Galectin3、CD56和Mc在术中冰冻诊断困难的甲状腺乳头状癌中的表达和意义

田 琨，张瑞明

（1.北京市海淀区妇幼保健院乳腺病防治中心，北京100080；2内蒙古医科大学附属医院甲乳外科）

1 引言

THCA是头颈部发生率较高的一类内分泌系统恶性肿瘤，全球此病发病率在全身恶性肿瘤中为1%～2%左右的占比，近些年THCA发病率不断攀升[1]。在甲状腺恶性肿瘤中，PTC的发生率最高，且发病人数最多，但其可实现较好预后，就病发生率而言，男性低于女性，在青少年与儿童所含的甲状腺恶性肿瘤中通常为PTC[2，3]。关于PTC的含义，肿瘤国际组织学分类的解释为：甲状腺存在确切滤泡细胞分化表现，具典型的滤泡与乳头构造，特征性胞核异常的一类上皮恶性肿瘤；在临床诊治过程中经常会遇到病理无典型性、不易诊断的患者，极大提高了病理诊断难度，发现对PTC确诊有所帮助，且在特异性、敏感性方面有着良好表现的分子标志物非常关键。

Galectin（半乳糖凝集素）是一类可与半乳糖相结合的可溶性凝集素，当前发现的类型已有15种[4]。研究证实，Galectin-3低表达或不表达于甲状腺良性病变中，但在PTC中几乎均为阳性表达。

CD56是一种可以识别神经细胞黏附分子的糖蛋白[5]。有研究表明CD56过表达的肿瘤与恶性肿瘤转移的潜能和预后较少呈正相关[6，7]。它在诊断PTC时可以作为协助的一个阴性指标。

Mc是一种单克隆抗体，研究表明Mc在甲状腺乳头状癌的阳性率为100%。故近年来其大多用于甲状腺恶性肿瘤的鉴别诊断[8]。

本实验对144例甲状腺乳头状癌、36例结节性甲状腺肿进行Galectin-3、CD56、Mc蛋白的免疫组织化学检测，探讨这些抗体标志物在临床中甲状腺乳头状癌诊断和鉴别诊断的作用。

2 材料与方法

2.1 实验材料

2.1.1 材料来源选取内蒙古医科大学附属医院经术中冰冻诊断难以确诊、经术后病理证实为PTC的病例144例，NG36例，对它们的免疫组化的表达结果进行统计学分析。其中，16例为男性患者，164例为女性患者，年龄范围为29~68岁，中位数年龄为46岁。取肿瘤周边合并结节性甲状腺肿的石蜡标本。所有材料均为4%甲醛固定、石包埋的组织。

2.2 实验方法

2.2.1 检测指标为CD56、Galectin-3、Mc蛋白 根据检验科标准，免疫组化采用Eli VisionTM Plus二步法。

2.2.2 修整后的蜡块 在石蜡切片机（德国Leica）上连续切片。

2.2.3 H-E染色

2.2.4 免疫组化染色

（1）65℃烤箱内，行烤片处理。

（2）脱蜡与水化。

（3）PBS液漂洗。

（4）加入试剂1（相应生物素化的二抗），移至恒温箱内，在37℃条件下行20min孵育处理。

（5）加入试剂2（相应生物素化的二抗）。

2.2.5 结果判定 每一张病理切片均分别由两名病理科医师单盲法评估。Galectin-3和Mc可见表达于细胞质，CD56则在包膜与胞质上表达。结果判定：显示黄色颗粒分布，同时相较背景明显偏高的着色，属于阳性，有些细胞核着色Galectin-3，各切片皆选出5个400×高倍镜视野，对各视野内阳性细胞量在总细胞量中的占比进行逐一统计。接着将这5个视野内阳性细胞占比的均数当做此例阳性细胞的占比终值。在划分等级方面，＋代表阳性细胞10%～25%占比；2＋代表阳性细胞25%～50%占比；3＋代表阳性细胞50%～75%占比；4＋为75%～100%阳性细胞；其中＋和2＋为弱阳性，3＋和4＋为强阳性；而阴性病例（－）为无或<10%阳性细胞。

