草莓炭疽病病原菌的分离及高效防治药剂筛选

姜莉莉，孙瑞红，宫庆涛，武海斌，武冲

（山东省果树研究所，山东 泰安 271000）

草莓（Fragaria×ananassa Duchesne）属蔷薇科草莓属宿根性草本植物［1］。其果实营养丰富、口感上佳，深受消费者喜爱，是我国重要的经济作物。近年来随着设施栽培草莓面积的不断扩大，规模化生产地区草莓轮作、倒茬困难，病害发生日益严重［2］。草莓炭疽病是危害草莓、造成减产的主要病害［3］。炭疽病在草莓整个生育期内均可发生，在繁苗阶段和定植初期发生最为普遍，主要危害草莓根部和匍匐茎，造成根部腐烂和整株萎蔫死亡［4］。

目前对草莓炭疽病的防治手段主要包括农业防治、生物防治和化学防治。农业防治措施主要为选育抗病品种，加强田间管理等［5］。生物防治主要在研究阶段，尚未获得产品登记［6］。作为鲜食水果，市场对草莓的口感品质要求较高，当前国内主栽草莓品种大都高感炭疽病［7］，化学防治仍是控制炭疽病的有效手段［8］。本研究选取了7种常用杀菌剂，评价其对草莓炭疽病菌的室内毒力，并选取高效药剂进行盆栽防效试验，以期为该病害的科学防治提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 供试药剂

98%多菌灵原药，山东潍坊润丰化工股份有限公司；97%吡唑醚菌酯原药，浙江宇龙生物科技股份有限公司；97%苯醚甲环唑原药和98%肟菌酯原药，山东省联合农药工业有限公司；98%嘧菌酯原药，山东潍坊双星农药有限公司；98%咯菌腈原药，河北兴柏农业科技有限公司；97%咪鲜胺原药，山东华阳农药化工集团有限公司。多菌灵以3%的盐酸溶液溶解，其余供试原药均由丙酮溶解，配置成浓度为1×104mg·L－1的母液，于4℃保存备用。

450 g·L－1咪鲜胺水乳剂，浙江天丰生物科学有限公司；20%咯菌腈悬浮剂，青岛凯源祥化工有限公司；250 g·L－1苯醚甲环唑乳油，江苏禾本生化有限公司。

1.2 病原菌分离

草莓炭疽病株采自山东省果树研究所金牛山试验基地草莓大棚。采用病组织分离法［9］进行病原菌分离：将病健交界处（图1）组织在75%乙醇溶液中浸泡30 s，以灭菌水冲洗3次；将处理好的病组织置于PDA培养基中央，25℃黑暗培养5 d；待菌落形成后挑取边缘菌丝于新的PDA平板上进一步纯化培养。以PDA斜面培养基4℃保存，备用。

图1 炭疽病病健交界处

根据柯赫氏法则［10］，在‘章姬’草莓茎基部以手术刀切数条小口，将培养7 d的炭疽病菌菌落连同培养基回接至切口处，进行常规栽培管理，观察接种植株的发病症状与田间症状是否一致。

1.3 室内毒力测定

采用菌丝生长速率法［11］进行杀菌剂室内毒力测定。在超净工作台上，以无菌水将7种供试药剂母液进行梯度稀释；取1 mL各浓度药液于49 mL冷却至50～60℃的PDA培养基中，充分混匀后倒板，每个浓度3次重复。咪鲜胺和咯菌腈浓度为0.05、0.10、0.20、0.40、1.00 mg·L－1，苯醚甲环唑的浓度为0.1、0.2、0.4、1.0、2.0 mg·L－1，多菌灵浓度为1.0、2.5、5.0、10.0、25.0 mg·L－1，吡唑醚菌酯、嘧菌酯和肟菌酯的浓度为2.5、5.0、10.0、25.0、50.0 mg·L－1。

以直径7 mm的打孔器在活化好的草莓炭疽病菌菌落边缘打取菌饼，接种于上述含药PDA平板上，以无菌水处理为对照。25℃黑暗培养，待对照菌落长至培养皿2／3处时，采用十字交叉法［12］测量菌落直径，计算各药剂处理对草莓炭疽病菌菌丝生长的抑制率，采用SPSS 18.0软件计算各药剂的EC50值，并以毒力最低药剂的EC50值为基准值计算其它药剂的相对毒力指数。

抑制率（%）＝（对照组菌落直径－处理组菌落直径）／（对照组菌落直径－菌饼直径）×100。

1.4 盆栽药效试验

根据《中国农药信息网》公布的药剂推荐剂量进行盆栽药效试验。从草莓炭疽病发病严重的地块取土，装入直径15 cm的塑料花盆，移入三叶一心期‘章姬’草莓幼苗。试验共设4个处理，分别为20%咯菌腈悬浮剂2 000倍液20 mL／株、450 g·L－1咪鲜胺水乳剂4 500倍液20 mL／株、250 g·L－1苯醚甲环唑乳油2 500倍液20 mL／株，以及清水对照。每个处理重复3次，每个重复10盆。

