宽叶金粟兰的化学成分研究

卞玉婷，陈芳有，黄伟明，张睿增，刘定平，双鹏程，罗永明

江西中医药大学药学院，南昌 330004

宽叶金粟兰ChloranthushenryiHemsl.为金粟兰科Chloranthaceae金粟兰属ChloranthusSwartz植物，又名四块瓦、四大天王、大叶及己，常以全草入药，味辛，性温，有毒，具有祛风除湿，活血散瘀，解毒的功效，广泛用于治疗风湿痹痛，跌打骨折，疮肿及毒蛇咬伤等病症[1,2]。药理研究表明，宽叶金粟兰具有抗炎、抗菌、抗肿瘤、收缩子宫等活性[3]。宽叶金粟兰作为江西民间常用中草药之一，以其为主药的制剂钻山风糖浆被《中国药典》收载，临床用于风湿性关节炎的治疗[4]。但其抗炎的有效成分并不明确，影响宽叶金粟兰的临床应用和产品的深度开发。因此，为深入研究宽叶金粟兰的植物化学资源，寻找具有抗炎活性的化学成分，本研究对宽叶金粟兰95%乙醇提取物的二氯甲烷部位的化学成分及其体外抗炎活性进行了研究，以探究宽叶金粟兰的抗炎活性物质基础。

1 材料与方法

1.1 仪器与材料

Bruker AVANCE III HD 600MHz型核磁共振波谱仪(Bruker，瑞士)；AB SCIEX Triple ESI 5600+ 型高分辨飞行时间质谱联用仪(AB SCIEX，美国)；Waters 2695-2998 型高效液相(waters，美国)；Waters 515 制备型液相(waters，美国)；YMC-Pack ODS-A 半制备色谱柱(250 mm×10 mm，5 μm，YMC，日本)；Buchi中压制备液相色谱仪(Buchi，瑞士)；YMC ODS反相色谱填料(50 μm，YMC，日本)；葡聚糖凝胶Sephadex LH-20 (Amersham PharmaciaBiotech，美国)；PRP 512 A树脂(75～100 μm，北京聚福树脂厂)；AB-104 N型分析天平(METTLER TOLEDO，瑞士)；薄层硅胶板GF254(青岛海洋化工厂)；色谱甲醇(星可，上海)；纯净水(哇哈哈，杭州)；其他试剂均为分析纯(西陇科学股份有限公司)；Synergy 4 MLFPTAD型酶标仪(BioTek，美国)；AllegraX-15R型离心机(Beckman，美国)；Research®plus型移液枪(Eppendorf，德国)；一氧化氮(NO)检测试剂盒(碧云天公司)。

实验药材于2018年11月采自江西井冈山，经江西中医药大学药学院邓可众副教授鉴定为金粟兰科金粟兰属宽叶金粟兰(ChloranthushenryiHemsl)的全草。凭证标本(20181126)保存于江西中医药大学药学院中药化学科研室。

1.2 提取与分离

干燥的宽叶金粟兰全草23 kg，粉碎后采用95%乙醇提取3次，合并提取液后减压浓缩至无醇味，得总浸膏1 100 g。总浸膏经硅藻土柱色谱依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇洗脱，各洗脱液分别减压浓缩后得石油醚部位156.3 g、二氯甲烷部位394.2 g、乙酸乙酯部位94.6 g、甲醇部位454.9 g。

