日粮中添加复方刺五加颗粒对乌骨鸡运输应激的影响

■罗欣然 牛 炎 侯晓曼 倪春莉 梁 菁 舒 刚

（四川农业大学动物医学院创新制剂研究中心，四川成都 610030）

应激是动物机体受到一切不利因素的刺激时所引起的应答性反应，即应激综合征[1]。外界很多因素都能引起应激，例如运输、过热过冷、缺乏营养、气体、精神紧张等，其中运输是最为重要的应激源之一。现如今，畜禽养殖方式多为集约化养殖，集约化养殖在动物进出养殖场、转群、集中屠宰前都需要运输，从而不可避免地产生运输应激。运输应激是指在运输途中的环境变化、禁水禁食、运输过程的颠簸及人为造成的压力等多种因素的作用下，动物机体做出的适应性反应和防御性反应[2]，当机体不能抵抗应激带来的影响时，就会出现亚健康、疾病甚至死亡。目前，因为运输应激而引发的畜禽疾病、致残或死亡所造成的经济损失巨大[3]。

应用镇静剂、电解质和氨基酸缓解运输应激是主要治疗方式，但是，化学合成药物副作用大、药物残留、耐药性等问题极大影响动物健康及畜禽产品的安全性，而传统中药处方制剂具有低残留、低副作用、无污染、不引发药源性疾病的特点，且价格便宜，产品易得。因此，找寻中药抗应激药物，对于保证畜禽健康以及发展中国传统中药有十分重要的意义。刺五加富含有机酸、氨基酸和微量元素等多种营养物质和多糖、黄酮等生物活性物质，具有增强免疫[4]、抗氧化[5]、抗炎[6]、抗疲劳[7]、抗肿瘤[8]等多种药理作用；广藿香能化湿、解暑、止呕；茯苓有镇静、强心作用。因此，试验以刺五加、广藿香和茯苓作为中药处方，将其制成复方刺五加颗粒，考察其对运输应激的缓解作用，为将该复方制剂用于临床抗运输应激提供一些参考。

1 材料与方法

1.1 试验材料

复方刺五加颗粒的组成：刺五加（5 g/kg）、广藿香油（0.096 g/kg）、茯苓（1 g/kg）、吡啶羧酸铬（0.2 mg/kg）、维生素C（50 mg/kg）、维生素E（50 mg/kg）、葡萄糖（30～50 g/kg），柠檬酸钾（0.17 g/kg）。总抗氧化能力（TAOC）、总蛋白（TP）、总超氧化物歧化酶（T-SOD）、谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）测定试剂盒，均购自南京建成工程生物研究所。

1.2 主要仪器设备

YP202N电子天平（上海青海仪器有限公司），BC-2800Vet全自动血细胞分析仪（深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司）、DNM-9602G酶标分析仪（北京普朗新技术有限公司）、RM2235石蜡切片机（徕卡微系统有限公司）、CX22光学显微镜（日本奥林巴斯）等。

2 试验方法

2.1 试验动物饲养及管理

240只健康、体重状况相似[（46±0.5）g]的1日龄乌骨鸡雏鸡（由四川丰岩牧野农业发展有限公司提供），采用网架常规饲养，饲养温度（35±2）℃，相对湿度50%～60%。

2.2 试验分组及运输处理

试验设计采用完全随机设计，单因子对照试验。选用240只1日龄天府乌骨鸡，随机分为4组，每组60只，每组4个重复，每个重复15只。空白对照组饲喂基础饲粮；低剂量组饲喂按照300 mg/kg添加复方刺五加颗粒的饲粮；中剂量组饲喂按照400 mg/kg添加复方刺五加颗粒的饲粮；高剂量组饲喂按照500 mg/kg添加复方刺五加颗粒的饲粮（见表1），试验共计21 d，基础日粮组成及营养水平表见表2。

