γ-干扰素释放试验QFT-GIT检测可疑结核感染患者不确定结果的影响因素分析

王玉 陈晓俊 陈伟 何平 浮苗

我国是肺结核的高发国，是全球十大肺结核高发国之一[1]，如何快速准确对可疑结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,MTB）感染患者进行诊断是亟待解决的问题。QuantiFERON-TB Gold In-Tube（QFT-GIT）是一种诊断MTB感染的γ-干扰素释放试验，不仅可以诊断活动期MTB感染，同样可以诊断非活动期MTB感染且不受卡介苗的影响[2]。QFT-GIT检测结果包括阴性、阳性、不确定。不确定结果（Indeterminate test results,ITRs）的出现影响了潜伏性结核感染的诊断[3]。本研究探讨可疑MTB感染患者QFT-GIT检测ITRs的影响因素，以期为提高QFT-GIT检测诊断MTB感染的准确性提供客观依据。

1 对象和方法

1.1 对象 回顾2019年2月至2020年2月浙江大学医学院附属金华医院进行QFT-GIT检测的2 473例疑似MTB感染患者的检测结果，排除有心脏病、高血压等基础疾病患者，其中男1 460例，女1013例，年龄1～98（50±22）岁。本研究经本院医学伦理委员会批准。

1.2 方法

1.2.1 分组 根据QFT-GIT检测结果，分为ITRs组190例和确定结果组（阴性或者阳性）2 283例。根据陈孝嫚等[4]研究分为7个年龄组：0～5岁组104例，6～15岁组 87例，16～30岁组304例，31～45岁组435例，46～60岁组665例，61～75岁组662例，≥76岁组216例。按性别分为女性组1 013例和男性组1 460例。

1.2.2 方法 （1）标本采集与处理：采集患者外周静脉全血4～6 ml置肝素锂抗凝管，16 h内送至实验室进行检测。颠倒混匀10次后取标本分别置于丝裂原阳性对照（Mitogen）管、结核抗原（TBAg）管和空白对照（Nil）管，每管0.8～1.2 ml，立即上下颠倒振摇10次，确保整个试管内层都被血液覆盖，以溶解管壁上的抗原，直立置于37℃孵育16～24 h，3 000 r/min离心 15 min。（2）结果计算与判定：采用德国QIAGEN凯杰公司生产的QuantiFERON-TB Gold In-Tube试剂盒，实验过程严格按照说明书操作，酶标仪检出数值采用德国QIAGEN公司提供的QFT分析软件（DS2QFT 4pt v6.25版本）进行计算，结果判读标准见表1。（3）记录所有患者入院时WBC、淋巴细胞数（L）、血清总蛋白（TP）、血清白蛋白（Alb）、ALT、AST等指标；血常规检测仪为日本希森美康 Xn2000[WBC 参考范围：（3.5～9.5）×109/L（16岁以上），（5～12）×109/L（16 岁以下），（L 参考范围：（1.2～3.2）×109/L）]，生化检测仪为美国贝克曼，TP检测采用双缩脲法（参考范围：65～85 g/L），Alb检测采用溴甲酚绿法（参考范围：40～55 g/L），ALT和AST检测采用酶法（ALT参考范围：7～40 U/L，AST 参考范围：13～55 U/L）。

表1 QFT-GIT检测结果判读

2 结果

2.1 不同性别组QFT-GIT检测ITRs发生率的比较QFT-GIT检测不同性别组可疑结核感染患者的ITRs发生率差异无统计学意义（χ2=3.35，P＞0.05），见表2。

表2 不同性别组QFT-GIT检测ITRs发生率的比较

2.2 不同年龄组QFT-GIT检测ITRs发生率的比较2 473例可疑结核感染患者的QFT-GIT检测结果中，0～5岁组ITRs发生率最高，0～5岁组与16～30岁组、31～45岁组、46～60岁组、61～75岁组比较差异均有统计学意义（χ2=13.56、20.61、11.17、11.01，均 P＜0.01）。6～15 岁组和31～45岁组比较差异有统计学意义（χ2=4.56，P＜0.05），≥76岁组和16～30岁组、31～45岁组、46～60岁组、61～75岁组比较差异均有统计学意义（χ2=8.58、14.64、6.29、6.15，均 P＜0.05）。见表 3。

