献血者ELISA单试剂检测呈反应性标本检测结果分析

黄爱琼 肖韶英 黄伯泉 谢君谋 黄志健

临床用血主要利用无偿献血者血液，为实现有效治疗，需保证血液标本安全。目前，国内血站已经大部分开展核酸检测（nucleic acid test，NAT）的方法，核酸检测被公认为是降低血清学窗口期漏检风险及低病毒载量检出的最佳解决方法[1]。酶联免疫检测（ELISA）是血站普遍使用的方法。但是受到很多因素的影响，会使得ELISA单试剂呈反应性。有文献报道，因ELISA单试剂呈反应性而淘汰的标本量为0.66%[2]，血站将对不合格的血液进行报废处理。由于ELISA方法的局限性，难免出现假阳性。这样既浪费了血液，也打击了献血者的热情，造成献血者的流失。现在回顾性分析本站2017年的献血标本ELISA单试剂呈反应性的情况以及核酸检测（NAT）结果的情况，以实施质量控制，降低血液不合格率和淘汰率，节省血液资源，提升无偿献血者的积极性，现将分析结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

广州血液中心2017年1月1日—2017年12月31日无偿献血标本共345 164例，献血者均符合国家《献血者健康检查要求》（GB18467－2011）[3]。每位献血者留取2管标本，一管为5 mL EDTA-K2真空采血管（用于ELISA检测），一管为5 mL EDTA-K2带分离胶核酸专用采血管（用于NAT检测）。ELISA管保存于2~8℃冰箱且于24小时内检测，NAT管采集后4 h内离心，在标本采集后24 h内完成各项检测。

1.2 主要仪器和试剂

自动酶联免疫检测分析仪（瑞士HAMILTON，FAME24/30），自动酶联免疫检测加样仪（瑞士HAMILTON，MICROLAS STAR 8CH），酶标仪，盖立福Procleix TIGRIS核酸系统以及配套检测试剂。HBsAg试剂（试剂1：北京万泰；试剂2：上海科华）; 抗-HCV试剂（试剂1：珠海丽珠;试剂2：上海科华）; 抗-HIV试剂（试剂1：美国伯乐:试剂2：北京万泰）,筛查试剂均批检合格并在有效期内使用。

1.3 方法与判定标准

用两种ELISA和一种NAT试剂对所有标本并行检测，ELISA结果小于Cut off值为阴性，结果大于等于Cut off值为阳性。两种试剂均呈阴性则判为合格，两种试剂均阳性立即判为不合格，如果单试剂阳性结果（称为可疑），则该项目用双试剂双孔复检，均为阴性者则判为合格，其中任何一种试剂呈阳性都判为不合格。NAT可同时检测HBV、HCV和HIV三种病毒核酸，阳性结果表明其中有1～3种病毒核酸为阳性。

1.4 统计学方法

本研究数据采用SPSS 21.0进行统计学处理，计量资料用（±s）表示、行t检验。计数资料用[n（%）]表示，行χ2检验，符合正态分布的两两比较采用独立样本t检验，非正态分布的数据两两比较采用两个独立样本的非参数检验，P＜0.05表示具有统计学意义。

2 结果

2.1 ELISA双试剂阳性结果数

2017年1月1日—2017年12月31日无偿献血标本共345 164例，经过ELISA双试剂检测后HBV、HCV、HIV可疑标本数为2 956，占样本数0.86%；HBV、HCV、HIV不合格标本（包括双试剂阳性和复检后阳性）数为3 581，占总样本数1.04%。详见表1。

表1 2017年献血者标本ELISA可疑与不合格比例

2.2 ELISA可疑标本的复检后结果

2 956例HBV、HCV、HIV可疑标本复检后结果划分为合格与单试剂呈反应性不合格的标本，HBV复检后合格数为1 068，占HBV总可疑数的67.5%。HCV复检后合格数为343，占HCV总可疑数的49.8%。HIV复检后合格数为347，占HIV总可疑数的50.7%，详图1。ELISA复检后不合格的标本分为试剂1不合格和试剂2不合格，HBV和HIV试剂1和2阳性率有显著差异（P＜0.01），HCV试剂1和2的阳性率没有差异，详见表2。

