妊娠期肝内胆汁淤积症患者血清蛋白聚糖-1、肝细胞生长因子表达及其临床意义

管 琳

上海市闵行区妇幼保健院检验科,上海 201102

妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)是妊娠中晚期特发并发症，临床表现为妊娠期孕妇皮肤瘙痒，以血清转氨酶和(或)血清总胆汁酸(TBA)水平升高为突出表现的肝功能受损[1-2]。一般情况下，ICP患者产后症状及血清生化指标可完全恢复，但易引发围生儿宫内窘迫、早产、胎粪感染，甚至新生儿死亡[3-4]。ICP发病机制目前尚未阐明，多数学者认为ICP的发病原因可能与遗传变异、内分泌激素紊乱、免疫功能失调等有关。蛋白聚糖-1(syndecan-1)是硫酸乙酰肝素蛋白聚糖成员之一，通过硫酸乙酰肝素侧链共价结合胞外配体，连接细胞微环境与细胞骨架，调控子宫细胞生长、分化、黏附及迁移等生理过程[5]。关于syndecan-1与ICP的相关研究报道较少。研究发现，肝细胞生长因子(HGF)是一类具有肝素结合特性的酸性蛋白质，可通过旁分泌途径作用于胎盘滋养细胞，是迄今为止首个发现的表达于胎盘间质细胞的滋养细胞调节蛋白[6-7]。因此，本研究通过检测ICP患者血清syndecan-1、HGF水平，分析其与ICP患者病情及妊娠结局的关系，初步探讨其表达意义，以期为临床诊疗提供依据。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2018年6月至2019年12月于本院产科分娩的单胎产妇102例为研究对象，其中ICP患者57例为ICP组，平均年龄(32.53±4.17)岁，平均孕周(36.50±7.41)周；健康妊娠产妇45例为对照组，平均年龄(31.76±4.36)岁，平均孕周(39.19±2.67)周。另选取同期在本院感染科住院治疗的40例乙型肝炎女性为肝炎组，平均年龄(34.19±7.26)岁。ICP诊断标准及分类标准按照《妇产科学》中相关标准，以血清TBA水平高低分为轻度组(TBA<40 μmol/L)31例和重度组(TBA≥40 μmol/L)26例。轻度组患者平均年龄(32.42±4.28)岁，平均孕周(38.42±5.63)周；重度组患者平均年龄(32.74±4.29)岁，平均孕周(34.71±6.12)周。对照组产妇均排除严重心、肝、肾功能不全者；排除高血压、糖尿病、甲状腺功能异常、既往有肿瘤史者；排除急慢性感染性疾病者。肝炎组患者均为血清乙型肝炎病毒(HBV)-DNA阳性者，且排除甲、丙、丁、戊型病毒肝炎或由其他原因(如自身免疫、酒精等)引起的肝炎患者。ICP患者再根据新生儿结局分为妊娠结局不良组和未发生妊娠结局不良组。所有研究对象均自愿签署知情同意书，本研究获得本院伦理委员会批准。

1.2方法

1.2.1血样采集 采集所有研究对象清晨空腹静脉血5 mL，静置30 min后以3 000 r/min离心10 min，将上清液移至干净小型离心管中，-70 ℃条件保存，待测。

1.2.2检测方法 采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清syndecan-1(货号E4354-100，购自武汉艾美捷科技有限公司)及HGF水平(货号CK-E10164，购自武汉益普生物科技有限公司)，检测方法步骤均严格按照试剂盒说明书操作。采用罗氏c501全自动生化分析仪检测血糖、血脂水平，如总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)，以及肝功能指标水平，如天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)水平。

1.2.3观察指标 观察ICP组和对照组新生儿结局，以出现羊水污染、早产儿、胎儿宫内窘迫等为妊娠结局不良，比较不同妊娠结局ICP患者血清syndecan-1、HGF水平。

2 结 果

2.1各组研究对象一般资料比较 肝炎组、ICP组和对照组在年龄、BMI、TC、TG、HDL-C、LDL-C水平上差异无统计学意义(P>0.05)；ICP组孕周明显低于对照组(P<0.05)，肝炎组、ICP组、对照组血清AST、ALT、ALP水平依次降低，差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 各组研究对象一般资料比较

注：-为该项无数据。

2.2各组研究对象血清syndecan-1、HGF水平比较 与对照组比较，轻度组、重度组和肝炎组患者血清syndecan-1水平依次升高，HGF水平依次降低，两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)，见表2。

表2 各组研究对象血清syndecan-1、HGF水平比较

2.3ICP患者血清syndecan-1、HGF水平与肝功能指标的关系 ICP患者血清syndecan-1水平与AST、ALT、ALP水平均呈正相关(P<0.05)，HGF水平与AST、ALT、ALP水平均呈负相关(P<0.05)，见表3。

表3 ICP患者血清syndecan-1、HGF水平与肝功能指标的相关性

2.4ICP患者和健康妊娠产妇妊娠结局比较 ICP重度患者妊娠结局不良率为53.85%(14/26)，其中早产儿10例，羊水胎粪污染4例；ICP轻度患者妊娠结局不良率为19.35%(6/31)，其中早产儿4例，羊水胎粪污染2例；健康妊娠产妇妊娠结局不良率为4.44%(2/45)，其中早产儿2例，各组妊娠结局不良率比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。

2.5不同妊娠结局ICP患者血清syndecan-1、HGF水平比较 与未发生妊娠结局不良ICP患者相比，妊娠结局不良ICP患者血清syndecan-1水平明显升高(P<0.05)，HGF水平明显降低(P<0.05)，见表4。

