基于止咳、化痰、抗炎、镇痛作用的枇杷果与罗汉果配伍前后的药效差异

王君明 高家乐 杜宇 郑妍 梁静静 史佩欣

(河南中医药大学 1药学院，河南 郑州 450046；2呼吸疾病中医药防治省部共建协同创新中心)

肺喜润恶燥，风热或肺热郁肺日久，常可诱发燥咳、干咳少痰甚或痰中带血。而且，燥咳干咳患者多经久难愈，若能做到未病先防，临床意义重大。当前缺乏适合未病先防的保健茶饮。基于此，本研究在中医药理论指导下，选取药性甘凉、清热滋阴润燥的中药枇杷果〔1〕和罗汉果〔2〕为主要原料，研发滋阴润燥茶饮，以满足未病先防的保健需求和润燥茶的饮茶需求。本研究采用常规浓氨水引咳法和酚红祛痰法考察枇杷果与罗汉果配伍前后茶饮的止咳祛痰作用，并结合枇杷果和罗汉果的清热功效，进一步采用二甲苯致耳廓肿胀法和醋酸扭体法考察了二者配伍前后茶饮的抗炎镇痛作用，旨在为枇杷果和罗汉果作为未病先防的保健茶饮的推广应用提供一定的实验支撑。

1 材料与方法

1.1动物 昆明(KM)小鼠，SPF级，雄性，体重(20±2)g，购自河南省实验动物中心，合格证号：SCXK(豫)2015-0004。

1.2试药 枇杷果购自花果山生态农业淘宝网店，产地云南蒙自；罗汉果购自漓乡韵桂林土特产淘宝网店，产地广西永福。枇杷果和罗汉果均经河南中医药大学药学院陈随清教授鉴定，分别为蔷薇科植物枇杷〔Eriobotryajaponica(Thunb.) Lindl.〕的新鲜果实和葫芦科植物罗汉果〔Siraitiagrosvenorii(Swingle) C.Jeffrey ex A.M.Lu et Z.Y.Zhang〕的干燥果实。二甲苯：天津市风船化学试剂科技有限公司，批号20161020。布洛芬片：上海华源安徽仁济制药有限公司生产，批号151101。冰乙酸：天津市光复科技发展有限公司生产，批号20160910。复方桔梗止咳片：广西慧宝源制药有限公司，批号140801。氯化铵：天津大茂化学试剂厂，分析纯，批号20141015。碳酸氢钠：天津市瑞金特化学品有限公司，分析纯，批号20170209。氨水：烟台市双双化工有限公司，分析纯，批号20160601。

1.3主要仪器设备 EpochTM型微孔板分光光度计(美国BioTek公司)，IVC-Ⅱ型小鼠独立送风隔离笼具系统(江苏苏州冯氏动物笼具厂)，EYELA N-1100旋转蒸发仪(上海比朗仪器有限公司)，SHZ-D(Ⅲ)型循环水式真空泵(巩义市英峪予华仪器厂)，YLS-Q4型8 mm打孔器(北京市平谷北张岱五金厂)。

1.4茶饮制备 取适量的枇杷果、罗汉果或不同质量配比(1/4、1/2、1/1、2/1、4/1)的枇杷果与罗汉果配方，每1 g生药加20 ml蒸馏水，先浸泡30 min,水煮两次，沸腾后保持微沸，每次30 min,合并滤液，过滤，减压浓缩至以生药计浓度为0.5 g/ml的茶饮。

1.5枇杷果与罗汉果配伍前后的茶饮对浓氨水致小鼠咳嗽的影响 采用常规浓氨水引咳咳嗽模型研究受试药物的止咳作用。小鼠按体重随机分为9组，即浓氨水致咳嗽模型组(浓氨水组)、阳性药复方桔梗止咳片(复方桔梗止咳片)组、枇杷果单用茶饮(枇杷果)组、罗汉果单用茶饮(罗汉果)组、枇杷果与罗汉果不同配比(1/4、1/2、1/1、2/1、4/1组)配伍茶饮组，复方桔梗止咳片剂量0.35 g/kg，各茶饮剂量均为10 g/kg，各组连续灌胃给药3 d，末次给药后1 h进行浓氨水引咳，记录小鼠咳嗽潜伏期及2 min内咳嗽次数。