表1 试验动物分组与给药情况

表2 基础饲粮组成及营养水平（风干基础）

试验第21 d，各组随机选取16只鸡装载在转运笼中(750 mm×550 mm×270 mm)，每个笼子装8只鸡。试验期在秋季，试验当天的室外环境平均温度为18℃，运输过程中车内平均温度为20℃，当天空气质量优。家禽运输车在公路(包括红绿灯路口和颠簸路段)上以80 km/h左右的车速进行2 h的道路运输，期间包括缓停、急刹、启动、转弯和调头等，与生产实践中道路运输过程尽可能相近。运输结束后即刻解剖采样。

2.3 生长性能的测定

每天观察鸡的健康状况、生长情况和死亡情况，及时结算饲粮，以便将死亡鸡的饲粮消耗剔除。于雏鸡1、7、14、21 d时，每次09:00之前以重复单位空腹称重，统计各阶段试验雏鸡的平均体重、平均日采食量、平均日增重及料重比。

平均体重（BW，g）=总体重/试验鸡数

平均日增重（ADG，g）=增重/（试验天数×试验鸡数）

平均日采食量（ADFI，g）＝饲料消耗量/（试验天数×试验鸡数）

料重比（F/G）=饲料消耗量/增重

2.4 脏器指数及体重变化的测定

于雏鸡21 d时，运输前、后，每个重复各选2只鸡，每组8只鸡，称重后静脉放血致死，取心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏，滤纸吸干水分后，剥离脂肪和无关组织，电子天平称重。根据鸡体重，计算鸡的器官指数。

脏器指数（g/kg）=器官鲜重（g）/活体重（kg）

于运输前、后各个重复所有鸡只称重，以计算运输前后平均体重变化。

2.5 样本的采集与处理

于雏鸡21 d时，运输前、后每个重复各选2只鸡，每组8只鸡，对雏鸡进行静脉采血2 mL，将血液收集至真空收集管，室温静置1 h后离心收集血清，保存于-80℃冰箱备用；取血后处死动物，迅速分离取下肝脏组织用液氮速冻，保存于-80℃冰箱中备用。

2.6 血清生化指标检测

将此前保存于-80℃冰箱中的血清样本取出，采用微板法测定血清中钙（Ca）的含量，采用磷钼酸法测定血清中磷（P）的含量，采用葡萄糖氧化法测定血清中葡萄糖（Glu）的含量。

2.7 肝脏抗氧化指标检测

将此前保存于-80℃冰箱中的肝组织取出，在冰盒上研磨后取样进行肝脏中还原性谷胱甘肽（GSH）、总超氧化物歧化酶（T-SOD）、总抗氧化能力（TAOC）、丙二醛（MDA）等指标的检测。采用HE染色评估肝脏组织病理变化。

2.8 统计学处理

采用Excel 2010对数据进行初步处理，采用SPSS 23.0软件进行多重比较分析，结果用“平均值±标准差”表示，以P<0.05作为差异显著性。

3 结果与分析

3.1 复方刺五加颗粒对乌骨鸡生长性能的影响（见表3）

由表3可知，空白组与各试验组的平均体重和平均日增重差异不显著（P>0.05）。与空白组相比，1～7 d和1～21 d时，各试验组的平均日采食量均显著下降（P<0.05）；8～14 d和15～21 d时，低剂量组的平均日采食量显著下降（P<0.05）。与空白组相比，1～7 d时，各试验组的料重比均显著下降（P<0.05）；1～21 d时，各试验组的料重比均下降（P>0.05）。

表3 复方刺五加颗粒对乌骨鸡生长性能的影响

3.2 复方刺五加颗粒对运输前后乌骨鸡脏器指数及体重变化的影响（见表4）

由表4可知，运输后的空白组平均体重比运输前空白组的有显著下降（P<0.05），而中剂量组和高剂量组的平均体重在运输前后变化不显著（P>0.05）。运输前后，各组的心脏指数变化差异不显著（P>0.05）。运输前后，各组的肝脏指数变化差异不显著（P>0.05）。运输前后，各组的脾脏指数变化差异不显著（P>0.05）。运输前后，各组的肺脏指数变化差异不显著（P>0.05）。试验结果说明复方刺五加颗粒对运输前后乌骨鸡脏器指数影响不大。