二氯甲烷部位经PRP 512A树脂分离(洗脱梯度为，30%、50%、70%、95%乙醇-水溶液)得到组分Fr.A～Fr.D。Fr.B组分(100 g)经硅胶柱色谱分离，以石油醚：乙酸乙酯(30∶1→0∶1)为洗脱剂分得到5个组分Fr.B1-Fr.B5，其中Fr.B2(15.3 g)经硅胶柱色谱(二氯甲烷：甲醇，50∶1→0∶1)、凝胶色谱、制备液相色谱(甲醇-水)分离纯化得化合物5(11.4 mg)、16(3.6 mg)、17(4.9 mg)，B3(7.2 g)经硅胶柱色谱(二氯甲烷：甲醇，70∶1→0∶1)、凝胶色谱和制备液相色谱(甲醇-水)分离纯化得化合物3(13.4 mg)、12(7.6 mg)、Fr.B4(6.9 g) 经硅胶柱色谱(二氯甲烷：甲醇，50∶1→0∶1)、ODS柱色谱和制备液相色谱 (甲醇-水)分离纯化得化合物18(5.4 mg)、19(3.9 mg)。C组分(104 g)经硅胶柱色谱分离，以石油醚：乙酸乙酯(30∶1→0∶1)为洗脱剂梯度洗脱分得6个组分Fr.C1-Fr.C6)，Fr.C2(3.6 g)组分经中压制备液相(甲醇-水)、制备液相色谱(甲醇-水)分得化合物1(14.3 mg)、4(10.6 mg)、7(12.4 mg)、14(5.4 mg)、15(3.4 mg)；C3(5.7 g)经制备液相色谱(甲醇-水)分得化合物6(18.4 mg)、8(11.6 mg)、9(9.7 mg)、10(6.4 mg)。C4(11.5 g) 组分经ODS柱色谱、凝胶柱色谱分离，制备液相色谱(甲醇-水)分得化合物2(20.7 mg)、11(15.7 mg)、13(9.4 mg)。

1.3 抗炎活性筛选方法

本实验采用脂多糖(LPS)诱导的小鼠巨噬细胞RAW 264.7释放一氧化氮(NO)免疫炎症细胞模型，Griess法测定NO的含量[5]，对宽叶金粟兰中分离的量较大的化合物1～9、12和13进行体外抗炎活性初步筛选。具体如下：RAW 264.7细胞用含10% FBS的DMEM培养液于37 ℃，5% CO2培养箱中进行常规培养。在实验时取对数生长期的RAW 264.7细胞经胰蛋白酶消化后重悬得到1×106个/mL的细胞悬液，铺板于48孔板中，每孔200 μL，在培养箱培养12 h，细胞完全贴壁。再用将配好的10 μmol/L单体化合物的溶液预处理1 h，再加入1 μg/mL LPS(终浓度)进行刺激，同时设置空白对照组(培养液)、非样品组(LPS + 培养液)、阳性对照组(氨基胍+LPS+培养液)，继续培养持续刺激18 h。取100 μL细胞培养液，加入等量Griess试剂，经摇床避光充分混匀15 min后，使用酶标仪在570 nm处测OD值，计算化合物NO的抑制率[6]。

图1 化合物1～19的结构Fig.1 The chemical structures of compounds 1-19

2 实验结果

2.1 结构鉴定

化合物1白色针晶(CHCl3)；mp.200～203 ℃；HR-ESI-MS：m/z271.130 1 [M+Na]+，分子式为C15H20O3。1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：1.59(1H，m，H-1α)，1.24(1H，m，H-1β)，1.65(2H，m，H-2)，2.36(1H，m，H-3α)，1.96(1H，m，H-3β)，1.85(1H，m，H-5)，2.64(1H，m，H-6α)，2.43(1H，m，H-6β)，2.25(1H，d，J= 13.8 Hz，H-9α)，1.58(1H，d，J= 13.8 Hz，H-9β)，1.83(3H，s，H-13)，4.87(1H，t，J= 1.5 Hz，H-14α)，4.60(1H，t，J= 1.5 Hz，H-14β)，1.03(3H，s，H-15)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：41.5(C-1)，22.5(C-2)，36.2(C-3)，148.6(C-4)，51.8(C-5)，24.7(C-6)，160.7(C-7)，103.4(C-8)，51.5(C-9)，36.9(C-10)，122.5(C-11)，171.0(C-12)，8.4(C-13)，107.0(C-14)，16.8(C-15)。以上数据与文献[7]对照基本一致，故鉴定该化合物为atractylenolid III。

