 156 confirmed positive and uncertain samples [n(%)]

表5 不确定样本条带分布情况和随访结果Tab.5 Band distribution and follow-up results of uncertain samples

3 讨 论

HIV抗体检测是诊断HIV感染的常规方法，而免印迹试验是 HIV 抗体确证试验中最常用的检测方法之一[5]。随着筛查实验室和检测点的增加以及扩大检测策略的推行，青浦区医疗机构的实验室数量和上送标本数量明显增加，但抗体筛查有反应标本确证阳性率逐年下降，结果显示医疗机构筛查有反应病例确证阴性率高达50.0%。推测医疗机构初筛和复检以化学发光法为主有关，本次调查发现胶体硒法和化学发光法复检均有反应标本的确证阳性率为78.08%，低于单一胶体硒法，化学发光法双孔或两种试剂复检均有反应标本的确证阳性率仅为1.41%，提示化学发光法不适合作为复检方法，尤其在医疗机构诊疗过程中筛查出有反应标本，从复检再到送上级机构最终确证检测至少需要5 d时间，对患者造成严重心理负担。汤琰等[6]研究表明，敏感性与特异性均达到100%的ELISA法与两种快检联合运用可替代WB确证，结果显示ELISA法和胶体硒法复核均有反应标本的确证阳性率为95.12%，胶体硒法两种试剂复核均有反应的确证阳性率为90.45%，均高于单一ELISA法或胶体硒法，提示ELISA法和胶体硒法联合运用可提高筛查有反应的确证阳性率。近年来HIV感染者发现途径以VCT和医疗机构门诊为主，建议医疗机构在复检中尽量采用四代ELISA或胶体硒法联合检测，降低确证检测成本，也可以降低筛查有反应标本的确证假阳性率。

本次确证阳性病例年龄主要集中在16～40岁，其次是51～78岁年龄段，男性高于女性，尤其羁押人员中性别差异明显。感染者以青壮年男性为主，这与大多数调查一致[7]，推测可能与男性性生活较活跃，行为易冲动，而老年人群的HIV防范意识薄弱，提示青年男性和老年男性是预防重点对象，应加强健康宣教。

确证阳性病例在复检时ELISA法或化学发光法S/CO值远大于确证阴性病例，且差异有统计学意义，S/CO值有一定提示作用。确证试验结果带型预示HIV感染的意义不同[8]。本研究中，从不确定标本的带型分布看，gp160、p24 带型出现的频率最高，这一研究结果与多报道吻合[8-11]。刘全忠等[12]研究结果显示，在一个新近感染HIV-1的人血液中，出现抗HIV-1抗体可能仅限于抗包膜蛋白抗体或抗包膜蛋白抗体加P24反应。如果WB试验出现p24和gp160条带，可以作为HIV初期感染的重要依据[13]。本次分析70例不确定样本的条带分布，主要出现p24(62.86%)和gp160(52.86%)。其中38份不确定标本经流行病学调查，14 d后随访，有17份标本条带发展为阳性，5例排除，16例随访结果仍为不确定；不确定病例中16例出现gp160和p24双条带，随访转阳率为62.50%(10/16)，此类病例处于感染初期。另外有1份阴性样本，综合其复检S/CO比值和流行病调查情况，14天后随访转为阳性，提示确证试验存在一定的局限性。本次分析中还发现1例阴性病例，3年3次住院，HIV抗体初筛和复检均有发应，但S/CO比值较低，确证试验3次均为阴性。

建议当确证试验出现不确定或阴性时，医生应结合临床症状、复检检测和流行病学调查结果做综合性判断，对S/CO比值较低的患者选用非化学发光法进行复检，对于不确定的标本或S/CO比值较高的病例，应及时进行核酸检测等补充试验或者积极跟进随访，尽早确定是否为HIV感染，以免耽误患者的治疗。