表4 复方刺五加颗粒对运输前后乌骨鸡脏器指数的影响

3.3 复方刺五加颗粒对运输前后乌骨鸡血清生化指标的影响（见表5）

表5 复方刺五加颗粒对运输前后乌骨鸡血清生化指标的影响

表5（续）复方刺五加颗粒对运输前后乌骨鸡血清生化指标的影响

由表5可知，运输应激会造成空白组血清Ca2+浓度显著下降（P<0.05）；运输后的低、中、高剂量组的血清Ca2+浓度比空白组升高，且低剂量组显著升高了13.55%（P<0.05）。说明复方刺五加颗粒有利于缓解运输应激造成的血清Ca2+浓度的变化。运输应激会造成血清GLU含量显著下降（P<0.05）；运输后的低剂量组比空白组的血清GLU含量显著上升（P<0.05）。说明复方刺五加颗粒有利于缓解运输应激造成的血清GLU含量的变化。运输前后，各组血清P含量变化不大（P>0.05）。运输应激会造成空白组血清LDH水平显著上升（P<0.05），运输后的低、中、高剂量组与空白组相比，血清LDH水平下降不显著（P>0.05）。

3.4 复方刺五加颗粒对运输前后乌骨鸡肝脏抗氧化指标的影响（见表6）

表6 复方刺五加颗粒对运输前后乌骨鸡肝脏抗氧化指标的影响

由表6可知，运输应激会造成空白组肝脏GSH含量显著下降（P<0.05）。与运输后的空白组相比，各试验组的肝脏GSH含量均上升，且高剂量组显著上升了6.40%（P<0.05）。说明复方刺五加颗粒能缓解运输应激造成的肝脏GSH含量下降，且高剂量组效果最佳。运输应激会造成空白组肝脏MDA含量显著上升（P<0.05）。与运输后的空白组相比，各试验组肝脏MDA含量均下降，且中、高剂量组显著下降（P<0.05）。说明复方刺五加颗粒能缓解运输应激造成的肝脏MDA含量上升，且高剂量组效果最佳。运输应激会造成空白组肝脏T-AOC水平均显著下降（P<0.05）。与运输后的空白组相比，各试验组肝脏T-AOC含量均上升，中、高剂量组显著上升（P<0.05）。说明复方刺五加颗粒能缓解运输应激造成的肝脏T-AOC水平下降，且高剂量组效果最佳。运输应激会造成空白组肝脏SOD含量均显著下降（P<0.05）。与运输后的空白组相比，各试验组肝脏SOD含量均上升，高剂量组显著上升（P<0.05）。说明复方刺五加颗粒能缓解运输应激造成的肝脏SOD含量下降，且高剂量组效果最佳。

4 讨论

4.1 复方刺五加颗粒对乌骨鸡生长性能的影响

生长性能是反映肉鸡生长的最直接指标，也是与肉鸡养殖行业的经济收益紧密相关的指标。有研究发现，刺五加提取物能促进仔猪消化系统的发育，提高营养物质消化吸收的能力，从而提高断奶仔猪的生长性能[9]。同样叶建萍等[10]研究也发现，在基础饲粮中添加刺五加提取物能够显著提高白羽肉鸡的平均日增重，降低料重比，说明刺五加提取物的添加提高了肉鸡的生长性能。本研究也同样发现刺五加复方颗粒能降低料重比，但对平均日增重影响不大，可能与选用鸡的品种以及刺五加颗粒添加的剂量有关。

