TCT联合HPV基因分型检测在筛查宫颈癌病变中的临床意义

廖荣誉 林永恩 吴有春 黄建秀

1.广西壮族自治区贺州市人民医院检验科，广西贺州 542800；2.广西壮族自治区贺州市人民医院病理科，广西贺州 542800；3.桂东卫校附属医院检验科，广西贺州 542800

随着人们生活方式以及性观念的转变，妇科许多疾病的发生几率都呈现逐年升高的趋势，而宫颈癌作为妇科常见的恶性肿瘤疾病之一，也尚且如此。根据临床的相关研究发现[1]，人乳头瘤病毒（human papilloma virus，HPV）是导致HPV感染以及宫颈癌出现的重要因素之一。目前，在临床上多采用液基薄层细胞学来进行检查，从而判断受检者的宫颈处是否存在病变组织，达到早期发现、早期预防的目的。随着临床检验技术的发展和进步，HPV基因分型检测也逐渐被应用于宫颈病变组织的筛查中，有学者[2]在此基础上提出，采用TCT联合HPV基因分型检测能够提高检测效率，在预防宫颈癌或者予以早期诊治中，能够起到重要作用。本研究选取参与我院妇科门诊宫颈癌防治筛查的女性作为研究对象，并对其HPV基因分型监测结果进行统计和分析。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2018年1月至2019年12月参与我院妇科门诊宫颈癌防治筛查的420例女性作为研究对象，年龄18～75岁，平均（43.1±5.6）岁。防癌筛查包括液基薄层细胞学检查（TCT）和HPV基因分型检测，本研究经医院医学伦理委员会通过。纳入标准：有正常的性生活；近1个月内无阴道用药、冲洗等；未进行过子宫切除手术；所选研究对象均签署了知情同意书。排除标准：无性生活史者、急性生殖道炎症者、半年内未进行宫颈病变诊治处理者。

1.2 方法

1.2.1 液基薄层细胞学检查（TCT） 受检者入院后，工作人员应准备好检查中需要使用到的仪器。应采用专用的刷子来收集受检者宫颈口周围的脱落细胞组织，同时将脱落的细胞组织放入液小瓶中保存，而保存液的标本需要予以临床系统程序化处理，具体做法如下：首先应将标本中的上皮细胞、炎症细胞分别与血液和黏液进行分离处理，继而在完成高精密度滤器过滤后，需要将其转移到已经进行过静电处理的玻片上；所收集的标本应制作成薄层细胞涂片，同时采用浓度为95%的乙醇进行固定，固定后立即进行巴氏染色，待染色完毕后采用中性树胶封片。其中，在液基薄层细胞学检查中，需要使用的制片仪器和检测技术均来自美国新柏氏公司，电子阴道镜型号为SCK-2008B型；在细胞学中采用TBS分级系统进行诊断。

1.2.2 HPV基因分型检测 首先，应采用HPV核酸扩增分型检测系统来完成受检者机体HPV亚型基因的检测，检测类型共有21种，包括高危型亚型和低危型亚型这两类。同样，在HPV基因分型检测中，需要将受检者的标本组织从液小瓶中转入微量离心管内，13000 r/min，离心5 min，在分离后去除上清液，及时保存离心管底中的细胞块。而后，在离心管底部的细胞块中加入裂解液完成悬浮沉淀，同时放置在90℃的水浴环境中进行加热，继续予以13000 r/min，离心5 min；最后，分离并取出上清液后，继续进行PCR扩增、杂交及显色处理。其中，在HPV基因分型检测所使用到的基因芯片试剂盒，来自深圳亚能生物科技有限公司。

1.3 观察指标及评定方法

1.3.1 病理学诊断标准 从病理组织学的诊断划分来看，根据受检者宫颈的组织病变程度，将其划分5种分型，具体包括：慢性宫颈炎、宫颈上皮内瘤变Ⅰ级、宫颈上皮内瘤变Ⅱ级、宫颈上皮内瘤变Ⅲ级、宫颈癌。统计并记录各级病变例数。

1.3.2 HPV-DNA扩增结果判定 将显色液倒去后，采用清水冲洗膜条，通过对膜条的肉眼观察来判断其变化和检测结果：若是膜芯片中的HPV亚型探针位点处能够发现1个蓝色斑点，则提示受检者发生HPV单一感染；若是膜芯片中的HPV亚型探针位点处能够发现2个及2个以上蓝色斑点，则提示受检者出现双重或者多重HPV感染。统计并记录各级感染的例数。

1.4 统计学处理

应用SPSS21.0统计学软件进行数据处理，计数资料以百分比表示，采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 TCT检测结果