化合物2无色透明方晶(CHCl3)；mp.193～195 ℃；HR-ESI-MS：m/z285.146 2 [M+Na]+，分子式为C15H18O4。1H NMR(600 MHz，CD3OD)δ：4.94(1H，m，H-1)，2.38(1H，m，H-3)，2.06(1H，m，H-2)，6.30(1H，s，H-5)，2.77(1H，d，J= 12.9 Hz，H-9α)，2.42(1H，d，J= 12.9 Hz，H-9β)，1.95(3H，s，H-13)，1.88(3H，m，H-14)，1.63(3H，s，H-15)；13C NMR(150 MHz，CD3OD)δ：129.5(C-1)，26.9(C-2)，30.8(C-3)，150.2(C-4)，130.2(C-5)，192.9(C-6)，156.6(C-7)，110.9(C-8)，49.7(C-9)，136.9(C-10)，136.9(C-11)，172.4(C-12)，10.2(C-13)，25.1(C-14)，18.2(C-15)。以上数据与文献[8]对照基本一致，故鉴定该化合物为(1E,4Z)-8-hydroxy-6-oxogermacra-1 (10),4,7(11)-trieno-12,8-lactone。

化合物3白色粉末；HR-ESI-MS：m/z281.134 9 [M+H]+，分子式为C15H20O5。1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：2.93(1H，dd，J= 10.8，2.1 Hz，H-1)，2.22(1H，m，H-2α)，1.56(1H，m，H-2β)，2.41(1H，m，H-3α)，1.52(1H，m，H-3β)，3.78(1H，s，H-5)，2.82(1H，d，J= 16.8 Hz，H-9α)，3.69(1H，d，J= 16.8 Hz，H-9β)，7.10(1H，s，H-12)，2.18(3H，s，H-13)，1.15(3H，s，H-14)，1.33(3H，s，H-15)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：69.2(C-1)，23.9(C-2)，36.2(C-3)，63.8(C-4)，63.4(C-5)，190.0(C-6)，122.7(C-7)，156.3(C-8)，39.7(C-9)，58.1(C-10)，123.6(C-11)，138.6(C-12)，10.7(C-13)，15.5(C-14)，17.0(C-15)。以上数据与文献[9]对照基本一致，故鉴定该化合物为curcuzederone。

化合物4黄色粉末；HR-ESI-MS：m/z265.145 9 [M+H]+，分子式为C15H20O4。1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：3.67(1H，m，H-1)，1.78(2H，m，H-2)，1.60(2H，m，H-3)，2.55(1H，s，H-5)，3.08(1H，d，J= 16.9 Hz，H-9α)，2.71(1H，d，J= 16.9 Hz，H-9β)，7.07(1H，m，H-12)，2.18(3H，s，H-13)，1.47(3H，s，H-14)，1.01(3H，s，H-15)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：78.2(C-1)，28.4(C-2)，38.2(C-3)，71.3(C-4)，62.0(C-5)，197.3(C-6)，119.4(C-7)，166.4(C-8)，40.0(C-9)，44.7(C-10)，119.1(C-11)，139.7(C-12)，9.1(C-13)，14.7(C-14)，24.6(C-15)。以上数据与文献[10]对照基本一致，故鉴定该化合物为curcolonol。

化合物5黄色油状物；HR-ESI-MS：m/z311.167 3 [M+Na]+，分子式为C17H20O4。1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：1.32(2H，td，J= 7.8，3.6 Hz，H-1)，0.95(1H，m，H-2α)，0.85(1H，m，H-2β)，2.08(1H，m，H-3)，2.64(1H，dd，J= 14.1，3.3 Hz，H-5)，2.76(1H，m，H-6α)，2.12(1H，m，H-6β)，5.07(1H，m，H-8)，2.88(1H，dd，J=12.0，6.6 Hz，H-9α)，1.43(1H，dd，J= 12.0，6.6 Hz，H-9β)，1.84(3H，s，H-13)，4.08(1H，d，J= 12.0 Hz，H-14α)，3.58(1H，d，J= 12.0 Hz，H-14β)，5.04(1H，s，H-15α)，4.79(1H，s，H-15β)，2.15(2H，s，H-2′)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：23.8(C-1)，16.7(C-2)，24.0(C-3)，149.0(C-4)，62.9(C-5)，24.1(C-6)，160.4(C-7)，78.9 (C-8)，39.5(C-9)，42.4(C-10)，122.4(C-11)，174.4(C-12)，8.7(C-13)，61.7 (C-14)，107.0(C-15)，171.5(C-1′)，21.1(C-2′)。以上数据与文献[11]对照基本一致，故鉴定该化合物为(1R,3S,5S,8S,10R)-14-acetylshizukanolide。

