酶联免疫吸附法影响乙型肝炎五项检测结果的因素

于 潇

（沈阳金域医学检验所有限公司实验室诊断部，辽宁 沈阳 110164）

由乙型肝炎病毒感染引起的感染性肝炎称为乙型肝炎。目前，常用五项乙型肝炎检查来判断患者病情的严重程度和传染性[1]。五项血清临床标志物分别为HBsAg血清标志物、HBeAb血清标志物、HBeAg血清标志物、HBcAb血清标志物和HBsAb血清标志物，检测体内乙型肝炎病毒感染的标志物即“乙型肝炎五项”。在临床实验室大多采用酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）检测乙型肝炎五项，该方法的特异性及临床灵敏度高，但操作步骤较复杂，存在许多临床问题[2]。采用ELISA分析不同血清状态和水浴时间对临床乙型肝炎五项检测结果的影响，有助于提高临床检验质量。本研究旨在探讨酶联免疫吸附法与临床间接免疫荧光法检测抗核抗体的意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2018年1月至2019年1月在沈阳金域医学检验所有限公司实验室诊断部的200例乙型肝炎五项临床检测样本，并应用酶联免疫吸附法检测临床血清中的HBsAg浓度、血清中抗-HBs浓度、血清中HBeAg浓度、血清中抗-HBe浓度和血清中抗-HBc浓度五项标志物。200例乙型肝炎五项检测样本男性109例，女性91例；年龄32～62岁，平均年龄（39.00±1.90）岁。

1.2 方法 晨起取患者空腹状态下的肘静脉血12 mL，并其分为5等份，每等份2.4 mL，依次注入5根玻璃管。1个样本未经抗凝剂处理，1个样本经临床抗凝剂处理，另外3个样本分别在37.5 ℃水浴加热20 min。所有标本离心4000 r/min 30 min和40 min，并用ELISA法检测血清HBsAg浓度、血清HBsAb浓度、血清HBeAg浓度、血清HBeAb浓度和血清HBcAb标志物。选用北京普赞生物技术有限公司生产的5种临床乙型肝炎检测诊断试剂盒，型号为PZ-KJ-HDA324DD，并严格遵守临床操作规范。

1.3 观察指标 观察并记录不同水浴状态下5种乙型肝炎病毒的阳性检出率和不同水浴时间的乙型肝炎阳性检出率。

1.4 统计学方法 采用SPSS 20.0统计学软件对数据进行分析。计量资料采用（±s）表示，组间比较行t检验；计数资料采用[n（%）]表示，组间比较行χ2检验；P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

抗凝剂处理过的标本阳性率与未经抗凝剂处理过的标本阳性率比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；标本水浴加热20 min的阳性率检测结果与标本水浴加热30 min的阳性率及标本水浴加热40 min的阳性率检测结果比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 不同血清状态乙型肝炎五项检测结果比较

3 讨论

乙型肝炎是一种常见的临床传染病，如果不及时治疗将发展为肝硬化、肝细胞癌，严重影响临床患者的生活和健康[3]。ELISA快速、可靠，在我国临床上得到了广泛的应用[4]。因此，常用于5种临床乙型肝炎项目的检测中，但在检测过程中有许多影响因素会导致检测结果出现误差[5]。使用抗凝剂会导致假阳性率增加，这是因为抗凝剂在ELISA中起到促进或抑制过氧化物酶的作用而形成结合物。ELISA检测不同水浴时间血液中乙型肝炎的结果不同[6]。水浴加热时间越长，阳性率越低[6]。这是因为在不同时间水浴加热的离心血清样本中纤维蛋白和过氧化物酶细胞成分不均等，黏附在96孔板反应孔上，最终导致假阳性[7]。除了上述2种情况会影响ELISA的检测结果外，笔者在日常工作中还总结了以下原因[8]：①标本出现严重溶血，血红蛋白中的亚铁血红素具有过氧化物酶样活性，并能黏附在ELISA的反应孔上。如果不洗掉则可催化底物产生假阳性结果[9]。②标本被细菌污染，有些细菌有内源性酶或分泌能催化底物着色的酶并导致结果错误。③抗体或抗原的免疫活性随储存时间的延长而降低，导致假阴性结果[10]。④当样本中的HBsAg或（和）HBeAg浓度过高时会发生钩子效应，使强阳性变弱阳性或阴性。为了使ELISA结果更加准确可采取以下措施：在检测过程中使用新鲜的血清样本，适当延长离心时间、增加离心速度；在血液样本自然凝固后将血清分离以确保血液样本中的活性物质完全失活，在样本采集和临床处理过程中应尽量避免溶血的发生；在采集和临床操作过程中应避免细菌的污染；应立即分离血清并低温保存，高抗原浓度的样本可适当稀释后再进行后续操作[11-13]。不同的血清状态和水浴加热时间可以影响乙型肝炎病毒的ELISA检测，且在检测过程中还存在其他临床影响因素。乙型肝炎五项指标被认为是一项重要指标，要求检测人员要认真负责，并按临床规范操作，以减少误差，同时做好室内质量控制，保证结果准确、可信[14-16]。检测乙型肝炎五项结果的影响因素可提高临床检查质量。本研究发现，抗凝剂处理过的标本阳性率与未经抗凝剂处理过的标本阳性率比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；标本水浴加热20 min的阳性率检测结果与标本水浴加热30 min的阳性率及标本水浴加热40 min的阳性率检测结果比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。

综上所述，不同的血清状态和水浴加热时间可影响ELISA检测五项乙型肝炎的结果，但在ELISA检测过程中还存在其他影响因素。临床试验单位应分析ELISA检测乙型肝炎五项指标的临床影响因素，以提高临床检测水平。