高效液相色谱-串联质谱法同检鸡肉氟喹诺酮类与金刚烷胺残留分析

周灿 隆雪明 杨彦宁 陈福华 欧海军 张港 魏唯

（湖南省兽药饲料监察所 410006）

近年来，禽肉产品中药物残留检测成为是畜禽产品中安全监控的重点，特别是氟喹诺酮类药物及抗病毒药物的监测成为重中之重，国家制定了严格的法律法规，加强了食品安全监测工作。

目前，关于这些抗菌抗病毒药物的检测方法较多，有液相色谱法、液相色谱-质谱联用法、酶联免疫法等。但这些方法大多针对单一类药物检测，存在检测耗时耗力、效率不高等弊端。本试验旨在建立高效液相-串联质谱法同时检测鸡肉中金刚烷胺与8 种氟喹诺酮类药物残留量，该方法操作简单、快速、准确、灵敏度高，便于推广应用。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

HPLC-30A/QTRAP 4500 超高效液相色谱-串联三重四级杆质谱联用仪（SCIEX，日本岛津公司），高效冷冻离心机（Tmermo MμLTIFμGE X1R），纯水仪（Millipore 公司）。

诺氟沙星、氧氟沙星、甲磺酸培氟沙星、盐酸洛美沙星、甲磺酸达氟沙星均为德国Dr 公司，盐酸沙拉沙星、恩诺沙星、盐酸环丙沙星均为中国兽医药品监察所，金刚烷胺为曼哈格，恩诺沙星D5、环丙沙星D8、金刚烷胺D15、沙拉-D8、环丙-D8、诺氟-D5 为阿尔塔。甲醇、乙腈、乙酸、甲酸均为色谱纯、正己烷为分析纯、实验室用水符合GB/T 6682 规定的一级水。

1.2 标准品溶液配制

分别精密称取各标准品，用纯甲醇溶解定容至刻度，配制成质量浓度为500mg/L 的混合标准品溶液，置于棕色瓶中，于-20℃冰箱中保存。再根据需要用流动相稀释为系列标准曲线浓度。

1.3 样品前处理

称取均质后的试样2.00g 于50ml 离心管中，加入100ng/ml的混合内标溶液0.05ml，加入10ml 1%乙酸乙腈溶液，盖上塞子，于涡旋混合仪上涡旋2min，以14000r/min 的速度离心5min，将上清液转移至另一离心管中，氮吹至近干，用1.00ml 0.1%甲酸水乙腈（9+1）溶解，加入2ml 的乙腈饱和后的正己烷，涡旋1min，高速离心5min 后取下层清液过0.22μm 滤膜，待测。

1.4 测定方法

1.4.1 色谱条件

色谱柱型号为BEH C18（100mm×2.1mm，1.7μm），流动相A 为0.1%甲酸水溶液，流动相B 为乙腈溶液，梯度洗脱条件见表1。流速为0.3ml/min，柱温：35℃；进样量：5μL。

1.4.2 质谱条件

离子源：电子喷雾离子源（ESI），扫描方式：正离子扫描；检测方式：多反应监测（MRM）；电喷雾电压（IS）：5500V；离子源温度(TEM)：550℃；气帘气 (CμR) ∶10psi；雾化气（GS1）：50psi；辅助加热气 (GS2)：50psi；碰撞气 (CAD)：Mediμm；其余质谱参数见表2。

表2 质谱参数

2 结果分析

2.1 样品前处理条件的优化

喹诺酮类药物极性较大，且该化合物结构式中含有羧基和哌嗪基，属于酸碱两性，金刚烷胺是碱性化合物，本实验参照相关标准考察了1%乙酸乙腈，乙酸乙酯，1%甲酸甲醇，1%甲酸乙酸乙酯作为提取溶剂，实验表明，乙酸乙酯、酸化乙酸乙酯只对恩诺沙星有一定的提取效果，其他几种药物提取效率均很低。甲醇的极性较强，提取的杂质较多，且氮气难吹干，不利于实验的开展。采用1%乙酸乙腈提取时，乙腈对生物蛋白沉淀作用较好，能起到一定的净化作用，对鸡肉的8 种氟喹诺酮类及金刚烷胺有较好的回收率。为了简化过程本方法采用1%乙酸乙腈提取一次，结果表明，用内标校正能获得较好的回收率。

2.2 净化条件优化

食品兽药残留分析常用净化方法有冷冻去脂法，有机溶剂液液去脂法，固相萃取柱法等。比较了固相萃取与正己烷液液萃取，结果表明，固相萃取对回收率有一定影响。本方法采用正己烷去脂，同时采用内标法校正，回收率更高，定性更准确。

2.3 线性方程、检出限、定量限

9 种药物在0.5～20μg/L 范围内线性关系良好，相关系数（R2）均大于0.99，以空白样品添加浓度信噪比S/N≥3 确定方法检出限（LOD），以S/N≥10 倍信噪比的添加浓度确定定量限（LOQ），LOD 为0.05～0.5μg/kg，LOQ 为0.1～1μg/kg。

2.4 回收率和精密度

在1、2、5μg/kg 添加浓度下对鸡肉进行氟喹诺酮类及金刚烷胺类的加标回收和精密度实验（n=6），其中试样添加回收率在70%～115%之间，相对标准偏差为1.3%～12.2%。

3 结论

本文建立了LC-MS/MS 快速测定鸡肉中8 种氟喹诺酮类药物及金刚烷胺的方法。前处理过程简单高效，通过内标法有效的补偿基质效应带来的影响。该方法检出限、定量限完全满足标准要求，精密度好，准确度高，适用于鸡肉中氟喹诺酮类及金刚烷胺的检测分析。