葡萄糖转运蛋白-1、p53蛋白在乳腺癌癌组织中的表达及其与临床病理特征和预后的相关性

赵临潇，左博云，黄娟娟，于东升

1.延安大学咸阳医院病理科，陕西 咸阳 712000；2.延安大学附属医院妇产科，陕西 延安 716000

乳腺癌是全世界女性发病率最高的恶性肿瘤，且死亡率极高[1]。有研究报道，我国乳腺癌的发病率逐年升高，且每年以3%～4%的增长速度不断增加[2]。有学者研究指出，乳腺癌癌的发生、发展过程中有多种蛋白共同参与的，并在肿瘤发生、发展的过程中发挥着重要作用[3-4]。相关研究报道，乳腺癌患者中葡萄糖转运蛋白-1 (glucose transporter 1，GLUT-1) 和p53 蛋白表达水平显示异常，且对乳腺癌的预后有着至关重要的作用[5-6]。临床上常通过检测患者体内GLUT-1和p53 蛋白的表达水平，为疾病早期诊断与治疗及预后提供有效指标[7]。本研究通过检测GLUT-1 和p53 蛋白在乳腺癌患者中的表达水平，分析GLUT-1 和p53蛋白表达水平与乳腺癌组织的临床病理特征及疾病预后的相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料2012 年3 月至2015 年3 月在延安大学咸阳医院就诊的106例乳腺癌患者作为研究对象。纳入标准：①所有患者均经病理组织活检并确诊为乳腺癌；②纳入研究前未服用过影响GLUT-1 和p53 蛋白水平的药物。排除标准：①合并严重精神类疾病，无法正常沟通者；②合并严重免疫力缺陷者；③一般资料不齐全者。取106例患者乳腺癌组织标本106 份，并选取上述患者远离癌组织3 cm的癌旁正常组织106 份进行对照研究。患者年龄24～75 岁，平均(56.76±3.42)岁；体质量46～76 kg，平均(54.30±3.89) kg；病程2.4～4.5年，平均(3.14±0.25)年。

1.2 方法

1.2.1 GLUT-1和p53蛋白检测方法采用免疫组化法检测。每例组织蜡块均切片4张，厚度约4 µm。均经甲醛溶液固定，石蜡包埋、载玻片泡酸、高温灭菌及多聚赖氨酸涂片等处理。DAB显色剂显色，苏木精复染，乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。操作步骤严格按照试剂说明书进行。GLUT-1和p53蛋白兔多克隆抗体均采购自美国Epitomics公司。DAB显色剂及配套试剂盒采购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.2.2 阳性判定标准采用BMD-300E 型光学显微镜(上海比目仪器厂)进行观察。GLUT-1 细胞细胞膜呈棕黄色颗粒为阳性细胞，在高倍镜下随机选择5个视野进行观察，每个视野细胞需大于200个，当阳性细胞＜10%为阴性，≥10%为阳性。检测p53 蛋白细胞核，细胞核出现棕黄色颗粒沉淀即为阳性细胞，根据显色程度进行评分，无色为0 分，黄色为1 分，棕黄色为2 分，3 分为棕褐色，根据阳性细胞所占百分比进行评分，阴性为0分、阳性细胞＜25%为1分、阳性细胞25%～50%为2分、阳性细胞50%～75%为3分、阳性细胞＞75%为4分，计算两项乘积，乘积≥3分为阳性表达[8]。

1.3 观察指标收集患者的一般资料，包括姓名、年龄、月经初潮年纪、肿瘤直径、肿瘤部位、有无淋巴转移、TNM分期、雌激素受体水平、孕激素受体水平等。先对比两组标本中的GLUT-1、p53 蛋白表达情况，再分析GLUT-1、p53 蛋白的表达与乳腺癌患者病理特征的关系。

1.4 随访用电话随访、短信随访、回院复查和上门随访等方式对106例乳腺癌患者进行定期随访观察，随访时间为3年，截止随访时间为2018年4月。记录随访过程中患者的生存情况。

1.5 统计学方法采用SPSS22.0 统计软件包进行处理，计量资料以均数±标准差(±s)表示，采用t 检验，计数资料以率和构成比进行描述，采用χ2检验；采用Logistic回归模型分析影响乳腺癌患者预后死亡的相关危险因素。以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 癌组织与癌旁组织GLUT-1和p53蛋白表达水平比较乳腺癌组织中GLUT-1、p53蛋白阳性率分别为65.09%、62.26%，明显高于癌旁组织，差异均具有统计学意义(P＜0.05)，见表1及图1。

图1 免疫组化染色图(×500)

2.2 GLUT-1和p53蛋白表达与临床病理特征关系GLUT-1 和p53 蛋白表达与患者年龄、月经初潮年纪、肿瘤直径、肿瘤部位无关(P＞0.05)，与淋巴转移、TNM分期、雌激素受体水平、孕激素受体水平有关(P＜0.05)，见表2。

2.3 乳腺癌患者GLUT-1和p53蛋白表达水平与术后预后比较 GLUT-1阳性表达、p53阳性表达患者的乳腺癌死亡率明显高于GLUT-1 阴性表达、p53 阴性表达患者，差异均具有统计学意义(P＜0.05)，见表3。

