一例犬瘟热的诊断、预防与控制

于占松

（山东省胶州市动物疫病预防与控制中心 266300）

犬瘟热最早发现于17 世纪，1809 年Jeneer 首次报道了犬瘟热的存在，自1905 年被发现，已广泛分布于世界各个国家，我国报道犬瘟热的时间比较晚，1980 年在我国首次报道。犬瘟热传染性强，临床症状不唯一，发病后容易造成继发感染，对动物健康安全造成极大的威胁。目前已经证实犬瘟热除能感染犬类，对雪貂、狐狸、大熊猫、小熊猫等动物均易感。犬瘟热是当前犬科动物最常见的传染性疾病，传播性强，分布范围广。犬感染后临床症状主要表现为眼鼻分泌物增多、双相热、腹泻、呕吐、足垫增厚，有的会出现抽搐神经症状等，且犬瘟热经常与犬细小病毒、犬冠状病毒、滴虫等疾病共同感染[1]，在临床治疗比较困难。

1 犬瘟热病原学

犬瘟热（Canine distemper,CD）是由犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV) 引起的疾病，犬瘟热病毒属于副黏膜病毒科，麻疹病毒属，为单股负链无节段RNA 病毒[2]。病毒呈球形，直径为150～330nm，外面包裹一层囊膜，基因组全长为15690bp，编码6 种结构蛋白，血凝素蛋白(Haemagglutinin,H蛋白)、核衣壳蛋(Nucleoprotein,N 蛋白)、磷蛋白(Phosphoprotein,P 蛋白)、基质膜蛋白(Martrix protein,M 蛋白)、融合蛋白(Fusion,F 蛋白)、大蛋白(Large protein,L 蛋白)[3]。其中血凝素蛋白(H) 是犬瘟热病毒的主要抗原，同时也是诱导机体产生中和抗体的重要抗原，是最易发生变异的抗原[4]，犬瘟热病毒仅有1 个血清型。该病毒对环境的抵抗力比较差，干燥、高温、紫外线直射都能将其杀灭，常规的消毒剂来苏儿、甲醛及烧碱等也可用于该病毒的消毒，因为该病毒有囊膜，有机溶剂能破坏其囊膜，从而起到杀灭病毒的效果[5]。通常情况下，犬瘟热病毒在2～4℃可以存活数周，室温能存活数天，50～60℃下只能存活1h。强酸强碱会导致犬瘟热病毒快速死亡。在低温冷冻环境下，犬瘟热病毒可以保存的时间比较长，多达数年[6]。

犬瘟热病毒自然宿主较多，包括犬科、浣熊科、猫科、鼬科等多种动物，犬类为主要宿主，对个品种的犬均有易感性，其中纯种犬和小型犬更易感，幼年犬发病率高于成年犬。

2 犬瘟热流行病学

犬瘟热病毒的感染途径主要是呼吸道和消化道，通过机体的外分泌物进行排泄，然后通过空气进行传播。犬瘟热病毒的传染性比较强，同舍动物如果有一只感染，即使采取隔离措施，其他动物也很容易会被传染。通常情况下，带毒犬及病犬是犬瘟热病毒传播的主要源头，而已经受到感染的动物或带毒的其他动物也能作为传染源[7]，犬瘟热感染犬康复后仍会往外排毒。犬瘟热发病受年龄、品种和季节性的影响，一般每2～3年会有一个周期[8]，一般情况下，2～12 个月的幼犬比较容易感染犬瘟热，未断奶犬及老龄犬感染的几率比较低，未断奶犬很大原因与母源抗体获得性主动免疫有关。

通过对不同品种犬感染犬瘟热情况的调查发现，纯种犬比当地土种犬更容易感染，且寒冷季节往往多发。近年来，随着人们对犬的需求越来越大，犬养殖行业也在不断发展，犬类动物在调运、引种和倒种等过程中，其种群中的免疫力水平不断下降，其感染犬瘟热病毒的规律不容易被探知[9]。