1.6枇杷果与罗汉果配伍前后的茶饮对小鼠器官段酚红排泄量的影响 采用常规酚红祛痰法研究受试药物的祛痰作用。小鼠按体重随机分为9组，即对照组、阳性药10%氯化铵(氯化铵)组、枇杷果单用茶饮(枇杷果)组、罗汉果单用茶饮(罗汉果)组、枇杷果与罗汉果不同配比(1/4、1/2、1/1、2/1、4/1组)配伍茶饮组，10%氯化铵剂量为2 g/kg，各茶饮剂量均为10 g/kg，各组连续灌胃给药7 d，末次给药后30 min，每只小鼠腹腔注射含 2.5% 酚红的 5%碳酸氢钠溶液，0.2 ml/10 g，30 min后脱椎处死小鼠，仰位固定，颈部拉直，解剖分离出气管，将各气管段放入预先盛有1.5 ml的5%碳酸氢钠溶液的离心管中，超声波清洗，使气管段中的酚红完全释放，离心，取上清液，微孔板分光光度计测546 nm处吸光度(A)值，与酚红标准曲线比较，计算酚红含量，根据酚红含量和动物体质量得校正酚红含量。酚红标准曲线：y=0.084 2x + 0.041 2，相关系数r=0.997，其中x为酚红溶液浓度(μg/ml)，y为A值。

1.7枇杷果与罗汉果配伍前后的茶饮对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响 采用常规二甲苯致小鼠耳廓肿胀炎症模型研究受试药物的抗炎作用。小鼠按体重随机分为9组，即二甲苯组、布洛芬组、枇杷果组、罗汉果组、枇杷果与罗汉果不同配比(1/4、1/2、1/1、2/1、4/1组)配伍的茶饮组，复方桔梗止咳片剂量0.1 g/kg，各茶饮剂量均为10 g/kg，各组连续灌胃给药7 d，末次给药后1 h，用移液枪吸取二甲苯10 μl，均匀涂布至小鼠的右耳背腹两侧以致炎，1 h后立即将小鼠颈椎脱臼处死，立刻剪下小鼠的左右耳，用直径为8 mm打孔器在小鼠的左右耳同一位置打孔，以小鼠左右耳片的质量差为肿胀度，计算肿胀抑制率。肿胀度=右耳质量-左耳质量，肿胀抑制率(%)=(二甲苯组肿胀度-给药组肿胀度)/二甲苯组肿胀度×100%。

1.8枇杷果与罗汉果茶饮配伍前后的对醋酸所致小鼠扭体的影响 采用常规小鼠冰醋酸扭体疼痛模型研究受试药物的镇痛作用。小鼠按体重随机分为9组，即醋酸组、布洛芬组、枇杷果组、罗汉果组、枇杷果与罗汉果不同配比(1/4、1/2、1/1、2/1、4/1组)配伍茶饮组，复方桔梗止咳片剂量0.1 g/kg，各茶饮剂量均为10 g/kg，各组连续灌胃给药7 d，末次给药后1 h，各组小鼠均腹腔注射0.6%冰乙酸，0.1 ml/10 g，记录出现第1次扭体反应的时间(即潜伏期)及15 min内的扭体次数。镇痛率(%)=(醋酸组平均扭体次数-给药组平均扭体次数)/醋酸组平均扭体次数×100%。

1.9统计分析 采用SPSS17.0软件进行t检验。

2 结 果

2.1枇杷果与罗汉果配伍前后的茶饮对浓氨水致小鼠咳嗽的影响 枇杷果组、1/2组、1/1组和4/1组及复方桔梗止组咳片均显著延长了浓氨水致咳嗽小鼠的咳嗽潜伏期(P<0.05，P<0.01)，并显著减少了咳嗽次数(P<0.01)；2/1组尽管没有显著延长浓氨水致咳嗽小鼠的咳嗽潜伏期(P>0.05)，却显著减少了咳嗽次数(P<0.01)。见表1。

表1 枇杷果与罗汉果茶饮对浓氨水所致小鼠咳嗽的影响

2.2枇杷果与罗汉果配伍前后的茶饮对小鼠器官段酚红排泄量的影响 与对照组比较，枇杷果组、1/1组及氯化铵组均显著提高了小鼠器官段的酚红排泄量(P<0.05)，且祛痰率均较高。见表2。

表2 枇杷果与罗汉果茶饮对小鼠器官段酚红排泄量的影响

2.3枇杷果与罗汉果配伍前后的茶饮对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响 枇杷果组、罗汉果组、1/4组、1/2组、1/1组、2/1组和4/1组及布洛芬组均显著降低了二甲苯所致的小鼠耳廓肿胀度(P<0.01)，对耳廓肿胀的抑制率在50.0%～68.3%。见表3。

