ACI后肢体运动功能障碍患者EphA2蛋白与Bold-f MRI、DTI参数相关性

陈历 蒋炳虎 季一飞 靳雨 尹书斌 赵玉萍

急性脑梗死（Acute cerebral infarction，ACI）为临床常见脑卒中类型，患者多预后差，严重影响患者的生存质量［1］。目前临床上多釆用CT、核磁等现代影像学对缺血性脑血管病辅助诊断，如血氧水平依赖功能磁共振成像（Blood oxygenation leve1 dependent functional magnetic resonance imaging，Bold-f MRI）、弥散张量成像（Diffusion tensor imaging，DTI），但影像学仅能描述梗死病灶形态学的改变，无法描述神经功能缺损情况［2-3］。血清生物学标志物具有检测具有床旁操作的可能性与便利性，使其在脑血管疾病方面的应用充满前景［4-5］。笔者前期研究［6］发现，小鼠脑梗死组织中EphA2 表达随着时间不断增多，导致血脑屏障通透性增高，破坏血脑屏障紧密连接的形成，增加大脑内皮细胞通透性，并且抑制神经元再生，促进细胞凋亡。因此本研究尝试探究ACI 后肢体运动功能障碍患者治疗前后血清EphA2 蛋白与静息态Bold-f MRI、DTI 参数相关性及临床意义。报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2020年1月 至2020年12月本 院143 例ACI 后肢体运动功能障碍患者作为研究组，男80例，女63 例；年龄平均（58.05±5.97）岁。另选同期60 例体检正常者（经核磁或CT 排除脑血管疾病）作为对照组，男39 例，女21 例；年龄平均（57.30±5.64）岁。

纳入标准：研究组患者均有明确ACI［7］病史；年龄18～70 岁；发病前mRS 为0 分，右利手；入院时右侧上下肢体肌力均为3 级及以下（由2 名受过培训的神经内科医师共同完成）；Glasgow 评分＞8分，无智能缺陷；经头颅CT/MRI 检查证实梗死部位包括左侧半卵圆中心、基底核区、放射冠区和内囊中的一个或多个部位，梗死总面积＜3 cm2，无明显占位效应、对周围脑组织结构无明显影响；发病时间至入院时间48 h 内。对照组均为全身体检均未发现明显异常，且经核磁或CT 排除脑血管疾病。两组研究对象均知晓本研究，已签署同意书，且本研究经本院伦理委员会审批通过。排除标准：无症状脑梗死者；脑梗死后3 个月内出血转化者；严重肝肾功能不全、严重感染等可能影响本研究指标检测者；血液系统疾病患者；治疗期间有任何部位新发脑梗死者；既往有精神系统疾病、头部严重外伤和手术史者；有MRI 检查禁忌者。

1.2 方法

治疗方法：研究组均给予抗血小板聚集及他汀等常规治疗，同时住院期间行传统康复治疗，持续治疗3 个月后根据肌力分级标准［8］评估疗效，上下肢体肌力均提高2 级及以上为疗效良好，共99例，未达到疗效良好评定为疗效不良，共44 例。

静息态Bold-f MRI、DTI 检查：分别于治疗前、治疗1、3 个月后进行检查，采用1.5T 磁共振扫描仪（GE 公司生产）进行多模态MRI 检查，采集静息态Bold-fMRl 图像，采用回波平面成像（EPI）序列，同时进行三维高分辨率结构图像采集。采用SPM5 软件观察分析患侧颅内初级感觉运动区（SMC）、辅助运动区（SMA）、运动前区（PM），后顶叶皮层（PPC）的低频振幅（ALFF）图像；同时，对受试者行磁共振弥散张量成像（DTI），测量患侧各向异性参数（FA），并计算走行区平均扩散率（Ratio ofmean diffusivity，rMD）值。

血清EphA2 蛋白检测：分别于治疗前、治疗1、3 个月后采集空腹外周静脉血5 mL，离心处理取血清，采用酶联免疫吸附法测定血清EphA2 蛋白，试剂盒购自江苏江莱生物技术有限公司。

