GP73和HSP90α在低浓度甲胎蛋白原发性肝癌诊断中的应用价值

丁华洋，王兴宇，刘学谦，刘付宝

1 材料与方法

1.1 病例资料

选取2018年4月-2019年9月在本院进行诊治的人员150例，血清AFP低浓度肝病(PHC组50例，肝硬化组30例，肝炎组30例)患者110例，其血清AFP浓度在1.1～108.0 μg/L；其余40例为同期在本院体检的健康对照者，血清AFP为阴性，排除肝硬化、肝炎以及肝脏良恶性肿瘤等。PHC组，男35例，女15例，年龄34～82(59.44±11.15)岁。肝硬化组，男18例，女12例，年龄34～78(58.27±10.39)岁。肝炎组，男19例，女11例，年龄30～74(56.97±11.49)岁。健康对照组，男21例，女19例，年龄31～84(57.12±12.12)岁。4组研究对象在年龄、性别等一般临床因素上的差异均无统计学意义，具有可比性。

1.2 研究方法

4组研究对象使用促凝管于清晨空腹抽取肘静脉血3 ml，3 000 r/min离心10 min 分离血清，-80℃冰箱保存。GP73测定采用ELISA方法，试剂盒购自北京热景生物技术有限公司；HSP90α测定采用ELISA方法，试剂盒购自烟台普罗吉生物科技发展有限公司。

检测4组血清GP73和HSP90α水平并比较其差异；分析单独检测GP73、HSP90α以及联合检测对AFP低浓度PHC患者诊断的灵敏度、特异度和准确度差异，探讨其在AFP低浓度PHC诊断中的应用价值。

2 结果

2.1 各组血清GP73和HSP90α检测结果比较

各组血清GP73表达水平比较，差异有统计学意义(

P

<0.01)，其中PHC组高于肝硬化组、肝炎组和健康对照组(

P

<0.01)，肝硬化组、肝炎组高于健康对照组(

P

<0.05)；各组血清HSP90α表达水平比较，差异有统计学意义(

P

<0.01)，其中PHC组高于肝硬化组、肝炎组和健康对照组(

P

<0.01)，肝硬化组高于健康对照组(

P

<0.01)，肝炎组与健康对照组比较，差异无统计学意义。见表1。

表1 各组血清GP73和HSP90α表达水平比较

2.2 血清GP73和HSP90α在PHC组中与淋巴结转移、门脉侵犯和肿瘤大小之间的关系

PHC组患者有淋巴结转移和门脉侵犯22例，无淋巴结转移和门脉侵犯28例，比较两组间血清GP73和HSP90α，差异有统计学意义(

P

<0.05)。 PHC组患者肿瘤大小≥5cm 有29例，肿瘤大小<5cm有21例，比较两组间血清GP73和HSP90α，差异无统计学意义。见表2。

表2 血清GP73和HSP90α在PHC组中与淋巴结转移、门脉侵犯和肿瘤大小之间的关系

2.3 通过ROC曲线分析血清GP73和HSP90α单独检测对PHC的诊断效果

绘制ROC曲线，分析血清GP73和HSP90α单独用于诊断PHC的效果，并确定最佳临界值。通过ROC曲线分析，血清GP73和HSP90α曲线下面积分别为0.873(95%

CI

：0.818～0.928)和0.965(95%

CI

：0.938 ～0.992)，

P

均<0.001。根据约登指数最大的原则，血清GP73和HSP90α用于鉴别诊断PHC的最佳临界值分别是87.46、90.76 ng/ml。见图1。

2.4 血清GP73和HSP90α单独检测和联合检测对PHC诊断的应用价值

PHC患者中，GP73阳性39例，阳性率78.0%；肝硬化患者中阳性13例，阳性率43.3%；肝炎患者中阳性7例，阳性率23.3%；健康对照组中阳性3例，阳性率7.5%。PHC患者中GP73阳性率高于肝硬化组、肝炎组和健康对照组，差异有统计学意义(χ=9.905、22.929、44.377，