表3 枇杷果与罗汉果茶饮对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响

2.4枇杷果与罗汉果茶饮配伍前后对醋酸所致小鼠扭体的影响 1/2组和4/1组及布洛芬组均显著减少了醋酸所致小鼠的扭体次数(P<0.05，P<0.01)；4/1组显著延长了醋酸所致小鼠的扭体潜伏期(P<0.01)。见表4。

表4 枇杷果与罗汉果茶饮对醋酸所致小鼠扭体的影响

3 讨 论

枇杷为蔷薇科苹果亚科枇杷属植物,含有多种化学成分，其中包括富含淀粉、蛋白质、脂肪酸等营养成分及三萜酸、黄酮、酚类等重要药效成分，具有止咳、祛痰、抗炎、抗癌、抗病毒、抑菌、抗氧化、抗疲劳、降血糖、调节免疫等广泛的药理作用〔2～6〕；罗汉果为葫芦科植物罗汉果的干燥果实，含有多糖、蛋白质、维生素、微量元素等营养成分及苷类、黄酮、油脂等多种生物活性成分，具有止咳、祛痰、抗炎、抑菌、降糖、抗氧化、抗肿瘤、抗动脉粥样硬化、保肝、调节免疫、抗疲劳等广泛的药理作用〔7～10〕。此外，枇杷果肉鲜美，罗汉果因其浓郁的甜味而闻名于世，是一种非热量的天然甜味剂，枇杷果和罗汉果口感好且均有较高的营养价值〔2～4,8〕。因此，本研究以枇杷果和罗汉果为主要原料，考察二者单用及不同配比下配伍前后对常见生物活性(如止咳、祛痰、抗炎等)的影响，旨在为开发以二者为主要组成原料的滋阴润燥茶饮的研究奠定实验基础。

浓氨水引咳法、酚红祛痰法、二甲苯致耳廓肿胀法、醋酸扭体法分别为考察药物止咳、祛痰、抗炎、镇痛作用方面常用的研究方法〔11～18〕。本研究采用小鼠常规浓氨水引咳法、酚红祛痰法、二甲苯致耳廓肿胀法、醋酸扭体法考察了枇杷果与罗汉果配伍前后茶饮的止咳、祛痰、抗炎、镇痛作用。研究结果表明，就配伍前的单用茶饮而言，枇杷果具有止咳、祛痰和抗炎作用，这与枇杷具有止咳、祛痰、抗炎等生物活性的报道基本一致〔2～6〕；罗汉果具有抗炎作用，这与文献报道罗汉果(含其活性组分)具有抗炎活性的研究报道基本一致〔7～10〕；就二者配伍后的茶饮而言，枇杷果与罗汉果分别以1/2和4/1配比下的茶饮均具有止咳、抗炎和镇痛作用，枇杷果与罗汉果以1/1配比下茶饮具有止咳、祛痰和抗炎作用，枇杷果与罗汉果以1/4配比下茶饮具有抗炎作用，枇杷果与罗汉果以2/1配比下茶饮具有止咳和抗炎作用。就配伍前后的比较而言，枇杷果单用茶饮有止咳、祛痰和抗炎三种作用，这仅与枇杷果与罗汉果以1/1比例下茶饮的作用一致，但却与其他四个配比下茶饮的作用不完全一致，例如以1/2和4/1比例下茶饮均比枇杷果单用茶饮新增了镇痛作用却未见祛痰作用，以2/1比例下茶饮有止咳和抗炎作用但却未见祛痰作用，以1/4比例下茶饮仅见抗炎作用却未见止咳和祛痰作用。同样，罗汉果单用茶饮在本研究中仅见抗炎作用，这仅与枇杷果与罗汉果以1/4比例下茶饮的作用一致，但却与其他四个配比下茶饮的作用不完全一致。此外，枇杷果和罗汉果两个单用的茶饮，在本研究中均未见到镇痛作用，然而，枇杷果与罗汉果分别以1/2和4/1比例下茶饮均产生了镇痛作用。之所以产生以上现象，究其原因，主要与枇杷果与罗汉果配伍前后煎煮制茶过程中引起生物活性成分(诸如三萜酸、黄酮、酚类、皂苷、甜苷、油脂等)的种类和数量的差异变化有关。至于主要是哪些化学成分的变化引起了这些差异进而诱发了以上诸多现象的发生，尚需要进一步研究。