2.3 统计结果

数据处理的工具为SPSS 26.0软件包。将“＋”与以上病例归入免疫组化（IHC）阳性组，在对比多组数据阳性率方面，实施χ2检验，对等级数值实施秩和检验，若条件不具备，实施精确概率法检验，差异具显著水平的检验水准为“P<0.05”，在关联性分析方面，采取Spearman秩相关分析法。差异缺乏统计价值的条件为“P>0.05”。

3 结果

3.1 镜下观察甲状腺乳头状癌细胞的病理形态

甲状腺乳头状癌的典型病理结构：

I.结构:乳头状

II.细胞核特点:

1.核增大

2.核拥挤或重叠

3.染色质透亮

4.核形不规则

5.核内假包涵体

6.核沟

III.沙砾体砂粒体形态：（i）同心圆排列的钙盐沉积；（ii）圆形或椭圆形；（iii）位置与肿瘤细胞相关，位于肿瘤间质或淋巴管，不能位于滤泡腔内

IV.纤维化

但上述一些病变的情况有时不是同时具备，鉴定困难就需要做免疫组化（见图1～3）。部分镜下观察甲状腺乳头状癌细胞的病理形态。

图1 甲状腺乳头状癌的细胞核沟

图2 甲状腺乳头状癌的细胞核内包涵体

图3 甲状腺乳头状癌的细胞核形不规则

3.2 Galectin-3的免疫组化染色结果

Galectin-3阳性染色颗粒的分布以细胞质为主，小部分在细胞核内出现。其显示棕褐色、黄色颗粒分布，同时相较背景着色明显偏高，属于阳性。在PTC 144人中，124人为阳性表达，达86%阳性率，其中8人为强阳性表达，100人为弱阳性表达，另36人为阴性表达。在36例NG中，16人为阳性表达，达44%阳性率，0人强阳性表达，16人弱阳性表达，另20人为阴性表达。在表达方面，对比两组发现有显著不同（P<0.05）（见表1）。

表1 NG和PTC组织中Galectin-3的表达

PTC的Galectin-3表达与肿瘤大小、性别、淋巴结迁移状况、年龄、病灶皆缺乏明显联系（见表2）。

表2 PTC的Galectin-3表达与性别、病灶、年龄、淋巴结转移情况、肿瘤大小相关性分析

3.3 CD56的免疫组化染色结果

CD56的表达以细胞膜为主，胞质内低表达或未表达。其显示棕褐色、黄色颗粒分布，且相较背景着色明显偏高，属于阳性。在144例PTC病人中，阳性表达的有60人，达41%阳性率，但皆属于弱表达；在36例NG病人中，28人为阳性表达。存在显著区别（P<0.05）（见表3）。

表3 NG和PTC中CD56的表达

PTC的CD56阳性表达人数偏少，和肿瘤大小、性别、淋巴结迁移状况、年龄、病灶不存在明显联系（见表4）。

表4 PTC的CD56表达与性别、病灶、年龄、淋巴结转移情况、肿瘤大小相关性分析

3.4 Mc的免疫组化染色结果

Mc阳性表达场所以细胞质为主。其显示棕褐色、黄色颗粒分布，且相较背景着色明显偏高，属于阳性。在144例PTC病人中，阳性表达者为128人，达88.9%阳性率，皆属于弱表达；在36例NG病人中，12人显示阳性表达。存在显著区别（P<0.05）（见表5），具统计价值。

表5 NG和PTC中Mc的表达

PTC的Mc阳性表达人数偏少，和肿瘤大小、性别、淋巴结迁移状况、年龄、病灶不存在明显联系（见表6）。

表6 PTC的Mc表达与性别、病灶、年龄、淋巴结转移情况、肿瘤大小相关性分析

在分别分析了三项指标的阳性表达情况后，为了解Galectin-3、CD56、Mc三项指标间的相关性，又分别对144例甲状腺乳头状癌患者三者的表达情况进行了相关性分析，对三者的阳性表达率进行了多重比较。结果发现，Galectin-3、Mc两项指标间差异不显著；Galectin-3、Mc与CD56间差异显著（P<0.05）。Galectin-3与Mc呈正相关，Galectin-3、Mc分别与CD56呈负相关。