表2 ELISA可疑标本复检后不合格的分布情况

图1 ELISA可疑标本复检结果

2.3 ELISA单试剂反应性且核酸阳性的结果

HBV试剂2单试剂反应性不合格且核酸阳性标本占了HBV单试剂反应性标本的11.61%，其余试剂均少于1%，详见表3。

表3 ELISA单试剂反应性不合格标本且核酸阳性的结果

3 讨论

近年来，血液的检测模式一直在发展，2010年国内逐渐开展血液核酸检测，此后检测HBV、HCV、HIV都是采用两种酶联吸附试验（ELISA）的试剂和一种核酸（Nucleic Acid Test）的试剂。虽然核酸检测已经于2015年覆盖全国[4]，但是ELISA作为重要的检测方法之一，仍然需要不断提高检测灵敏度和特异性。对2017年本站血液的ELISA实验分析，可疑标本数为2 956，占了总标本量的0.86%，表明ELISA初检需要加强预防假阳性的各种措施，导致假阳性的原因可能会有标本、试剂污染，人为操作等。

目前HBV试剂和HIV试剂盒检测可疑标本的阳性率是有显著差异的，HCV两种试剂并没有差异。在2012年公布的新版《血站技术操作规程》[5]规定，明确血液HIV、HBV、HCV的筛查可以采用一种ELISA试剂和一种Nucleic Acid Test试剂的检测模式。目前对于选择哪种试剂盒也是一个难题。只采用1种ELISA检测试剂进行初筛，可能存在漏检的风险[6]，为了血液的安全，大部分血站还是采用原来的模式进行检测。血清学ELISA单试剂检测呈反应性献血者大部分核酸是阴性的，已经有证实[7]有一部分是潜在合格的献血者，对于目前召回献血者的策略是合理的，防止打击献血者的信心，预防献血者的流失。但是对于召回后的复查仍然是单试剂呈反应性值得继续探讨。

在现有临床研究中发现，血液筛查检验要求越来越高。临床管理中，只有做好血液筛查评估管理方案，这样才能满足患者血液检验筛查需求。通过相关研究分析发现，血液筛查分析过程中，实施ELISA单试剂检验能够评估血液样本检查的质量，对血液自身情况能够做出分析[8]。尤其是在血液筛查过程中，能够从疾病筛查视角做好疾病的筛查和评估处置，对存有疑似的样本进行重点筛查和分析，从而剔除有问题样本。同时在献血者血液筛查过程中，实施上述检验分析，能够了解到献血者供血情况，对血液的筛查和评估有重要指导意义，因而为了能够更为有效的提高血液筛查管理质量，应该重点完善上述检查分析内容，进而保障在患者检查过程中可以改善其临床症状[9-10]。

胡文佳等指出，无偿献血者在供血结束后，需要对其血液样本进行筛查和分析，该过程中，实施ELISA单试剂检验能够了解样本的自身情况，对样本核酸的检验安全性控制有一定指导意义，所以可在临床检验中将ELISA单试剂检验技术推广，以此提高临床检验指导水平[11]。孙婧等表示，献血者在献血结束后，应该及时为患者进行血液筛查分析，这个过程中，可以通过ELISA单试剂检验分析，筛查血液样本中存有的缺陷，提升样本筛查检验质量[12]。同时能够在血液样本筛查分析过程中，做好筛查评价，尤其是对于疑似样本的筛查和处置更是需要及时作出评价。卢青松等指出，ELISA单试剂检能够对血液样本中的疑似样本进行筛查，从HCV阳性筛查分析着手，做好血液样本的检验和评估，提高血液样本筛查指导能力，以此为血液疾病筛查提供帮助，提高无偿献血者血液安全检查能力[13]。冯涛等人通过研究指出，在给予血液筛查分析过程中，以ELISA单试剂检验能够为患者筛查提供帮助，对改进患者临床病症有一定帮助，所以可将该筛查方式完善，以此为患者诊断筛查质量控制奠定基础[14-16]。本研究结果与上述学者研究成果相符，表明ELISA单试剂检对血液疾病筛查和分析具有重要指导意义，所以可满足血液检查诊断需求。

总结上述，ELISA仍是目前重要血液检测手段之一，但需要不断提高灵敏度和特异性，缩短窗口期，预防假阳性。既要小心风险，又要杜绝浪费现象。