1.3 统计学方法

数据处理采用SPSS 22.0 统计软件，计数资料以n（%）描述，采用χ2检验，计量资料采用（）描述，采用t检验，相关性分析采用Pearson 相关系数模型，通过Logistic 进行验证关联性，评估效能分析采用受试者工作特征（ROC）曲线。以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组临床资料比较

研究组血清EphA2 蛋白水平高于对照组，Bold-f MRI 参数、DTI 参数低于对照组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 两组临床资料比较［n（%），（±s）］Table 1 A comparison of the clinical data between 2 groups［n（%），（±s）］

表1 两组临床资料比较［n（%），（±s）］Table 1 A comparison of the clinical data between 2 groups［n（%），（±s）］

项目性别（男/女）年龄（岁）＜60≥60 BMI（kg/m2）＜18.5 18.5～23.9≥24吸烟（是/否）饮酒（是/否）EphA2 蛋白（pg/mL）PM 的ALFF 值SMA 的ALFF 值SMC 的ALFF 值PPC 的ALFF 值FA 值rMD 值研究组（n=143）80/63对照组（n=60）39/21 χ2/t 值0.587 P 值0.444 82（57.34）61（42.66）36（60.00）24（40.00）0.051 0.822 10（6.99）67（46.85）66（46.15）64/79 53/90 49.44±12.35 0.74±0.10 0.76±0.09 0.77±0.08 0.84±0.09 0.86±0.08 0.97±0.07 6（10.00）30（50.00）24（40.00）21/39 18/42 12.35±3.51 0.97±0.13 0.96±0.17 0.98±0.13 1.04±0.17 0.93±0.09 1.12±0.09 0.533 0.297 0.679 0.379 13.323 9.264 8.155 10.064 8.155 3.609 8.937 0.410 0.538＜0.001＜0.001＜0.001＜0.001＜0.001＜0.001＜0.001

2.2 研究组疗效及不同疗效患者血清EphA2 蛋白水平、Bold-f MRI 参数、DTI 参数比较

治疗前、治疗3 个月后，疗效不良患者血清EphA2 蛋白水平均较疗效良好患者高，PM、SMA、SMC、PPC 的ALFF 值、FA 值均较疗效良好患者低（P＜0.05）；疗效良好患者治疗3 个月后血清EphA2 蛋白水平低于治疗前，PM、SMA、SMC、PPC 的ALFF 值、FA 值均高于治疗前（P＜0.05）。见表2。

表2 不同疗效患者血清EphA2 蛋白水平、Bold-f MRI 参数、DTI 参数比较（±s）Table 2 Serum EphA2 protein levels，Bold-f MRI parameters and DTI parameters of patients with different curative effects（±s）

表2 不同疗效患者血清EphA2 蛋白水平、Bold-f MRI 参数、DTI 参数比较（±s）Table 2 Serum EphA2 protein levels，Bold-f MRI parameters and DTI parameters of patients with different curative effects（±s）

注：与同组治疗前比较，aP＜0.05。

时间n治疗前99 44治疗3 个月后组别疗效良好疗效不良t 值P 值疗效良好疗效不良t 值P 值99 44 EphA2 蛋白（pg/mL）43.05±11.09 55.83±14.37 5.789＜0.001 35.58±9.72a 51.63±11.97 8.471＜0.001 PM 的ALFF 值0.82±0.11 0.66±0.09 8.466＜0.001 0.88±0.12a 0.69±0.11 8.960＜0.001 SMA 的ALFF 值0.82±0.10 0.70±0.08 7.020＜0.001 0.91±0.13a 0.74±0.10 7.714＜0.001 SMC 的ALFF 值0.83±0.09 0.70±0.08 8.240＜0.001 0.90±0.13a 0.74±0.11 7.108＜0.001 PPC 的ALFF 值0.92±0.10 0.76±0.08 9.359＜0.001 0.99±0.14a 0.80±0.12 7.813＜0.001 FA 值0.48±0.09 0.38±0.07 6.539＜0.001 0.52±0.11a 0.40±0.09 6.350＜0.001 rMD 值0.98±0.07 0.97±0.08 0.754 0.452 1.10±0.09a 1.08±0.09a 1.227 0.222