图1 PHC患者中GP73、HSP90α的ROC曲线

PHC患者中，HSP90α阳性42例，阳性率84.0%；肝硬化患者中阳性4例，阳性率13.3%；肝炎患者中阳性1例，阳性率3.3%；健康对照组中无阳性，阳性率0.0%。PHC患者中HSP90α阳性率高于肝硬化组、肝炎组和健康对照组，差异有统计学意义(χ=38.315、49.079、63.000，

P

=0.000)。而肝炎组的阳性率与健康对照组的差异无统计学意义(χ=1.353，

P

=0.245)。见表3。

表3 各组血清GP73和HSP90α阳性率的比较(%)

联合检测中，50例PHC患者中GP73阳性的患者有39例，HSP90α阳性的患者有42例，两项指标均阳性的患者有34例，GP73阳性而HSP90α阴性的患者有5例，HSP90α阳性而GP73阴性的患者有8例，两项指标均阴性的患者有3例。GP73和HSP90α平行试验(GP73/ HSP90α)的灵敏度最高，达到94.0%；GP73和HSP90α系列试验(GP73+ HSP90α)的特异度最高，达到96.0%。见表4。

3 讨论

PHC的发生主要是慢性乙型、丙型肝炎病毒感染、受黄曲霉菌污染的食品、大量饮酒、肥胖、吸烟和2型糖尿病等危险因素作用的结果。我国是全球PHC发病率最高的国家，其进展快、恶性程度高、早期症状不明显，发现时已是中晚期，预后差，故早期发现PHC具有重要意义。目前，AFP是临床上应用最多的PHC血清肿瘤标志物，但其敏感度和特异度不高，对AFP低浓度PHC易漏诊，使其临床应用价值受限。GP73和HSP90α是两种新型PHC血清肿瘤标志物。GP73是整合在高尔基体上的跨膜糖蛋白，仅在肝胆管上皮细胞中表达，而在肝细胞中表达水平极低。Zhou et al通过荟萃分析显示，GP73在诊断PHC的灵敏度和特异度上可以与AFP相媲美，可作为一项独立的血清肿瘤标志物。Shi et al通过对GP73蛋白、mRNA检测分析发现，GP73诊断疗效优于AFP。Zhang et al研究发现，AFP阴性PHC患者血清GP73表达水平有不同程度的升高，GP73可作为在AFP阴性PHC中的新型肿瘤标志物。HSP90α是一种具有多功能的分子伴侣，其广泛参与细胞信号转导、激素应答以及转录调控等生理活动，维持着细胞正常的生理功能，在肿瘤细胞中呈活跃状态，在正常细胞中呈静默状态。研究表明，HSP90α可分泌到胞外，与HSP70等形成复合物，在肝癌细胞转移、侵袭和微血管浸润中起关键作用。Wang et al通过使用HSP90α抗体或其抑制剂可抑制HSP90α的过表达，对肝癌细胞的增殖和分裂起阻碍作用，为PHC的靶向治疗提供理论基础。

表4 血清GP73和HSP90α单独检测和联合检测对PHC诊断的应用价值

本文主要通过对50例AFP低浓度PHC患者的GP73和HSP90α的血清水平进行检测分析，探讨其在AFP低浓度PHC诊断中的应用价值。结果显示，在AFP低浓度PHC患者中，血清GP73和HSP90α含量以及阳性检出率显著高于肝硬化、肝炎、健康对照者，差异有统计学意义(

P

均<0.01)。因此，可将GP73和HSP90α作为临床诊断AFP低浓度PHC的有效肿瘤标志物。本研究显示有淋巴结转移和门脉侵犯的AFP低浓度PHC患者血清GP73和HSP90α含量高于无淋巴结转移和门脉侵犯的PHC患者，差异有统计学意义(

P

<0.05)。因此，也可将GP73和HSP90α用于判断PHC患者有无淋巴结转移和门脉侵犯的依据。

本研究结果表明，GP73和HSP90α联合检测可提高对AFP低浓度PHC诊断的灵敏度和特异度。GP73或HSP90α(GP73/HSP90α)任一阳性诊断AFP低浓度PHC的灵敏度最高，达到94.0%，可作为排除PHC的指标。而GP73和HSP90α(GP73+HSP90α)同时阳性诊断AFP低浓度PHC的特异度最高，达到96.0%，联合检测可用于确诊PHC。