3 疑似犬瘟热患病犬的接诊

2020 年10 月，一宠物主人带宠物犬就诊，患病犬精神不振、呕吐、便血、眼睛有黏性分泌物，鼻镜干燥，取血便用安捷犬瘟热抗原快速检测试纸条进行检测，为犬瘟热阳性，初步怀疑该犬患犬瘟热。

4 实验室诊断

4.1 RT-PCR 鉴定

取患病犬眼部分泌物及排泄物，按照RNA/DNA 核酸提取试剂盒步骤进行核酸提取，根据试剂盒说明书操作，将提取的RNA 反转录成cDNA。以此作为模板用PCR 方法扩增目的基因。

扩增引物：根据GenBank 中报道的犬瘟热病毒H 基因序列，用Primer Premier 5.0 软件设计。

CDV-F：5’ -AACGGTGGCTGAATAACATGCC-3’

CDV-R：5’ -ACCACAAATCGTCATCCCACAC-3’

扩增条件：94℃，5min；94℃，30s，57℃，30s，72℃，1min；32 个循环，72℃再延伸10min。

将PCR 产物进行凝胶电泳，结果出现大约900bp 的目的条带（图1）。将PCR 产物送上海生物工程技术有限公司进行序列测定，将测序结果与NCBI 上已发表的序列进行比对，结果与3 株Asia-Ⅰ型犬瘟热核苷酸同源性为97.4%～97.8%，处于统一分支，与America-1 和Europe 型犬瘟热同源性分别为93%和94%，确定该病毒确为犬瘟热病毒，分型属于Asia-Ⅰ型（图2，图3）。

图1 RT-PCR 检测结果

图2 遗传进化图谱

图3 核苷酸同源性比较结果

4.2 病毒分离

取患病犬眼部分泌物加入适量生理盐水，5500r/min 离心20min，取上清，加入终浓度为2000IU 的青链霉素，处理4h，接种长成单层的Vero 细胞，37℃培养120h，每日观察细胞病变情况，结果第一代无细胞病变，将第一代细胞培养物冻融一次，收获后按照15%的比例接种长成单层的Vero 细胞，连续传至第3 代，Vero 细胞出现融合的典型犬瘟热细胞病变（图4-B），正常细胞无病变（图4-A）。

图4 细胞接种后细胞病变情况

5 患病犬的治疗

根据病犬的病情进行治疗，治疗原则是抗病毒，防止继发感染和对症处理。肌肉注射犬瘟热病毒单克隆抗体，1.0ml/kg，每日一次，连用3d，肌肉注射犬干扰素10 万～20 万单位/次，2d/次，肌肉注射双黄连抗病毒，60mg/kg，每日一次，同时静脉滴注头孢、VC、VB6，抗菌消炎，增加机体抵抗力，经过3d治疗，患病犬症状有所好转，精神逐渐恢复正常，但仍然比较虚弱，后期继续用药，葡萄糖加ATP，静脉滴注，补充能量，病犬逐渐恢复，恢复后建议主人进行犬瘟热疫苗的免疫。

6 犬瘟热的预防与控制

犬瘟热病毒出现在世界各地，对犬类造成极大的危害，在临床上要减少犬瘟热发病率就要做到早发现、早隔离、早治疗，注重养防结合，防重于治，加大疫病免疫宣传力度，现在大部分应用犬瘟热活疫苗进行疾病预防，市场上主要的犬瘟热活疫苗为Onderstepoort 株和CDV3 株，市场上还有犬的三联苗、五联苗、八联苗，但还是建议先使用单苗进行免疫，因为联苗抗原彼此之间很有可能产生免疫干扰，导致免疫失败，因此，最好不要为了图省事用多联苗进行免疫。

除了接种疫苗外，还需要注意卫生防控，对犬舍要定期打扫，喷洒消毒药，加强饲养管理，一旦发现饲养犬有发病症状，一定要及时隔离病犬与其他犬类，同时使用消毒剂、干燥剂、清洁剂对犬类活动区域进行清洁，保持干净整洁的卫生环境[10]。在犬饲养过程中给犬饲喂营养丰富的狗粮，不要购买劣质狗粮，注意观察犬只精神、饮食、饮水、排粪等情况，一旦发现异常及时处理就医，做到早发现早治疗[11]。