气相色谱法测定十六醇中有关物质的含量

姚洪娟，彭纪铭，李小飞，刘思光，李铁健，张贵民*

（1. 鲁南制药集团有限公司，山东 临沂 276000；2. 国家手性制药工程技术研究中心，山东 临沂 276000）

药品在临床使用中产生的不良反应除了与主成份的药理活性有关外，与药品中的杂质也有很大关系[1-6]。同一药品用不同工艺生产可能产生不同的杂质谱，且杂质的结构、理化性质和毒性情况复杂，所以为保证临床用药的安全性，需严格控制药品中的杂质[7-8]。

十六醇，分子式为C16H34O，由天然油脂经甲酯化、氢化、精制而得[9]，作为基质用于各类化妆品，也可用于W/O乳化剂膏体，软膏基质等，常用于制造香料、化妆品、洗涤剂、增塑剂等。

十六醇收载于《中华人民共和国药典》（简称中国药典）2020年版四部[9]、欧洲药典（EP）10.0版[10]、美国药典（USP）43-国家处方集（NF）38版[11]、印度药典（IP）2010[12]、国际药典（WHO药典）第5版[13]等，各药典标准均对十六醇含量进行检查；只有中国药典对十六醇的有关物质进行研究，但仅控制未知杂质总量，其他杂质未作要求。因十六醇是西吡氯铵含片的起始物料，引入的杂质包括十四醇、十五醇、十七醇、十八醇。为了有效控制西吡氯铵含片的质量，本文研究对十六醇的有关物质进行控制，结果表明，所建立的方法简便、快捷、结果准确，能有效控制药品质量。

1 仪器和试药

1.1 仪器

MS205DU电子分析天平（瑞士，Mettler Toledo）；安捷伦Agilent 7890B气相色谱仪（美国，安捷伦）；MING-CHE24UV超纯水系统（Mingche）；KQ-500E型数控超声波清洗仪（昆山市超声仪器有限公司）。

1.2 试剂与试药

十六醇：样品1（厂家A，批号：CJ29025），样品2（厂家A，批号FJ270013），样品3（厂家A，批号：EX2RRK3X）；十四醇（批号：CP58M-AC，含量98 %）、十五醇（批号：JGXCH-BO，含量95 %）、十七醇（批号：IFCEL-OB，含量97 %）、十八醇（批号：WFVYK-LH，含量98 %）均购自于TLC；乙醇（Merck，批号：K51399827920，色谱纯）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Agilent DB-5 毛细管柱（30 m×0.32 mm，0.5 μm）；柱温：起始温度为40 ℃，保持2 min，以45 ℃/min速率升温至200 ℃，保持2 min，再以5 ℃/min速率升温至240 ℃，保持2 min，再以20 ℃/min速率升温至300 ℃，保持5 min；进样口温度 270 ℃, 分流比30:1；氢火焰离子化检测器330 ℃；空气流量 400ml/min；氢气流量：30 ml/min；载气（N2）流速 1.5 ml/min；进样量 1 μl。

2.2 溶液的制备

2.2.1 混合对照品储备液及混合对照品溶液 取十四醇、十五醇、十七醇、十八醇对照品各约50 mg，精密称定，置入同一10 ml量瓶，加乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为混合对照品储备液。精密量取混合对照品储备液2 ml置入50 ml量瓶，加乙醇稀释至刻度，摇匀，即成每1 ml中约含200 μg的混合对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液 取样品约200 mg，精密称定，置入5 ml量瓶，加乙醇溶解并稀释制成每1 ml中约含40 mg的溶液，作为供试品溶液。

2.2.3 测试溶液 取样品约200 mg，精密称定，置入5 ml量瓶，加对照品溶液溶解并稀释至刻度，作为测试溶液。

2.2.4 空白溶液 取乙醇作为空白溶液。

2.3 系统适用性试验

取“2.2”项下的空白溶液、对照品溶液和供试品溶液（样品批号CJ29025）各1 μl，在“2.1”项色谱条件下分别进样，记录色谱图。结果显示，空白溶剂不影响测定，各溶液色谱图中相邻的峰间分离度良好，均大于2.0（见图1）；十四醇、十五醇、十七醇、十八醇的理论塔板数均大于5000。

