C19orf12蛋白在神经母细胞瘤中的表达及预后相关性分析

张 大，王真真，刘亚玲，李秀芩

(郑州大学第一附属医院小儿外科，河南 郑州450052)

神经母细胞瘤起源于交感神经，是由神经嵴细胞的交感神经系统发育异常引起的，可以沿交感神经节发生在任何地方，常表现出肿瘤位置间的异质性，其中最常见的位置为肾上腺髓质[1-2]。此外，神经母细胞瘤在临床特征上也具有异质性，能够自行消退和体外诱导分化[3]。在高危组NB患者中，MYCN基因的扩增和ALK基因的突变等已经被确定为其预后不良的危险因素[4]，尽管有手术、化疗、免疫治疗、干细胞移植等强化治疗，高危组神经母细胞瘤患儿总体生存率仍不足一半[5]。C19orf12基因位于第19染色体开放阅读框12，编码一种分子量为17 kDa的蛋白质，定位于内质网和线粒体，以及线粒体相关的膜结构上，参与线粒体的相关功能。近年来有研究发现，C19orf12可能与恶性肿瘤的发生发展相关，在乳腺癌及卵巢癌中，C19orf12基因呈现出显著过表达[6]。之前的研究认为线粒体酶的突变是肿瘤细胞代谢改变的重要驱动因素之一，而C19orf12是定位于线粒体结构上的蛋白[7]，因此也有可能参与了肿瘤代谢调节。有研究表明，C19orf12主要通过抑制线粒体的功能及氧化磷酸化，从而促进肿瘤细胞的糖酵解过程[8]，为其生长和无限增殖提供能量和原材料，并促进肿瘤细胞的侵袭性。但关于C19orf12蛋白与神经母细胞瘤之间的关系尚未有研究。本研究探索C19orf12蛋白在神经母细胞瘤中的表达情况，探讨其临床意义及价值。

1 材料与方法

1.1 研究对象收集2016年1月至2019年12月在郑州大学第一附属医院小儿外科病区就诊、行手术治疗，术后病理提示为神经母细胞瘤的29例患者的临床资料及手术切除肿瘤组织标本。所有病例均经我院病理检查确诊，所有患者肿瘤组织标本均经患者家属同意后加入科室标本组织库。术后随访时间截止至2020年12月。共有失访13例，其中5例患者失联，8例患者死亡，现有16例患者存活。由于本研究的病例样本数目较少，失访病例数目较多，因此在不影响统计学分析的情况下进行缺失值的替换，全部纳入统计学分析。本研究已经获得我院伦理委员会批准。

1.2 C19orf12蛋白检测方法所有组织标本制作成组织芯片后进行切片并行免疫组化染色，染色结果采用3D-histech数字病理切片扫描仪扫描分析，分别计算并分析出测量区域内阳性的累积光密度值以及阳性面积。以阳性累积光密度值/阳性面积计算出平均光密度值，反映阳性信号的平均深浅，即目标蛋白的表达水平。

2 结果

2.1 C19orf12蛋白表达与神经母细胞瘤特征之间的关系C19orf12蛋白表达与神经母细胞瘤分期(Z=2.483，P=0.013)、危险度分层(Z=2.141，P=0.032)、肿瘤直径(Z=2.181，P=0.029)有关，而与MYCN基因是否扩增(Z=1.635，P=0.102)、确诊年龄(Z=0.415，P=0.678)、是否存在骨转移(Z=0.065，P=0.948)、Ki-67指数(Z=0.346，P=0.729)无关。见图1、表1。

图1 C19orf12蛋白在神经母细胞瘤中的表达

表1 C19orf12蛋白表达与神经母细胞瘤临床病理特征之间的关系

2.2 C19orf12蛋白表达与神经母细胞瘤预后的关系Cox比例风险回归模型分析显示，C19orf12蛋白的表达水平与神经母细胞瘤患儿死亡风险有关，C19orf12蛋白高表达的神经母细胞瘤患儿死亡风险高于C19orf12蛋白低表达的患儿。见表2。