化合物6白色粉末；HR-ESI-MS：m/z307.214 9 [M+H]+，分子式为C19H30O3。1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：1.03(1H，m，H-1α)，1.71(1H，m，H-1β)，1.53(2H，m，H-2)，1.25(2H，m，H-3)，1.33(1H，m，H-5)，1.42(1H，m，H-6α)，1.36(1H，m，H-6β)，2.28(1H，m，H-7α)，2.09(1H，m，H-7β)，1.80(1H，m，H-9)，1.66(2H，m，H-11)，1.79(1H，m，H-12α)，1.67(H，m，H-12β)，5.55(1H，s，H-14)，1.28(3H，s，H-17)，3.41(1H，d，J= 10.8 Hz，H-18α)，3.12(1H，d，J= 10.8 Hz，H-18β)，0.80(3H，s，H-19)，0.82(3H，s，H-20)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：38.9(C-1)，18.5(C-2)，35.5(C-3)，37.9(C-4)，47.7(C-5)，22.4(C-6)，35.7(C-7)，139.3 (C-8)，50.3(C-9)，38.3(C-10)，18.4(C-11)，31.5(C-12)，42.7(C-13)，124.2 (C-14)，181.3(C-15)，24.8(C-17)，72.3(C-18)，18.1(C-19)，15.7(C-20)。以上数据与文献[12]对照基本一致，故鉴定该化合物为ent-8(9)-pimarene-20-hydroxy-16-nor-15-oic acid。

化合物7无色油状物；HR-ESI-MS：m/z333.205 9 [M+H]+，分子式为C20H28O4。1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：1.19(1H，m，H-1α)，1.63(1H，m，H-1β)，1.51(1H，dd，J= 14.1，3.6 Hz，H-2α)，1.82(1H，dd，J= 14.1，3.6 Hz，H-2β)，1.06(1H，m，H-3α)，2.14(1H，m，H-3β)，1.42(1H，m，H-5)，2.09(1H，m，H-6α)，1.92(1H，m，H-6β)，2.44(1H，dd，J= 12.0，4.2 Hz，H-7α)，2.00(1H，dd，J= 12.0，4.2 Hz，H-7β)，2.21 (1H，d，J= 11.7 Hz，H-9)，1.44(1H，m，H-11α)，1.93(1H，m，H-11β)，4.86(1H，d，J= 10.8 Hz，H-12)，5.77(1H，m，H-14)，2.09(3H，s，H-16)，4.93(1H，s，H-17α)，4.43(1H，s，H-17β)，1.25(3H，s，H-18)，0.60(3H，s，H-20)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：38.8(C-1)，19.8(C-2)，37.9(C-3)，44.3(C-4)，56.0(C-5)，26.0(C-6)，38.6(C-7)，148.1(C-8)，183.8(C-9)，40.3(C-10)，28.1(C-11)，83.6(C-12)，169.5(C-13)，73.4(C-15)，14.1(C-16)，106.4(C-17)，29.1(C-18)，51.8(C-19)，13.0(C-20)。以上数据与文献[13]对照基本一致，故鉴定该化合物为labda-8(17),13-dien-15,12R-olid-19-oic acid。