表4 不同妊娠结局ICP患者血清syndecan-1、HGF水平比较

2.6血清syndecan-1、HGF水平对ICP患者妊娠结局不良的预测价值 ROC曲线结果显示，血清syndecan-1、HGF水平预测ICP患者妊娠结局不良的曲线下面积(AUC)分别为0.864(95%CI0.747～0.940)、0.885(95%CI0.786～0.941)，最佳临界值分别为63.61 ng/mL、2.28 ng/L，对应的灵敏度分别为65.00%、85.00%，特异度分别为92.59%、83.78%；二者联合预测ICP患者妊娠结局不良的AUC为0.946，灵敏度为85.00%，特异度为94.00%，见图1。

图1 血清syndecan-1、HGF水平预测ICP患者妊娠结局不良的ROC曲线

3 讨 论

ICP是妊娠期特发肝病的常见类型，其病因可能与女性激素、免疫因素、环境、遗传和基因等有关，但尚无统一定论，可能由多个基因引起肝脏细胞对雌激素代谢反应异常或应答过激，并在多种环境因素诱导下引起患者不同程度损伤[8-9]。ICP患者TBA相关胎盘形态学发生改变，如胎盘血管收缩、细胞异常凋亡和顶端微绒毛丢失，引起胎盘屏障功能异常，最终导致胎儿不良反应的发生[10]。血清标志物在疾病中的表达成为近年来的研究热点，若能寻找到快速、准确指示ICP患者病情发展及预后的生物学指标，将对ICP的临床诊疗具有重要意义。

syndecan-1作为跨膜细胞表面分子，能够启动细胞外和细胞内环境的串联，是组织间信号传递的重要参与者，也是细胞表面胸苷激酶受体的共受体。既往研究发现，syndecan-1在胎盘微绒毛中高表达，在细胞黏附、增殖、细胞内信号传导、血管生成、脂质代谢和创面愈合中发挥作用[11-12]。syndecan-1表达增加是人类肝硬化的一个典型特征，REGS等[13]进一步研究证实其作用机制可能为直接与转化生长因子-β1(TGF-β1)结合，抑制其发挥作用或通过下调结合血小板反应蛋白-1(TGF-β1的活化剂)干扰TGF-β1的激活，从而阻断TGF-β1对细胞有丝分裂、血管再生等的促进作用，加重组织损伤。本研究结果显示，与对照组比较，肝炎组、ICP组患者血清syndecan-1水平明显升高，且ICP重度组患者血清syndecan-1水平明显高于轻度组，Pearson相关分析结果显示，syndecan-1水平与AST、ALT、ALP水平均呈正相关，表明syndecan-1参与ICP患者肝损伤过程，其水平变化可反映ICP肝损伤严重程度。研究发现，ICP患者血清syndecan-1水平明显高于健康对照组，且在感染后的肝细胞中过表达，并指出syndecan-1可能通过调控肝细胞增殖、凋亡参与肝损伤[14]。然而syndecan-1在ICP患者肝损伤中的具体作用机制不明确，值得进一步研究。

研究发现，HGF是一种多功能抗纤维化因子，具有广泛的生物学作用，可参与肝、肾等器官发育、急性损伤及再生过程[15-16]。HGF广泛存在于人体肝脏等器官的间质细胞中，当这些器官发生损伤时，HGF通过蛋白水解酶裂解激活，产生具有生物活性的HGF蛋白，由间质细胞释放进入外循环，发挥保护作用。CHENG等[17]研究发现慢性肾衰竭小鼠血浆中HGF水平明显降低，利用HGF治疗可下调核因子-κB(NF-κB)、目标C-C基序趋化因子配体(CCL)2、CCL5、细胞间黏附因子1和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达，表明HGF可通过抑制炎症、调控NF-κB信号通路来缓解慢性肾衰竭。有研究表明，间充质干细胞(MSCs)经过氧化氢(H2O2)处理后，过表达HGF可提高细胞存活率，降低凋亡细胞数，而抑制HGF则细胞存活率明显降低，凋亡细胞数目急剧增加，表明HGF对H2O2诱导的骨髓MSCs凋亡具有保护作用[18]。本研究结果显示，肝炎组、ICP组患者血清HGF水平明显低于对照组，ICP重度组患者血清HGF水平明显低于轻度组，且ICP患者血清HGF水平与肝功能指标AST、ALT、ALP水平呈负相关，表明HGF水平与ICP患者病情严重程度有关，可能低水平的HGF对ICP患者肝组织炎症及肝细胞凋亡的抑制作用较弱，其水平越低，患者的肝功能损伤越严重，然而具体机制仍有待进一步研究。对ICP患者妊娠结局观察发现，发生妊娠结局不良患者血清syndecan-1呈高表达，HGF呈低表达，ROC曲线结果显示，血清syndecan-1、HGF水平预测ICP患者妊娠结局不良的AUC分别为0.864、0.885，二者联合预测妊娠结局不良的AUC为0.946，当syndecan-1水平高于63.61 ng/mL、HGF水平低于2.28 ng/L时，ICP患者发生妊娠结局不良的风险增加，提示血清syndecan-1、HGF对ICP患者妊娠结局不良有一定的预测价值，且联合检测效能更高。

综上所述，ICP患者血清syndecan-1水平升高，HGF水平降低，其水平差异表达与ICP患者肝功能损伤程度有关，监测其水平变化可对ICP患者妊娠结局有一定的预测价值，且联合预测价值更高。ICP的发生发展受多方面因素共同作用，今后仍需扩大样本量，开展多中心研究对本结果进行验证。