4.2 复方刺五加颗粒对运输前后乌骨鸡脏器指数及体重变化的影响

研究发现运输应激会造成肉鸡体重下降，这与王泽仁等[11]的研究结果一致，可能与运输途中出现饥饿、缺水、疲劳等造成营养物质大量消耗有关。而使用中、高剂量复方刺五加颗粒组的肉鸡在运输前后体重变化不大，说明复方刺五加颗粒对乌骨鸡运输应激造成的体重减少有保护作用。脏器指数是反映动物机体功能状况的一项生物学特征指标[12]。发育完全的内脏器官才能维持机体正常生理水平。心脏是维持血液循环的动力，向机体全身供应氧和营养物质的同时也带走代谢废物。肝脏是进行脂肪代谢、排毒的重要场所，同时肝脏也是动物的免疫器官之一。脾脏是主要的免疫器官，参与机体的体液免疫和细胞免疫。肾脏是机体营养物质代谢的主要场所，参与机体的电解质、渗透压平衡、排泄代谢废物[12-13]。本研究发现，刺五加复方颗粒对乌骨鸡心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏的脏器指数无明显影响，说明刺五加复方颗粒对乌骨鸡无明显负面作用。

4.3 复方刺五加颗粒对运输前后乌骨鸡血清生化指标的影响

适当的离子平衡在组织脏器功能中起关键作用，对确保整个机体的正常功能至关重要，一旦离子平衡被破坏，细胞损伤和脏器功能紊乱就会发生[14]。运输应激会造成血清Ca2+的浓度下降，组织Ca2+的浓度上升，这可能与Ca2+离子通道的活性受运输过程影响所致[15]。本研究也得出与上述一致的结果，在运输应激之后，肉雏鸡血清的Ca2+浓度显著下降。研究表明，刺五加能影响钙离子通道[16]。本研究也同样发现，复方刺五加颗粒有助于运输应激肉鸡钙离子保持稳态。

GLU是机体代谢所需的重要能源物质，在运输应激状态下，为了维持机体的正常血糖平衡，肝糖原的分解就会增加，当肝糖原消耗殆尽后，血液中的GLU含量就会显著降低[17]。本研究发现，运输应激后肉鸡血清中GLU显著下降，而复方刺五加颗粒能缓解GLU的下降，说明刺五加颗粒有利于应激造成的血糖失衡，这可能是复方刺五加颗粒中含有刺五加多糖和葡萄糖的原因。

LDH是反映机体能量代谢的重要生化指标，当机体受到强烈刺激或剧烈运动、肌肉疲劳或肌细胞膜系统受损时，血清中LDH含量会显著增加[18]。本试验中肉鸡在运输之后，血清中LDH浓度较运输前显著上升，说明运输中各种应激源对肉鸡的刺激致使机体疲劳，肌肉肌细胞受损或能量供给不足，导致LDH溢出。而低、中、高剂量的复方刺五加颗粒能降低LDH含量，说明复方刺五加颗粒对运输应激造成的疲劳有缓解作用，这与张东杰等[19]的研究结果一致。

4.4 复方刺五加颗粒对运输前后乌骨鸡肝脏抗氧化指标的影响

在生物体正常代谢过程中，活性氧（ROS）的产生和消除保持了动态平衡[20]。当细胞受到内外环境中不利因素的刺激时，ROS的产生比消除更多，使得机体内的平衡被破坏，最终导致氧化应激，对动物体产生不利影响。动物机体清除体内自由基、分解过氧化物以及清除发挥催化作用的金属离子主要通过非酶促和酶促两种体系，其中酶促体系则主要包含SOD和GSH等。T-AOC是反映机体酶及非酶促体系统的抗氧化水平高低的重要指标。MDA是动物细胞膜脂质过氧化的产物，其含量可间接反映细胞的损伤程度。本研究发现，运输应激会造成肝脏T-AOC、SOD、GSH含量下降，MDA含量上升，即运输应激降低了乌骨鸡肝脏的抗氧化能力，这与赵泮峰[17]研究结果一致。而使用复方刺五加颗粒可以缓解运输应激造成的氧化应激，这与Kim等[21]的研究一致，这可能与刺五加含有多糖、刺五加苷等化合物有关。

5 结论

在日粮中适当添加复方刺五加颗粒可以促进乌骨鸡生长性能，改善代谢水平和抗氧化功能，缓解运输应激对乌骨鸡的影响。