化合物8无色油状物；HR-ESI-MS：m/z277.215 9 [M+H]+，分子式为C18H28O2。1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：1.42(1H，d，J= 4.2 Hz，H-1α)，1.08(1H，d，J= 4.2 Hz，H-1β)，1.45 (2H，m，H-2)，1.01(1H，m，H-3α)，0.85(1H，m，H-3β)，1.28(1H，d，J= 2.7 Hz，H-5)，1.84(1H，m，H-6α)，1.41(1H，m，H-6β)，2.46(1H，m，H-7α)，2.05(1H，m，H-7β)，2.48(1H，d，J= 8.7 Hz，H-9)，6.84(1H，dd，J= 16.0，10.2 Hz，H-11)，6.08(1H，d，J= 17.1 Hz，H-12)，2.26(3H，m，H-14)，4.78(1H，s，H-17α)，4.41(1H，s，H-17β)，0.99(3H，m，H-18)，3.77(1H，d，J= 10.8 Hz，H-19α)，3.44 (1H，d，J= 10.8 Hz，H-19β)，0.87(3H，s，H-20)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：40.9(C-1)，18.8(C-2)，35.6(C-3)，39.0(C-4)，55.4(C-5)，23.4(C-6)，37.0(C-7)，148.2(C-8)，60.9(C-9)，39.3(C-10)，146.4(C-11)，133.8(C-12)，198.3 (C-13)，27.4(C-14)，109.0(C-17)，27.1(C-18)，65.2(C-19)，16.1(C-20)。以上数据与文献[14]对照基本一致，故鉴定该化合物为(11E)-(4S,5R,9S,10S)-15,16-bisnor-13-oxo-8(17),11-labdadien-19-ol。

化合物9无色油状物；HR-ESI-MS：m/z291.195 3 [M+H]+，分子式为C18H26O3。1H NMR (600 MHz，CDCl3)δ：1.45(1H，d，J= 4.2 Hz，H-1α)，1.10(1H，d，J= 4.2 Hz，H-1β)，1.83(2H，m，H-2)，2.45(1H，m，H-3α)，2.04(1H，m，H-3β)，1.34(1H，dd，J= 12.3，3.0 Hz，H-5)，1.97(1H，m，H-6)，2.17(1H，m，H-7α)，1.07(1H，m，H-7β)，2.48(1H，d，J= 2.7 Hz，H-9)，6.85(1H，dd，J=15.9，10.2 Hz，H-11)，6.08(1H，d，J= 15.9 Hz，H-12)，2.27(3H，s，H-16)，4.81(1H，d，J= 1.8 Hz，H-17α)，4.42(1H，d，J= 1.8 Hz，H-17β)，1.26(3H，s，H-18)，0.80(3H，s，H-20)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：41.0(C-1)，19.7(C-2)，37.2(C-3)，44.2(C-4)，55.5(C-5)，24.9(C-6)，38.0(C-7)，148.1(C-8)，60.1(C-9)，40.1(C-10)，146.2(C-11)，133.9(C-12)，198.3(C-13)，27.4(C-16)，108.9(C-17)，29.0(C-18)，183.7(C-19)，13.8(C-20)。以上数据与文献[15]对照基本一致，故鉴定该化合物为14(15)-bisnor-13-oxolabd-8(17),11(E)-dien-19-oic acid。

化合物10黄色油状物；HR-ESI-MS：m/z28 5.109 4 [M+Na]+，分子式为C15H18O4。1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：1.87(1H，m，H-1)，1.63(1H，m，H-2α)，1.75(1H，m，H-2β)，1.70(1H，m，H-3α)，1.61(1H，m，H-3β)，2.19(1H，s，H-5)，5.47(1H，m，H-6)，1.93(1H，dd，J= 16.2，10.4 Hz，H-8α)，2.17(1H，m，H-8β)，1.82(1H，m，H-9α)，1.46(1H，m，H-9β)，2.23(1H，m，H-11)，0.98(3H，t，J= 6.2 Hz，H-12)，0.97(3H，t，J= 6.2 Hz，H-13)，1.27(3H，s，H-14)，1.21(3H，s，H-15)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：50.8(C-1)，21.6(C-2)，40.6(C-3)，80.4(C-4)，50.4(C-5)，121.4(C-6)，149.8(C-7)，25.2(C-8)，42.7(C-9)，75.5(C-10)，37.4(C-11)，21.6(C-12)，21.5(C-13)，21.3(C-14)，22.7(C-15)。以上数据与文献[16]对照基本一致，故鉴定该化合物为guaianediol。