2.3 治疗前各指标相关性分析

ACI 后肢体运动功能障碍患者治疗前血清EphA2 蛋白与PM（r=-0.716）、SMA（r=0.648）、SMC（r=-0.682）、PPC（r=-0.688）的ALFF（r=-0.660）、FA（r=-0.688）值间均存在负相关关系（P＜0.05）。

2.4 血清EphA2 蛋白、静息态Bold-f MRI、DTI 参数评估疗效的价值

绘制治疗3 个月后血清EphA2 蛋白、静息态Bold-f MRI、DTI 参数评估患者疗效的ROC 曲线，结果显示，各指标评估疗效的曲线下面积（Area under the curve，AUC）均在0.7 以上，具有良好评估效能，且联合评估的AUC 为0.932，大于各指标单独评估。见表3、图1。

表3 治疗3 个月后各指标评估疗效的效能Table 3 Effectiveness of evaluation of efficacy by indicators after 3 months of treatment

图1 治疗3 个月后各指标评估疗效的ROCFigure 1 ROC of evaluation of curative effect after 3 months

3 讨论

ACI 后肢体运动功能障碍的发生机制复杂，其治疗结果易受多方面因素影响。本研究结果提示上述指标变化可能与ACI 后肢体运动功能障碍的发生有关。由于ACI 后肢体运动功能障碍不同疗效患者的rMD 值无明显差异，故本研究后续的相关性、评估价值中未将rMD 值纳入。本研究还发现，静息态Bold-f MRI 参数、DTI 参数均是ACI 后肢体运动功能障碍患者疗效的关联性因素。Bold-f MRI 是利用磁振造影测量神经元活动引起的血液动力的改变，可直观显示脑卒中和针刺所致大脑皮层的功能区活动情况，以及神经纤维束损伤等情况［9-10］。然而，影像学参数仅能反映梗死病灶形态学的改变，在评估神经功能缺损方面存在一定局限性。

本研究结果提示EphA2 蛋白可能与患者疾病转归情况有关。EphA2 蛋白是在促红细胞生成素产生肝细胞中发现的具有酪氨酸酶活性的基因编码产物，国内石秋艳等［11］通过ACI 大鼠模型的研究，发现少量的EphA2 蛋白可能与维持正常的中枢神经功能有关，ACI 发生可导致EphA2 蛋白表达不断增加，过多的EphA2 蛋白对机体组织具有毒害作用，且EphA2 蛋白表达增高可导致血脑屏障通透性增加、抑制神经元再生、促进脑细胞凋亡。国外Finney AC 等［12］研究证实，内皮细胞EphA2 蛋白通过促进单核细胞的粘附而参与斑块炎症和动脉粥样硬化病变进展，平滑肌EphA2 蛋白可能通过调节平滑肌增殖和细胞外基质沉积而调控动脉粥样硬化进展。但国内外尚无血清EphA2 蛋白水平与ACI 后肢体运动功能障碍患者疗效相关的研究，本研究通过多因素分析提示血清EphA2 蛋白在ACI 后肢体运动功能障碍患者治疗过程中呈负向调节作用，通过抑制其表达水平，或许有助于改善治疗效果。基于上述结果，本研究首次采用ROC 曲线探究血清EphA2 蛋白、静息态Bold-f MRI、DTI 参数评估ACI 后肢体运动功能障碍患者疗效的价值，发现治疗3 个月后血清EphA2 蛋白、静息态Bold-f MRI、DTI 参数评估患者疗效的AUC 均在0.7 以上，具有良好评估效能，尤其是联合评估的AUC 高达0.932，大于各指标单独评估，其原因可能在于EphA2 蛋白可从分子生物学方面对患者病情进行评价，从而对影像学参数的局限性进行补充，可为医生提供更全面的分析数据，从而改善评估效果。

综上可知，ACI 后肢体运动功能障碍患者血清EphA2 蛋白与静息态Bold-f MRI、DTI 参数呈负相关，均与患者疗效显著相关，行血清EphA2 蛋白与静息态Bold-f MRI、DTI 检测有助于临床评估治疗效果。