4 讨论

甲状腺肿瘤分为恶性和良性两部分肿瘤。临床上难以确定性质的甲状腺结节，寻找能帮助诊断和鉴别诊断PTC的特异性标志物极其重要。我们检测了Galectin-3、CD56、Mc蛋白在PTC和结节性甲状腺肿疾病中的表达情况，为鉴别甲状腺结节和PTC早期发现提供理论基础。

表7 Galectin-3、CD56、Mc三项指标间的相关关系

4.1 Galectin-3的表达及其意义

GL-3仅表达于恶性病变内，尤其在PTC内基本皆是阳性表达，多数是强阳性，但在正常甲状腺组织与良性甲状腺结节无表达，或为小部分弱阳性表达，所以，在对甲状腺良恶性病变进行鉴别诊断方面，GL-3指标具备应用价值[9]。

此项研究发现，GL-3于PTC中的表达量大幅上调，两组之间表达存在差异性（P<0.05），有统计学意义。表明GL-3对甲状腺乳头状癌诊断的准确性较高，故可以作为甲状腺良恶性疾病相鉴别的重要标志物。本课题还进一步研究了GL-3的表达与甲状腺乳头状癌的性别、年龄、肿瘤大小的关系，其结果提示以上几项因素与GL-3的表达均无明显的相关性（P>0.05）。

4.2 CD56的表达及其意义

研究发现，CD56在良性甲状腺病变及PTC的病灶旁良性的甲状腺组织中均表现为细胞膜阳性表达。有研究发现，CD56在任一PTC内皆呈阴性表达，但在任一甲状腺良性病变的上皮内显示为持续性阳性表达[10]。此项研究有2例阳性显示为散点状表达，表达场所皆为甲状腺周边正常组织相交肿瘤组织区域，此发现相符于全球研究人员的研究结果，P<0.05，具显著差异性。CD56在PTC内呈现出较低的阳性率，同时此项研究发现，CD56和PTC的性别、肿瘤转移、肿瘤大小、年龄皆缺乏明显联系（P>0.05）。

4.3 Mc的表达及其意义

Mc此单抗是以间皮细胞为抗原进行制备的，研究表明，其于PTC内呈100%阳性率。Mc阳性于PTC内的表达具显著差异性（P<0.05），有统计学意义。与文献报道的结果相符。

5 结论

本研究选取内蒙古医科大学附属医院经术中冰冻诊断难以确诊、经术后病理证实为PTC的病例若干，对其免疫组化的表达结果进行统计学分析。探讨Galectin3、CD56和Mc在中冰冻不易诊断的PTC中的表达，为诊断的PTC提供有效的辅助诊断依据。结果表明：

1.在鉴别诊断PTC与诸如NG等甲状腺良性病变方面，对于PTC，Galectin-3具备较高灵敏度，然特异度表现不佳，若此蛋白于甲状腺病变内的表达水平为中度以上，那么存在极大PTC可能性。

2.在鉴别诊断PTC与良性甲状腺病变方面，也可将CD56阴性对照当做参考指标。

3.在鉴别诊断PTC与良性甲状腺病变方面，Mc具备非常高的敏感度，特别在诊断与鉴别诊断甲状腺微小乳头状癌（PTMC）方面发挥着十分关键的作用。

4.在鉴别诊断良、恶性甲状腺疾病方面，Galectin-3表达负向相关于CD56表达；Galectin-3表达正向相关于Mc表达；Mc表达负向相关于CD56表达。

5.PTC中Galectin-3、CD56及Mc蛋白的免疫表达情况，和病人肿瘤大小、年龄、淋巴结转移状况、病灶、性别等临床病理信息皆不存在联系。