化合物11白色粉末；HR-ESI-MS：m/z268.134 3 [M+H]+，分子式为C17H17NO2。1H NMR (600 MHz，CDCl3)δ：7.49(2H，m，H-2，6)，6.80(2H，m，H-3，5)，2.82(2H，t，J= 6.9 Hz，H-7)，3.62(2H，d，J= 6.6 Hz，H-8)，7.09(2H，d，J= 8.4 Hz，H-2′，6′)，7.35(3H，m，H-3′，4′，5′)，7.62(1H，d，J= 15.6 Hz，H-7′)，6.31(1H，d，J= 15.6 Hz，H-8′)，5.58(1H，br s，N-H)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：130.1(C-1)，131.0(C-2，6)，115.7(C-3，5)，154.4(C-4)，34.9(C-7)，41.1(C-8)，134.9(C-1′)，127.9(C-2′，6′)，129.0(C-3′，5′)，129.8(C-4′)，141.3(C-7′)，120.6(C-8′)，166.0(C-9′)。以上数据与文献[17]对照基本一致，故鉴定该化合物为N-trans-cinnamoyltyramine。

化合物12白色粉末；HR-ESI-MS：m/z507.229 5 [M+H]+，分子式为C32H30N2O4。1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：4.03(1H，dd，J= 11.4，4.2 Hz，H-1α)，4.54(1H，dd，J= 11.4，3.4 Hz，H-1β)，4.62(1H，dd，J= 12.0，3.8 Hz，H-2)，2.89(1H，dd，J= 13.8，8.4 Hz，H-3α)，3.00(1H，dd，J= 13.8，6.6 Hz，H-3β)，7.66(2H，m，H-12，16)，7.50(1H，dd，J= 7.5，1.2 Hz，H-14)，7.39(2H，td，J= 7.5，1.2 Hz，H-13，15)，7.29～7.20(10H，m)，4.92(1H，q，J= 6.6 Hz，H-2′)，3.21(1H，dd，J= 13.8，6.9 Hz，H-3′α)，3.29(1H，dd，J= 13.8，6.9 Hz，H-3′β)，7.70(2H，m，H-12′，16′)，7.43(1H，dd，J= 7.5，1.2 Hz，H-14′)，7.31(2H，td，J= 7.5，1.2 Hz，H-13′，15′)，6.57(1H，d，J= 6.6 Hz，N-Hα)，6.67(1H，d，J= 8.4 Hz，N-Hβ)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：65.5(C-1)，50.4(C-2)，37.7(C-3)，137.3(C-4)，126.9(C-7)，129.4(C-5，9)，128.8(C-6，8)，167.6(C-10;C=O)，134.3(C-11)，127.2(C-12，16)，129.0(C-13，15)，132.2 (C-14)，172.0(C-1′;C=O)，54.6(C-2′)，37.4(C-3′)，135.9(C-4′)，127.5(C-7′)，129.3(C-5′，9′)，128.8(C-6′，8′)，167.3(C-10′;C=O)，133.4(C-11′)，127.3(C-12′，16′)，128.6(C-13′，15′)，131.5(C-14′)。以上数据与文献[18]对照基本一致，故鉴定该化合物为N-benzoyl-L-phenylalaninyl-N-benzoyl-L-phenylalaninate。

化合物13白色粉末；HR-ESI-MS：m/z507.228 7 [M+H]+，分子式为C32H30N2O4。1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：7.20～7.50(5H，m，H-2，3，4，5，6)，3.00(1H，dd，J= 13.8，6.6 Hz，H-7α)，2.89(1H，dd，J= 13.8，8.4 Hz，H-7β)，4.61(1H，m，H-8)，4.54(1H，dd，J= 11.4，3.3 Hz，H-9α)，4.03(1H，dd，J= 11.4，4.2 Hz，H-9β)，7.20～7.50(5H，m，H-2′，3′，4′，5′，6′)，3.29(1H，dd，J= 13.8，6.6 Hz，H-7′α)，3.21(1H，dd，J= 13.8，6.6 Hz，H-7′β)，4.91(1H，q，J= 6.6 Hz，H-8′)，7.63～7.71(4H，m，H-2′′，6′′，2′′′，6′′′)，7.20～7.50(4H，m，H-3′′，5′′，3′′′，5′′′)，7.20～7.50(2H，m，H-4′′，4′′′)，6.66 (1H，d，J= 8.4 Hz，NH-8)，6.55(1H，d，J= 6.6 Hz，NH-8′)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：129.4(C-2，6)，128.8(C-3，5)，127.0(C-4)，37.4(C-7)，50.4(C-8)，65.5(C-9)，129.3(C-2′，6′)，128.8(C-3′，5′)，127.3(C-4′)，37.7(C-7′)，54.6(C-8′)，127.2(C-2′′，6′′)，128.6(C-3′′，5′′)，131.5(C-4′′)，129.0(C-2′′′，6′′′)，128.2(C-3′′′，5′′′)，132.2(C-4′′′)。以上数据与文献[19]对照基本一致，故鉴定该化合物为N(N′-benzoyl-S-phenylalaninyl)-S-phenylalaninol benzoate。