移栽后14 d调查草莓炭疽病的发病率和病情级数，并计算防治效果。病情分级标准［13］：0级，无任何症状；1级，点状病斑，长度≤2.0 mm；3级，病斑长度介于2.1～5.0 mm；5级，病斑长度介于5.1～9.0 mm；7级，病斑长度介于9.1～15.0 mm；9级，植株萎蔫。

发病率（%）＝发病株数／总株数×100；

病情指数＝∑（病情级数×该级病害株数）／（最高病情级数×总株数）×100；

防治效果（%）＝（对照组病情指数－处理组病情指数）／对照组病情指数×100。

2 结果与分析

2.1 病原菌分离

如图2所示，从草莓病株分离得到的病原菌在25℃黑暗条件下培养5 d，菌落厚实，有灰白色气生绒毛；培养10 d后，菌落中央出现橘色黏质孢子堆，与张海英等［14］报道的草莓炭疽病菌特征一致。

图2 草莓炭疽病菌菌落形态

病原菌回接至‘章姬’草莓健株7 d后，草莓茎基部变褐色，植株出现萎蔫（图3），与田间初期发病症状一致。

图3 草莓炭疽病菌回接后症状

2.2 不同浓度下7种杀菌剂对草莓炭疽病菌的抑制率

由表1可知，咯菌腈对草莓炭疽病菌的抑制效果最佳，浓度为0.05～1.00 mg·L－1时的抑制率为37.73%～75.17%。咪鲜胺浓度为0.05～1.00 mg·L－1时的抑制率为29.10%～81.52%；苯醚甲环唑浓度为0.1～2.0 mg·L－1时，抑制率为33.63%～68.03%，抑菌活性均较高。多菌灵浓度为1.0～25.0 mg·L－1时，抑制率为29.12%～84.02%。吡唑醚菌酯、嘧菌酯和肟菌酯对草莓炭疽病菌的抑制作用较低，浓度为2.5～50.0 mg·L－1时，吡唑醚菌酯抑制率为36.18%～78.06%，嘧菌酯抑制率为29.85%～71.49%，肟菌酯抑制率为31.08%～69.99%。

表1 不同浓度下7种杀菌剂对草莓炭疽病菌的抑制率

2.3 7种杀菌剂对草莓炭疽病菌的毒力

由表2可知，供试7种杀菌剂中，咯菌腈对草莓炭疽病的室内毒力最高，EC50值为0.117 mg·L－1，相较于嘧菌酯的相对毒力指数高达104.66。咪鲜胺和苯醚甲环唑对草莓炭疽病的室内毒力也较高，EC50值分别为0.141mg·L－1和0.357mg·L－1，相对毒力指数分别为86.84和34.30。嘧菌酯对草莓炭疽病菌的室内毒力最低，EC50值为12.245mg·L－1。多菌灵、吡唑醚菌酯和肟菌酯的室内毒力也较低，EC50值分别为3.475、5.703、10.345 mg·L－1，相对毒力指数分别为3.52、2.15和1.18。

表2 7种杀菌剂对草莓炭疽病菌的室内毒力

2.4 3种杀菌剂对草莓炭疽病的盆栽防效

由表3可以看出，对照组的炭疽病发病率高达46.67%。通过灌根处理，20%咯菌腈悬浮剂2 000倍液对炭疽病的盆栽防效最高，为92.86%；450 g·L－1咪鲜胺水乳剂4 500倍液和250 g·L－1苯醚甲环唑乳油2 500倍液防效也较高，分别为91.68%和89.29%。

表3 3种杀菌剂对草莓炭疽病的盆栽防效

3 讨论与结论

炭疽病菌属复杂，致病力强，包括多个致病种，且同一菌株对不同杀菌剂的敏感性差异较大［15］。本研究通过室内毒力测定发现，分离得到的草莓炭疽病菌对咯菌腈敏感性最高，EC50值仅为0.117 mg·L－1，咪鲜胺和苯醚甲环唑的室内毒力也较高，EC50值分别为0.141 mg·L－1和0.357 mg·L－1。这与刘霞［16］、张俊有［17］等的结果一致。

咯菌腈属苯吡咯类非内吸性杀菌剂，防病谱较广。咪鲜胺属咪唑类脱甲基抑制剂，高效、广谱、渗透性强，通过抑制脱甲基酶的活性，使麦角甾醇合成受阻，导致真菌细胞膜不能正常形成，从而引起细胞死亡［18］。苯醚甲环唑属于三唑类甾醇脱甲基抑制剂，具有较强的内吸性［19］，对多种病害具有较持久的保护和治疗作用［20］。本试验结果发现，通过灌根处理，20%咯菌腈悬浮剂2 000倍液对炭疽病的盆栽防效最高，达92.86%；450 g·L－1咪鲜胺水乳剂4 500倍液和250 g·L－1苯醚甲环唑乳油2 500倍液防效分别达91.68%和89.29%。由此可见，咯菌腈、咪鲜胺和苯醚甲环唑可以考虑用于防治草莓炭疽病，但其田间药效结果尚有待进一步研究。