免疫荧光法在阴道分泌物病原体检测中的应用*

尹小毛，赖少芬，冯洁仪，黄锡谊，温双花，吴秀春，王丽斯，王治伟△

1.广州医科大学附属顺德医院检验科，广东佛山 528315；2.广东省食品药品职业技术学校，广东广州 530001

阴道炎是临床妇科发生率较高的一种疾病，其发病原因有多种，较为常见的是阴道加德纳菌、念珠菌和阴道毛滴虫等生殖道病原体导致的感染[1]。目前阴道分泌物细菌和真菌检测的金标准仍然是培养法，但是该方法操作较为烦琐，所需时间也较长，因此临床实验室使用最广泛的检测方法是涂片镜检[2]。阴道分泌物常规检测采用直接湿片法或革兰染色法，能够较为便捷地检出阴道加德纳菌、念珠菌、阴道毛滴虫等病原体，但是此类方法检查阴道分泌物存在一定程度的漏检[3]。免疫荧光法染色通过荧光素标记抗体直接与病原体结合后显色，具备免疫学和形态学的双重优点[4]，本研究拟将其与湿片法进行分析比较，现将研究结果报道如下。

1 资料与方法

1.1标本来源 标本取自2020年12月广州医科大学附属顺德医院门诊或住院成年女性患者39例。用无菌窥阴器扩张阴道，将无菌棉拭子于阴道内约4 cm处内侧壁或阴道后穹窿处采集分泌物，持续转动数秒后放入收集管中，旋紧管盖后立即送检。

1.2仪器与试剂 荧光显微镜购自尼康仪器(上海)有限公司，免疫荧光染色试剂购自深圳市迈科龙生物技术有限公司。载玻片和盖玻片购自江苏飞舟玻塑有限公司，无菌棉拭子购自康正卫生材料有限公司。

1.3方法 参照《全国临床检验操作规程(第4版)》进行阴道分泌物湿片法常规检测操作。免疫荧光法染色操作步骤：将采集的阴道分泌物涂抹于载玻片中央并干燥固定，加入免疫荧光试剂染色(针对不同的病原体使用对应的染色试剂)，以试剂刚好覆盖整个涂片部位为宜，37 ℃孵育20～30 min，使用蒸馏水缓慢冲洗载玻片数次，每次5～10 s，再将玻片自然晾干。干燥后使用荧光显微镜进行观察，先用高倍镜(×40)搜索疑似视野，然后用油镜(×100)观察具体形态。显微镜下：线索细胞边缘模糊不清，细胞内外可见大量绿色短杆状细菌；念珠菌孢子呈绿色圆形或椭圆形；阴道毛滴虫呈绿色圆形或扁圆形(大于念珠菌)。操作过程中应注意控制免疫荧光试剂的用量、孵育时间和洗涤时间，避免因试剂用量过多、孵育时间过长和洗涤时间不够而导致假阳性结果的产生。线索细胞是诊断加德纳菌性阴道炎的重要指标。

1.4统计学处理 采用SPSS22.0统计软件进行数据处理，计数资料以例数或百分率表示，组间比较采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1线索细胞的检出情况 共检测了39例阴道分泌物标本，湿片法和免疫荧光法检出线索细胞的例数分别为15例和9例，阳性率分别为38.46%和23.08%，两种方法检测结果差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 湿片法和免疫荧光法检测线索细胞的结果比较(n)

2.2念珠菌的检出情况 湿片法和免疫荧光法检出念珠菌的例数分别为15例和14例，阳性率分别为38.46%和35.90%，两种方法检测结果差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 湿片法和免疫荧光法检测念珠菌的结果比较(n)

2.3阴道毛滴虫的检出情况 湿片法和免疫荧光法均未检出阴道毛滴虫。

3 讨 论

由于生活节奏的加快和生活习惯的改变，临床妇科疾病的发病率也呈现逐年上升趋势，尤其是阴道加德纳菌、念珠菌和阴道毛滴虫等病原体引起的阴道炎[5]。阴道加德纳菌可通过性接触传播，在细菌性阴道炎中非常常见。目前临床检测阴道加德纳菌的方法较多，但是受多种因素影响，其检测准确性依然不够理想[6]。念珠菌在一定条件下可导致阴道炎，其检出目前主要依靠涂片镜检，临床检验过程中还是存在一定程度的漏检。阴道毛滴虫体积较大，镜下形态也比较独特，因此相对比较容易被检出。

直接免疫荧光技术主要原理是用荧光素标记抗原或抗体，然后与标本中的抗体或抗原特异结合，最后通过荧光显微镜观察来实现靶标的检测[4]。鉴于湿片法在病原体尤其阴道加德纳菌检测方面存在的不足，本研究拟分析免疫荧光法染色在阴道分泌物病原体检测中的应用价值。

本研究对39例阴道分泌物标本分别采用湿片法和免疫荧光法进行病原体检测，结果显示免疫荧光法检测线索细胞和念珠菌的阳性率低于湿片法，但差异均无统计学意义(P>0.05)；两种方法检测阴道毛滴虫的结果完全一致。湿片法观察线索细胞存在较大的主观影响因素，尤其是细胞内细菌形态的判断比较难以把握，而且女性阴道菌群较为复杂，也存在与阴道加德纳菌形态相似的其他细菌。免疫荧光法采用特异性抗体检测阴道加德纳菌，因此具有很好的特异性，能够排除一些形态相似细菌的干扰，故本研究中免疫荧光法检测线索细胞的阳性率低于湿片法(23.08%vs.38.46%)。已有的一些研究报道免疫荧光法检测线索细胞具有很好的特异度和灵敏度，其临床性能优于革兰染色涂片法和唾液酸苷酶活性测定法[6-7]。本研究免疫荧光法检测线索细胞的阳性率较湿片法低，是否反映本研究所用的免疫荧光法灵敏度不高，这需要采用分离培养法来进一步证实[8]。在检测念珠菌方面，因为免疫荧光法采用针对白色念珠菌的特异性抗体，所以不能检出白色念珠菌以外的其他念珠菌，因此本研究结果显示免疫荧光法的阳性率略低于湿片法(35.90%vs.38.46%)。由于能直接识别白色念珠菌，免疫荧光法在一定情况下可以代替分离培养方法。由于本研究中两种方法均未检出阴道毛滴虫，免疫荧光法在阴道分泌物滴虫检测中的应用价值需进一步研究。

综上所述，免疫荧光染色检测阴道分泌物病原体具有较好的应用价值，能够降低线索细胞的错判率，还可以直接检出白色念珠菌。临床实验室可直接应用免疫荧光法染色来检测阴道加德纳菌，而对于念珠菌检测而言，免疫荧光法染色不适合作为首选方法，可作为湿片法和分离培养方法的有益补充，也可用于白色念珠菌的直接鉴定。