化合物14白色粉末；HR-ESI-MS：m/z252.138 7 [M+H]+，分子式为C17H17NO。1H NMR (600 MHz，CDCl3)δ：7.36(5H，m，H-2，3，4，5，6)，2.92(1H，t，J= 6.9 Hz，H-7)，3.69(2H，q，J= 6.6 Hz，H-8)，7.51(2H，d，J= 6.9 Hz，H-2′，6′)，7.27(3H，m，H-3′，4′，5′)，7.64(1H，d，J= 15.6 Hz，H-7′)，6.34(1H，d，J= 15.6 Hz，H-8′)，5.66 (1H，brs，N-H)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：166.0(C-1)，120.7(C-2)，139.0 (C-3)，134.9(C-4)，128.8(C-5)，128.9(C-6，8)，129.8(C-7)，35.8(C-1′)，40.9(C-2′)，141.2(C-3′)，127.9(C-4′，8′)，128.8(C-5′，7′)，126.7(C-6′)。以上数据与文献[20]对照基本一致，故鉴定该化合物为N-2-phenylethylcinnamamide。

化合物15白色粉末；HR-ESI-MS：m/z284.128 2 [M+H]+，分子式为C17H17NO3。1H NMR (600 MHz，CD3OD)δ：7.02(2H，dd，J= 8.2 Hz，H-2，6)，6.71(2H，d，J= 8.4 Hz，H-3，5)，2.74(2H，t，J= 7.5 Hz，H-7)，3.44(2H，t，J= 7.5 Hz，H-8)，7.37(2H，dd，J= 8.4 Hz，H-2′，6′)，6.77(2H，d，J= 8.4 Hz，H-3′，5′)，7.43(1H，d，J= 15.6 Hz，H-7′)，6.37(1H，d，J= 15.6 Hz，H-8′)；13C NMR(150 MHz，CD3OD)δ：132.3(C-1)，130.7(C-2)，115.9(C-3)，156.9(C-4)，115.9(C-5)，131.3(C-6)，35.8(C-7)，42.6(C-8)，127.7(C-1′)，130.7(C-2′)，116.2(C-3′)，160.5(C-4′)，116.7(C-5′)，130.5(C-6′)，141.8(C-7′)，118.4(C-8′)，169.2(C-9′)。以上数据与文献[21]对照基本一致，故鉴定该化合物为N-trans-cumaroiltiramina。

化合物16无色针晶(MeOH)；mp.124-126 ℃；HR-ESI-MS：m/z337.126 4 [M+Na]+，分子式为C18H18O5。1H NMR(600 MHz，CD3OD)δ：5.38(1H，dd，J= 12.9，3.0 Hz，H-2)，3.03(1H，dd，J= 16.7，12.9 Hz，H-3α)，2.69(1H，dd，J= 16.7，3.0 Hz，H-3β)，6.19 (2H，s，H-6，8)，7.40 (2H，m，H-2′，6′)，6.95(2H，m，H-3′，5′)，3.80(3H，s，7-OMe)，3.83(3H，s，4′-OMe)，3.84(3H，s，5′-OMe)；13C NMR(150 MHz，CD3OD)δ：80.2(C-2)，46.3(C-3)，192.2(C-4)，163.8(C-5)，93.8(C-6)，168.3(C-7)，95.0(C-8)，166.8(C-9)，106.6(C-10)，132.4(C-1′)，128.9(C-2′，6′)，115.0(C-3′，5′)，161.4(C-4′)，55.7(7-OMe)，56.3(4′，5′-OMe)。以上数据与文献[22]对照基本一致，故鉴定该化合物为5,7,4′-trimethoxyflavanone。