经TCT联合HPV基因分型检测后，TCT阳性合并HPV感染者共202例，不同分型的阳性情况见表1。

表1 TCT检测结果

2.2 TCT阳性时HPV高危型感染情况

在202例TCT阳性合并HPV感染者中，HPV高危型感染66例，阳性率为32.67%。不同类型标本中，HPV高危感染率逐级升高，见表2。

表2 TCT阳性时HPV高危型感染情况

2.3 TCT阳性时HPV低危型和高危型发病年龄比较

HPV低危型患者年龄多位于30岁以下，占比为57.35%；HPV高危型患者年龄多位于30岁以上，占比为86.36%，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表3。

表3 TCT阳性时HPV低危型和高危型发病年龄比较[n（%）]

3 讨论

3.1 宫颈癌早期诊断的意义

宫颈癌主要是由HPV感染而引起的一种妇科恶性肿瘤。根据流行病学的调查原理显示[3]，宫颈癌在近年来呈现出了发病年轻化的趋势。对于女性来说，宫颈癌的出现不仅会导致其生活质量明显下降，身体健康受到影响，还会增加其死亡风险，严重威胁患者的健康安全。在我国的癌症防控规划中，已将宫颈癌列为重点的防治对象之一，这也从侧面反映出了大众在预防宫颈癌方面开始加强了重视。随着各地区宫颈癌防治的宣传工作不断开展，人们也提高了疾病预防的意识，在生活中也积极完善相关检查和宫颈癌筛查，在一定程度上也保证了宫颈癌筛查工作的顺利实施[4-5]。然而，在此基础上，早期诊断的有效率也是我们应当关注的重点。随着临床检测技术的不断进步，越来越多的检测方法被应用到宫颈癌病变的诊断中，以提高宫颈癌的早期诊断率，从而做到早发现、早治疗[6]。为进一步提高宫颈癌的早期诊断率，笔者在文中深入分析TCT联合HPV基因分型检测在筛查宫颈癌病变中的效果及意义。

3.2 液基薄层细胞学检查（TCT）

TCT的全称为“新柏氏液基薄层细胞学”，被作为一种检测技术应用于临床检验中，主要包括制片细胞分布方式、保存细胞标本方式以及细胞薄层制片效果等方面的内容[7]。近年来，大量的研究证明了液基薄层细胞学检查的安全性和有效性，在宫颈细胞的检测、分类及诊断中起到了重要的作用。在临床上，液基薄层细胞学检查也是一种较为先进的检测手段，与传统的宫颈刮片巴氏涂片检测技术相比，具有标本处理满意度高、宫颈检出率高等优点[8-9]。在传统的宫颈刮片巴氏涂片检测中，由于标本中存在黏液、血液等其他细胞组织，从而会导致检测结果出现误差，从而影响临床的诊治。而液基薄层细胞学检查可以在一定程度上改善此类缺陷，提高癌变细胞的检出率，可以让早期癌变的患者得到更为有效的治疗[10]。

3.3 HPV基因分型检测

HPV是导致宫颈癌发生的病原体，在临床检测中，通过HPV基因分型检测能够进一步了解患者的宫颈病变处于哪一类型[11]。在基因分型中，主要包括两种结果，一是低危型HPV感染，另一种则是高危型HPV感染[12]。在100种以上的HPV DNA中，其中存在30多种亚型HPV与宫颈癌的感染和病变存在密切关系，而低危、高危这两种分型方式，也是根据其病理的大小来决定的[13]。由于在治疗前后，机体内HPV感染的型别情况会存在明显差异，这就说明了无论是在宫颈癌病变的筛查中，亦或是诊疗效果的评估中，HPV基因分型检测的作用都十分显著。

3.4 TCT联合HPV基因分型检测

由于早期发现与治疗干预，是防止宫颈癌发生的关键要点，因此我们需要不断加强临床宫颈癌病变的筛查力度，通过检测技术的优化来提高宫颈病变组织的检出率[14-15]。本研究结果显示，TCT阳性合并HPV感染者共202例，其中慢性宫颈炎阳性率为62.38%、宫颈上皮内瘤变Ⅰ级阳性率为13.86%、宫颈上皮内瘤变Ⅱ级阳性率为12.87%、宫颈上皮内瘤变Ⅲ级阳性率为5.94%、宫颈癌阳性率为5%；在202例TCT阳性合并HPV感染者中，HPV高危型感染66例，阳性率为32.67%，说明HPV感染的亚型分类与细胞学分级的结果相似，并且高危型患者的细胞分化功能更差，这与刘星布等 的报道结果基本一致。HPV低危型患者年龄多见于30岁以下，占比为57.35%；HPV高危型患者年龄多见于30岁以上，占比为86.36%，差异有统计学意义（P＜0.05），提示HPV感染的亚型分型与患者的年龄因素有关，30岁以下的患者多为低危型，而30岁以上的患者多为高危型。因本研究样本选取量较少，统计结果可能会存在一定的偏差，需进一步扩大样本量深入研究。

综上所述，TCT联合HPV基因分型检测在宫颈癌病变的筛查中效果显著，可以为临床提供良好的数据支持，争取早预防、早发现、早治疗，达到降低宫颈癌发生的几率，值得在临床上推广应用。