表3 不同年龄组QFT-GIT检测ITRs发生率的比较

2.3 QFT-GIT检测ITRs组和确定结果组各项指标的比较 ITRs组和确定结果组年龄差异无统计学意义（P ＞0.05），ITRs组患者 TP、Alb、L 水平均低于确定结果组（均 P＜0.01），ALT、AST、WBC 水平均高于确定结果组（均 P＜0.01），见表 4。

表4 QFT-GIT检测ITRs组和确定结果组各项指标的比较

2.4 QFT-GIT检测ITRs的独立危险因素分析 QFTGIT检测ITRs出现的独立危险因素有低TP、低Alb、L降低和高WBC、高ALT，见表5。

表5 QFT-GIT检测ITRs多因素logistic回归分析

3 讨论

结核病是全球高发传染病，严重威胁人类的健康。《2019全球结核病报告》显示，2018年全球新发结核病患者约为1 000万，而中国和印度结核病患者占全球总数43%[1]。早诊断、早隔离、早治疗是减少结核病发病和死亡的关键，而延误诊断会导致治疗不及时以及MTB的传播[5]。

γ-干扰素释放试验QFT-GIT是使用特殊的血液培养管孵育全血，检测受结核杆菌特异性抗原刺激产生的γ-干扰素含量，来判断是否存在MTB感染的特异性细胞免疫反应，不受卡介苗的影响[6]，且由于结果判读标准综合了阳性对照管和阴性对照管，反应了结核杆菌特异性抗原的免疫反应，能更好的来检测潜伏性MTB感染[7-8]。许多比较诊断MTB感染方法的研究发现QFT-GIT检测更适用于涂片阴性MTB感染、大规模筛查[9-10]，但QFTGIT检测会出现一定比例的ITRs，影响了MTB感染的诊断。

QFT-GIT检测ITRs的发生多是由于阳性对照组未能释放足够的γ-干扰素，少数是因为空白对照过高，这表明机体的T淋巴细胞数量和活性对于ITRs的发生有一定影响，ITRs容易在免疫功能低下人群中出现[11]。本研究QFT-GIT检测ITRs的总发生率为7.68%，低于朱琳等[12]关于发热患者QFT-GIT检测ITRs的发生率（30%），稍高于陈孝嫚等[4]研究结果（6.55%），这可能与本研究对象的机体状况不同有关。

本研究发现QFT-GIT检测ITRs男女总发生率差异无统计学意义，年龄0～5岁组发生率最高，其次是≥76岁组，且与16～30岁组、31～45岁组、46～60岁组、61～75岁组比较差异均有统计学意义，说明年龄是QFT-GIT检测ITRs产生的重要影响因素，尤其是≤5岁和≥76岁人群的影响尤为突出，可能与不同年龄段机体的免疫功能和淋巴细胞活性不同有关，这与其他研究基本一致[13-14]。同时研究发现QFT-GIT检测ITRs的患者TP、Alb和 L低于 QFT-GIT检测确定患者，而ALT、AST和WBC高于QFT-GIT检测确定患者，差异均有统计学意义（均P＜0.05），而经多因素logistic回归分析后发现 TP、Alb、WBC、L和 ALT是 QFT-GIT检测ITRs发生的独立危险因素。

综上所述，采用QFT-GIT检测可疑结核感染时，综合考虑患者的年龄、血清蛋白水平、WBC和L的影响，可提高QFT-GIT检测确定结果检出率。本研究还存在不足之处，如果对进行QFT-GIT检测的患者根据疾病不同进行分类比较，可以更好的了解不同疾病对QFTGIT检测结果的影响；如果对ITRs患者再次进行QFTGIT检测，比较两次检测是否一致并分析原因，可更好的了解患者生理病理因素对于发生ITRs的作用。