化合物17白色粉末；HR-ESI-MS：m/z163.136 9 [M+H]+，分子式为C10H10O2。1H NMR (600 MHz，DMSO-d6)δ：7.48(2H，d，J= 7.1 Hz，H-2，6)，7.42(1H，d，J= 15.9 Hz，H-3)，6.48(1H，d，J= 15.9 Hz，H-5)，7.23(1H，m，H-8)，3.17(1H，s，H-9)，3.36(3H，s，-OCH3)；13C NMR(150 MHz，DMSO-d6)δ：135.8(C-1)，127.3(C-2，6)，128.7(C-5，3)，138.9(C-7)，126.8(C-8)，172.8(C-9)，48.6(-OCH3)。以上数据与文献[23]对照基本一致，故鉴定该化合物为2-propenoic acid-3-phenyl-methyl ester。

化合物18无色棱晶(MeOH)；mp.131～161 ℃；HR-ESI-MS：m/z149.145 9 [M+H]+，分子式为C9H8O2。1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：7.56(2H，m，H-2，6)，7.42(3H，m，H-3，4，5)，7.79(1H，d，J= 16.0 Hz，H-7)，6.46(1H，d，J= 15.9 Hz，H-8)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：134.2(C-1)，129.1(C-2，6)，128.5(C-3，5)，130.9(C-4)，117.1(C-7)，147.2(C-8)，170.9(C-9)。以上数据与文献[24]对照基本一致，故鉴定该化合物为trans-cinnamic acid。

化合物19白色粉末；HR-ESI-MS：m/z193.725 4 [M+H]+，分子式为C11H12O3。1H NMR (600 MHz，CDCl3)δ：7.44(2H，m，H-2，6)，6.84(2H，m，H-3，5)，7.64(1H，m，H-7)，6.30(1H，d，J= 15.9 Hz，H-8)，4.25(2H，m，H-1′)，1.33(3H，t，J= 7.2 Hz，H-2′)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：127.5(C-1)，130.1(C-2，6)，116.0(C-3，5)，157.7 (C-4)，144.4(C-7)，115.9(C-8)，167.6(C-9)，60.6(C-1′)，14.5(C-2′)。以上数据与文献[25]对照基本一致，故鉴定该化合物为trans-p-hydroxycinnamic acid ethyl ester。

2.2 抗炎活性筛选结果

本实验采用脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞炎症筛选模型，以氨基胍为阳性对照，对宽叶金粟兰中分离所得含量较大的11个化合物(1～9、12和13)进行了抗炎活性筛选(见表1)。

表1 化合物1～9、12和13的抗炎活性大小

结果显示：当浓度10 μmol/L时，化合物1～3、5、7、12和13具有一定的NO生成的抑制作用，表现出一定的抗炎活性，其中化合物2的抗炎活性较好。

3 结论

本文应用现代色谱技术对宽叶金粟兰95%乙醇提取物的二氯甲烷部位进行了分离研究，从中分离得到19个化合物，包含倍半萜类6个、二萜类4个、酰胺类5个、黄酮类1个和酚酸类3个。15个化合物该植物中首次分离得到，其中6个化合物为首次从金粟兰属中分离得到。因NO是作为最为重要的炎症介质之一，参与多种炎症性疾病的发病过程，被广泛用于评价抗炎活性[26]，所以本文在化学成分的研究基础上，对所分离的量较大的化合物1～9、12和13，以脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞为体外炎症模型，通过抑制一氧化氮(NO)生成实验评价化合物的抗炎活性。结果显示，萜类化合物1、5、7和酰胺类化合物12、13具有较弱的抗炎活性，倍半萜类化合物2含量大且表现出较好的抗炎活性，提示化合物2可能是宽叶金粟兰具有抗炎作用的药效物质基础之一。因此，本研究内容不仅丰富了宽叶金粟兰的化学成分信息，也为拓宽民间中药宽叶金粟兰抗炎的药用范围提供了物质基础和科学依据。