图1 GC色谱图

2.4 线性关系考察

称取样品约1600 mg，精密称定，置入20 ml量瓶，精密加入混合对照品储备液1600 μl，加乙醇稀释至刻度，摇匀，作为200 %线性储备液；依次稀释200 %线性储备液至限度浓度的40 %，60 %，80 %，100 %和150 %，作为线性溶液1 ～5号， 200 %线性储备液作为线性溶液6。结果见表1。

2.5 检测限与定量限

将“2.4”项下的线性溶液5用乙醇逐级稀释，进样测定。当信噪比约为3 时，测得检测下限；当信噪比约为10 时，测得定量下限。结果见表1。

表1 线性试验结果

2.6 精密度试验

2.6.1 重复性 精密量取测试溶液1 μl，按“2.2”项下测试溶液方法配制测试溶液，平行6份，按“2.1”项下色谱条件进行测定，记录色谱图及峰面积值。结果测得十四醇、十五醇、十七醇、十八醇含量的RSD值为0.78 %，0.85 %，0.50 %，0.70 %，结果表明，仪器进样精密度良好。

2.6.2 中间精密度 由另一名分析人员，于不同日期使用不同的仪器，同“重复性”试验操作。综合重复性试验的结果，评估2人所得结果。结果测得十四醇、十五醇、十七醇、十八醇含量的RSD值为1.7 %，2.4 %，1.6 %，2.3 %，结果表明，仪器进样精密度良好。

2.7 稳定性试验

精密量取测试溶液1 μl，分别于0，2，4，6，8，10 h，按“2.1”项下的色谱条件进样测定，记录色谱图及峰面积值。结果测得十四醇、十五醇、样品、十七醇、十八醇峰面积的RSD值为1.4 %，1.2 %，1.4 %，1.6 %，1.5 %，结果表明，其溶液在10 h内基本保持稳定。

2.8 加样回收试验

分别精密称取已知含量的样品（批号：CJ29025）约0.2 g，共9 份，依次加入“2.2.1”项下的混合对照品储备液0.40，0.80，1.2 ml，各3份，再分别加乙醇稀释至20 ml，即得低、中、高3 个质量浓度的供试溶液，按“2.1”项下色谱条件进样测定并计算回收率。结果见表2，表明各成分的低、中、高3 个浓度回收率均在84.3 % ～100.9 %之间，RSD 在3.6 % ～4.3 %之间，表明本方法准确度良好。

表2 回收率试验结果

2.9 十六醇中有关物质的测定

取3批样品，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样测定，结果见表3。

表3 3批样品中有关物质测定结果/%

3 讨论

3.1 色谱柱的选择

由于十六醇中杂质较多，且十四醇、十五醇、十六醇、十七醇和十八醇的沸点较高，在本试验中选择不同的毛细管柱进行测定，在选择ZB-FFAP柱时，空白对供试品无干扰，但主物质峰形较差。在选择安捷伦-DB-1柱时，各成分分离度均达到要求，但响应低、峰形差。而使用安捷伦-DB-5柱时，十六醇中各组分分离度较好、灵敏度高、峰形对称，且分析时间控制较短。

3.2 色谱条件的选择

因十六醇和其杂质十四醇、十五醇、十七醇、十八醇含碳量较高，沸点范围为210 ～ 344 ℃，因此需设置较高的进样口温度，在进样口温度低于250 ℃时，长时间进样会出现鬼峰，进样口温度升至270 ℃及以上，鬼峰消失，同时柱温和检测器皆需要配置较高温度，以防出现残留和鬼峰。

3.3 结论

通过对比外标法和面积归一化法测定十六醇的含量结果，无明显差距，最终按面积归一化法计算，十六醇含量不得少于98.0 %，十八醇不得过0.5 %，其他单个单杂不得过0.3 %，杂质总和不得过2.0 %。

十六烷醇为饱和脂肪烷烃，紫外吸收弱，不易用液相色谱检测，同时由于其沸点较高，受热不易挥发，所以本文采用气相色谱法对十六醇的有关物质进行检测，为无紫外吸收的高沸点化合物提供了新的检测思路。本法能有效地对十六烷醇进行质量控制，同时操作方法简便、分析时间较短。