2.4 影响乳腺癌患者预后的相关危险因素经非条件单因素与多因素Logistic 回归分析结果显示，年龄、月经初潮年纪、肿瘤部位不是影响乳腺癌患者预后死亡的相关危险因素(P＞0.05)；GLUT-1 (阳性)、p53 蛋白(阳性)、淋巴转移(有)、TNM 分期(Ⅲ～Ⅳ期)、雌激素受体水平(异常增高)、孕激素受体水平(异常增高)为影响乳腺癌患者预后死亡的相关危险因素(P＜0.05)，见表4。

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表4 影响乳腺癌患者预后的非条件单因素与多因素Logistic回归分析

3 讨论

GLUT-1 作为一种膜性易化葡萄糖运转蛋白，主要负责体内葡萄糖在细胞内的扩散，促进细胞的新程代谢，是人体葡萄糖跨膜转运的主要载体[9]。有研究报道，当机体出现肿瘤等病理情况时，体内GLUT-1可出现异常表达，常作为肿瘤病理检查的标记物[10-11]。GLUT-1 主要分布与细胞膜、胎盘及血脑屏障中。当机体出现恶性肿瘤时，无糖酵解增加，引起细胞中GLUT-1 的代谢增强，检查可见GLUT-1 处于高表达状态[12-13]。p53是临床发现最早的抑癌基因之一，对肿瘤蛋白有一定的抑制效果，在癌细胞中均可见到p53蛋白的高表达。因此，众多学者认为，p53蛋白的表达与肿瘤的恶性程度有显著相关性[14-15]。国内外研究显示，p53蛋白分为野生型与突变型两种，前者对恶性肿瘤细胞的增殖具有一定的调控性，后者可诱导异常基因的表达，促进肿瘤的发生[16-17]。本研究采用免疫组化法对细胞中GLUT-1与p53蛋白的表达水平进行检测，分析两者对乳腺癌患者各病理特征与疾病预后的关系。

本研究数据显示，癌组织与癌旁组织中GLUT-1与p53 蛋白的表达水平比较中，癌组织中GLUT-1 阳性表达与p53 蛋白阳性表达例数均明显高于癌旁组织。表明在癌组织中，GLUT-1 与p53 蛋白均出现异常表达，两者表达水平的高低与乳腺癌的发生有密切的关系，与陶德友等[18]描述相一致。有研究报道，细胞缺氧与营养缺乏是GLUT-1表达异常的主要诱因。由于恶性肿瘤增值速度明显快于正常细胞，在生长过程中快速吸收机体内营养，消耗氧气，促进葡萄糖代谢和转运，细胞中GLUT-1、血管内皮生长因子等异常增加，为肿瘤细胞新的血管生成提供条件，从而加速了肿瘤的生长与转移[19-20]。经3 年的随访发现，GLUT-1阳性表达与p53蛋白阳性表达的生存率均明显低于两者阴性表达的生存率，这说明GLUT-1 与p53 蛋白的高表达可增加乳腺癌患者的死亡率。金羽茜等[21]研究表明，p53蛋白可促进乳腺癌组织对正常组织的侵袭，加快癌组织的转移，从而增加乳腺癌患者的死亡率。本研究中数据显示，GLUT-1 与p53 蛋白表达水平与淋巴转移、TNM分期、雌激素受体水平、孕激素受体水平有关。有研究显示，肿瘤直径、有无淋巴转移、各病理分期均可反映癌细胞生长情况，恶性程度越高的肿瘤细胞中，GLUT-1 与p53 蛋白表达水平均明显升高且与肿瘤的生长情况呈正相关[22]。雌孕激素是腺癌检查中的主要监测因子，两者可作为乳腺癌疾病的预测因子，雌孕激素的阳性表达越高，则p53蛋白表达水平越高，与国内相关报道一致[23]。本研究显示，GLUT-1(阳性)、p53蛋白(阳性)作为影响乳腺癌患者预后死亡的相关危险因素，可见两者可作为了解患者病情发展、评估术后转归的重要指标。提示临床工作中可通过加强监测GLUT-1 及p53 蛋白，了解乳腺肿瘤的发生及发展。由于本研究纳入样本量较小，研究结果难免存在偏倚，后续笔者将扩大样本量，进一步分析GLUT-1 及p53 蛋白对乳腺癌患者预后的预测价值，以获得更有价值的研究结果服务与临床。

综上所述，GLUT-1 与p53 蛋白在乳腺癌癌组织中均呈高表达状态，且与其临床各病理特征及预后有关，两者对了解乳腺肿瘤的发生、发展，评估患者预后意义重大。