表2 神经母细胞瘤患儿死亡危险因素分析

3 讨论

神经母细胞瘤起源于交感神经，是儿童最常见的颅外实体肿瘤[9-10]，临床表现复杂多样，病程转归不可预测，晚期病例的总体结局仍不乐观，有关于神经母细胞瘤的有效治疗仍需要从分子生物学水平更进一步研究，以探索新的治疗靶点。在人类中，C19orf12基因编码两种蛋白质亚型：较长的一种存在于线粒体、内质网以及线粒体和内质网之间的接触区，是一种大小为17kDa的线粒体膜蛋白相关蛋白。很多研究证实，C19orf12基因的突变与神经退行性变及细胞的凋亡有关[11]，尽管C19orf12基因的具体功能尚未明确，但有一些论据支持其参与线粒体代谢[12]，该基因的突变似乎与脂质代谢、线粒体活性缺陷和线粒体自噬相关。线粒体酶的突变是肿瘤细胞代谢改变的重要驱动因素，C19orf12是定位于线粒体结构上的蛋白，因此也有可能参与了肿瘤代谢调节。近年来有研究发现，在卵巢癌、乳腺癌及肺癌细胞中，C19orf12蛋白表达显著增高[6-7, 13]，越来越多的研究表明，C19orf12可能与恶性肿瘤的发生发展相关。

目前已经确定，MYCN基因扩增是神经母细胞瘤的独立危险因素，但在本研究中，C19orf12蛋白的表达与MYCN基因的扩增状态无关，这可能与在所有的神经母细胞瘤中，仅有25%的神经母细胞瘤患儿表现出MYCN基因扩增有关[13-14]，本研究中表现出MYCN基因扩增的只有8例，需要进一步收集病理组织，扩大样本量。多数研究[14]表明，确诊年龄较大的患儿预后更差、死亡率更高。但在本研究中，经过统计学分析发现C19orf12蛋白表达水平与确诊年龄之间无显著的线性影响关系。肿瘤发现时的进展程度与肿瘤的大小有密切关系，神经母细胞瘤常见于腹膜后，在肿瘤较小时，常没有明显症状不易被发现，当肿瘤增长到一定程度出现症状时，肿瘤多有远期转移。在本研究中，我们发现在≥5cm的神经母细胞瘤中，C19orf12蛋白的表达水平较高。神经母细胞瘤根据INSS分期系统分为四期，Ⅰ期肿瘤患儿原发肿瘤完全切除后不需术后放化疗，预后较好，生存率高，而Ⅱ期、Ⅲ期和Ⅳ期肿瘤患儿的预后较差，但在第Ⅳ期中，存在Ⅳs期，研究表明，Ⅳs期神经母细胞瘤自行消退特征更为明显[15]。在本研究中，我们发现C19orf12蛋白的表达在在Ⅱ期、Ⅲ期和Ⅳ期中升高，提示C19orf12蛋白过表达可能是神经母细胞瘤患儿的危险因素。根据COG系统将神经母细胞瘤分为低危组、中危组和高危组，通过统计分析发现，在低危组中，C19orf12蛋白表达水平较低，在中高危组患儿中，C19orf12蛋白表达水平较高。同时我们也观察到，在Ⅳ期和高危组中，C19orf12蛋白表达水平较Ⅲ期和中危组低，但差异均无统计学意义。但由于部分Ⅳ期和高危组患儿在临床治疗过程中经化疗再手术取下肿瘤组织，因此不能排除化疗对患儿C19orf12蛋白表达水平的影响，后续研究中需要加强肿瘤标本的收集与管理进一步研究C19orf12蛋白表达水平与神经母细胞瘤分期和危险度分层间的关系。

影响神经母细胞瘤预后的因素有许多，包括确诊年龄、MYCN基因扩增状态等独立危险因素[16-18]。本研究随访了患儿的生存结局及无瘤生存时间，结合可能影响神经母细胞瘤预后的多种因素以及C19orf12蛋白的表达水平，对神经母细胞瘤患儿死亡风险进行多因素Cox比例风险回归分析，均衡各影响因素，发现C19orf12蛋白表达水平与神经母细胞瘤患儿死亡风险有关，C19orf12蛋白表达升高的神经母细胞瘤患儿的死亡风险显著高于C19orf12蛋白低表达的患儿。

综上所述，我们发现，C19orf12蛋白在分期高、危险度高、肿瘤大的神经母细胞瘤中表达水平较高，C19orf12蛋白表达增高提示神经母细胞瘤患儿预后不良。但是本研究收集的病例较少，且部分病例肿瘤组织受到一定程度的化疗的影响，这是研究的局限所在，在后续的研究中，我们应加强病例的收集和组织标本的管理，增加随访时间，进一步探讨C19orf12蛋白在神经母细胞瘤中的意义及价值。