液质联用检测番茄中的嘧菌酯

马秀珍(青海省农产品质量安全检测中心，青海 西宁 810000)

嘧菌酯英文名称：Azoxystrobin，分子式：C22H17N3O5，分子量：403.3875。是一种广谱、高效、新型杀菌剂，具有保护、防治、铲除三种功效，根据研究[1～5]嘧菌酯可用于茎叶喷雾、种子处理，也可进行土壤处理，它对几乎所有真菌纲(子囊菌纲、担子菌纲、卵菌纲和半知菌类)病害，如白粉病、锈病、颖枯瘸、网斑病、霜霉病、稻瘟病等均有良好的活性，且与目前已有杀菌剂无交互抗性。在番茄植株喷雾嘧菌酯可显著影响番茄的生理特性，增强抗逆性。嘧菌酯一般用于谷物、水稻、葡萄、马铃薯、蔬菜、果树及其它作物。

嘧菌酯的过量使用会造成严重污染，危害人类健康和生态可持续发展，因此，本实验利用液相色谱—串联质谱，以番茄为检测对象，建立果蔬中嘧菌酯农药残留的检测方法。

1 实验部分

1.1 仪器与设备

液相色谱(岛津LC-30AD)-串联质谱仪(AB4500)，高速组织捣碎机(转速20000r/min);离心管；分析天平(感量0.01)；均质仪；高速离心机(4000r/min)；0.22um有机系针孔滤膜过滤器；涡旋仪以及实验室常规实验设备。

1.2 试剂与材料

嘧菌酯标准溶液100ug/ml(农业部坏境质量监督检验测试中心)；乙腈(德国Merk公司，色谱纯)；甲醇(德国Merk公司，色谱纯)；甲酸；氯化钠；复合型氨基固相萃取柱。

1.3 实验步骤

1.3.1标准溶液的配制

将嘧菌酯标准溶液(100ug/ml)用甲醇和番茄基质分别稀释至0.005ug/ml、0.01ug/ml、0.02ug/ml、0.1ug/ml、0.2ug/ml标准工作溶液，用于做标准工作曲线。

1.3.2样品制备

将番茄切碎、混匀、密封，作为试样，表明标记，置于0～4℃冷藏保存，这符合制样保存标准[6]。

1.3.3样品提取与净化

准确称取样品20g(精确至0.01)于50ml离心管中，加入40ml乙腈，用高速组织捣碎机(转速15000r/min)匀浆提取2min，加入氯化钠5～6g，继续匀浆提取2min，在4000r/min离心机上离心5min，取上清液10ml(相当于试样5g)，在37℃水浴中旋转浓缩至1ml，待净化。采用复合型氨基柱净化，万辉研究[10]固相萃取不会产生乳化问题，效率高，节约试剂。将净化柱放在下接平底烧瓶的固定架上，用乙腈+甲苯(3+1)预洗净化柱，当液面达到填料顶部时迅速将浓缩液转移至净化住中，并更换平底烧瓶。再用5ml乙腈+甲苯(3+1)分次洗涤样品瓶三次，并将洗涤液转移至净化柱中，再用15ml乙腈+甲苯(3+1)洗脱农药，合并于平底烧瓶中，并在37℃水浴中旋转浓缩至近干，加入1ml甲醇+水(70+30)混匀，经0.22um滤膜过滤后待上机测定，此提取净化方法误差与标准[7]结果相近。

1.3.4液相色谱与质谱条件

色谱柱为C18 3um，150×2.1mm;流动相为甲醇-1%(体积分数)甲酸水溶液，流速为0.3ml/min，柱温为40℃，进样梯度程序见表1。

表1 流动相梯度洗脱表

质谱扫描方式为ESI正离子扫描；检测方式为多反应监测(MRM)离子对；气帘气40psi；离子化电压4500V；离子源温度为550℃；辅助加热气为50psi；喷雾气为50psi;采用的离子对为m/z：404.1～372和404～344.1，Collision Energy CE分别为20和34，Declustering Potential DP都为70，Entrace Potential EP都为10，Collision Cell Exit Political CXP都为10。

2 结果与分析

2.1 方法的线性关系

分别取0.005ug/ml、0.01ug/ml、0.02ug/ml、0.1ug/ml、0.2ug/ml的嘧菌酯纯溶剂和基质溶剂，上机检验，以待测物浓度为横坐标，待测物峰面积为纵坐标，绘制线性方程，纯溶剂线性方程为y=1.85e+003x+5.23e+0.003(r=0.9997)(纯溶剂标准曲线见图1)；基质线性方程为y=1.08e+003x+3.18e+003(r=0.9995)(基质标准曲线见图2)；结果显示，相关系数均大于0.9990，可见线性关系良好。

图1 纯溶剂标准曲线

图2 基质标准曲线

2.2 基质效应、检出限和定量限

2.2.1基质效应

基质效应是指样品中的杂质干扰待测物的离子化，使待测物在仪器上的响应发生增强或者抑制的现象，因此，为提高待测物的准确度，要选择方法消除或减少基质效应的影响。通过对比分析甲醇溶剂标液色谱图峰面积(图谱见图3)和番茄基质标液色谱图峰面积(图谱见图4)，发现甲醇溶剂嘧菌酯峰面积大于番茄基质嘧菌酯的峰面积，说明番茄基质对嘧菌酯有抑制作用，这与前人分析基质效应的结果一致[8]。为了消除这种抑制作用，选择被测样品的空白样品进行前处理，得到空白样品基质溶液，配置基质标，采取基质标准曲线进行结果计算分析。

图3 甲醇溶剂图谱

图4 番茄基质图谱

2.2.2检出限和定量限

按照检出限和定量限评估分析方法[9]检测一系列基质标液，当信噪比S/N≥3时得到检出限为0.006mg/kg，当信噪比S/N≥10时得到定量限为0.01mg/kg，满足检测要求。

2.2.3方法回收率和精密度

在番茄中分别添加0.01mg/kg、0.1mg/kg、0.2mg/kg三个浓度水平标准溶液，每个水平重复6次，从番茄基质标准溶液图谱以及加标样品图谱中得出保留时间为6.82～6.83，峰形及分离度良好，空白基质不干扰样品检测，所得结果见表2，结果显示回收率均在75.00%以上。

表2 番茄基质中嘧菌酯的回收率、精密度

3 结论

本实验建立液相色谱—三重四极杆串联质谱检测番茄中嘧菌酯残留量的方法，前处理采用复合型氨基柱净化，相比传统净化省去浓缩换样过程，提高了效率，同时有效除去了色素、有机酸、糖类等干扰杂质，采用基质标准溶液绘制标准曲线消除基质抑制效应，该方法的检出限和定量限均符合我国农产品检测要求，回收率和精密度满足实验要求，可用作番茄等果蔬中嘧菌酯残留检测技术参考。