Endiandrin A对嗅鞘细胞活力的研究

钱然

摘要：嗅鞘细胞是嗅觉系统的胶质细胞，它是脊髓损伤后进行神经修复治疗的一种有前途的方法。嗅鞘细胞分泌神经因子的浓度不同，会对嗅鞘细胞体外存活率有影响，我们评估了不同浓度神经因子对嗅鞘细胞活力的影响，并用化合物Endiandrin A（End A）对嗅鞘细胞进行活力影响的评估，以确定它是否能在神经因子的存在下存活。我们发现，End A能在神经因子的存在下，显著地提高嗅鞘细胞的存活，这些结果首次证明End A能调节嗅胶质细胞，从而有利于神经修复，从而改善移植后的生存。

关键词：嗅鞘细胞;神经因子;脊髓损伤

脊髓损伤（spinal cord injury，SCI）后神经细胞遭到破坏，神经功能恢复困难，如果早期治疗不当，功能改善往往不如人意。而嗅鞘细胞（olfactory ensheathing cells，OECs） 移植被认为是治疗SCI最有希望的方法[1]。研究发现[2]，嗅上皮干细胞可以产生新的神经因子，能使鼻和脑重新建立联系。本文主要评估化合物End A对OECs活力的影响，以确定它在神经因子的存在下，OECs最强活力时的最佳浓度。

1.材料和方法

1.1 OECs培养

小鼠的OECs在含有10%胎牛血清、G5补充剂、庆大霉素、L-谷氨酰胺和5%CO2的DMEM培养基中培养一周，再重新移植进行分析。

1.2 Endiandrin A

由Endiandra Domin的分离物质End A（A末端）由澳大利亚布里斯班格里菲斯大学Eskitis研究所提供，分子式为C20H24O4。在DMSO中制备10Mm的储备溶液，将储备溶液在培养基中稀释至0.1至10μM的浓度。

1.3 MTS检测细胞活力

用cellTiter 96水溶液试剂MTS法测定细胞活力和增殖。简言之，将OECs以1.5x104细胞的密度接种于96孔板中，使细胞粘附过夜。将A末端和甲基普雷德尼松酮以不同浓度（0.1-10μM）添加到96孔中，孵育24小时[3]。加入一份MTS溶液（10μL），然后在37℃，黑暗中培养2小时。用酶标仪在490nm处记录吸光度，用0.1%DMSOv/v处理对照组以及含有培养基但没有细胞的孔，测定吸光度的百分比计算细胞活力。每项试验一式三份，活力结果以百分比表示。体外培养的OECs用抑制剂孵育24h，然后用End A末端处理12、24和36h，进行MTS测定。

2. 结果

2.1.神经因子对OECs活力的影响

用不同浓度的神经因子孵育OECs （0.97-1000μg/mL）24小时，以确定可能对细胞产生毒性的大小。实验发现神经因子的浓度在62.5-1000µg之间，会显著降低细胞活力（图1）。对OECs诱导25%细胞生长抑制（IC25）的神经因子剂量为125μg/mL。

2.2.End A对存在神经因子的OECs活力的影响

我们评估了End A对在神经因子（IC25）浓度下OECs活力的影响。与对照组相比，End A浓度在10µM能有效地提高细胞活力约40%，并且在存在神经因子的情况下，与对照组没有加神经因子的相比，OECs显示出多约20%的增殖能力（图2）。

3.讨论

SCI后的再生修复是一个很大的难题，影响因素众多，移植OECs治疗SCI是一项充满前景的工作。不过现在人们发现，单独依靠嗅鞘细胞移植获得的临床效果很有限，联合应用其他药物，发挥协同作用来完成治疗脊髓损伤是将来的发展方向。

本实验研究了①不同浓度神经因子对嗅鞘细胞活力的影响，研究发现脊髓损伤产生高浓度（>62μg/mL）（图1）的神经因子会降低OECs增殖，说明嗅神经因子的浓度与嗅鞘细胞独特的作用密不可分[4]。②并用化合物End A对嗅鞘细胞进行活力影响的评估，以确定它在神经因子的存在下，OECs最强活力时的最佳浓度。在测试的End A浓度中（图2），10μM End A在刺激OEC活力方面最有效。在低浓度（0.1μM）时，End A仍能促进细胞增殖，但作用不显著。

综上所述，End A是潛在的发挥OECs活力的药物，并且在End A浓度为10μM时作用效果最好。从基础和临床等多方面深入研究SCI和OECs，对今后解决SCI后再生修复这一医学难题具有深远意义。

参考文献

[1]Franssen，E.H.，F.M.de Bree，and J.Verhaagen，Olfactory ensheathing glia：their contribution to primary olfactory nervous system regeneration and their regenerative potential following transplantation into the injured spinal cord.Brain Res Rev，2007.56（1）：p.236-58.

[2]Chen，X.，H.Fang，and J.E.Schwob，Multipotency of purified，transplanted globose basal cells in olfactory epithelium.J Comp Neurol，2004.469（4）：p.457-74.

[3]Leal-Filho，M.B.，Spinal cord injury：From inflammation to glial scar.Surg Neurol Int，2011.2：p.112.

[4]Raisman，G.，Olfactory ensheathing cells and repair of brain and spinal cord injuries.Cloning Stem Cells，2004.6（4）：p.364-8.