高效液相色谱法测定唑虫酰胺的含量

周 敏，李敬良

（华北制药集团爱诺有限公司，河北 石家庄052165）

0 引 言

唑虫酰胺是一种新型吡唑杂环类高效杀虫、杀螨剂，本品化学名为4-氯-3-乙基-1-甲基-N-{[4-(4-甲基苯氧基)苯基]-甲基}-1H吡唑-5-羧酰胺，分子式为C21H22ClN3O2，分子量为383.9，纯品为类白色固体粉末。

唑虫酰胺的主要作用机制是阻止昆虫的氧化磷酸化作用，且具有杀卵、抑食、抑制产卵及杀菌的作用。

目前，国内有关唑虫酰胺的分析方法未见公开报道，本文采用高效液相色谱法，对唑虫酰胺进行定量分析。该方法操作简单、快速、准确，分离效果好，准确度和精密度均能达到定量分析的要求。

1 仪器与试剂药品

1.1仪 器

（1）高效液相色谱仪：日本岛津公司LC-20A。

（2）检测器：紫外检测器，日本岛津公司SPD-10A。

（3）Millipore：超纯水制备系统。

1.2 试剂和药品

（1）唑虫酰胺对照品：质量分数为99.7%，由农业部农药检定所提供。

（2）唑虫酰胺样品：由某公司提供，批号为Y146160102。

（3）甲醇：色谱纯。

（4）超纯水。

其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

①色谱柱：4.6 mm×250 mm，填料为ODS C18，5μm，依利特生产；②流动相：甲醇∶水=70∶30；③流速：1.0 mL/min；④柱温：40℃；⑤检测波长：217 nm。

2.2 溶液制备

（1）对照品溶液。

精确称取40.0 mg唑虫酰胺对照品（含量为97.0%）置于100 mL容量瓶中，用甲醇溶剂溶解，稀释至每1 mL约含相当于唑虫酰胺400 ug的溶液，摇匀，定容，备用。

（2）供试品溶液。

精确称取40.0 mg唑虫酰胺样品置于100 mL容量瓶中，用甲醇溶剂溶解，稀释至每1 mL约含相当于唑虫酰胺400 ug的溶液，摇匀，定容备用。

2.3 系统适应性试验

（1）称取40.32 mg唑虫酰胺对照品溶液置于100 mL容量瓶中，用甲醇溶剂溶解，摇匀，定容，备用。

（2）精确量取5μL该溶液注入液相色谱仪中，连续进6针，测峰面积，计算得相对标准偏差为0.48%。

系统适应性实验结果见表1。

表1 系统适用性试验结果Table 1 Test results of system suitability

2.4 含量测定方法

（1）精确称取40.0 mg唑虫酰胺对照品置于100 mL容量瓶中，用甲醇溶剂溶解，摇匀，定容，备用。

（2）精确量取5μL该溶液注入液相色谱仪，记录色谱图。

（3）另取唑虫酰胺供试品适量，同法测定，采用外标法以峰面积计算。

唑虫酰胺色谱图如图1所示。

图1 唑虫酰胺色谱图Fig.1 Chromatogram of tolfenpyrad

2.5 方法学考察

2.5.1 线性关系考察

线性关系考察的具体步骤如下。

（1）精确称取102.43 mg唑虫酰胺对照品(含量为97.0%）置于100 mL容量瓶中，用甲醇溶解，定容。

（2）量取以上溶液分别稀释成浓度为50.75、101.51、203.02、253.78、507.54 mg/mL的溶液，过滤，取滤液作为供试品溶液。

（3）分别抽取5μL供试品溶液注入高效液相色谱仪中，每个浓度进样2次，色谱条件同2.1，记录色谱图。

（4）以对照品质量浓度(μg/mL)为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程：Y=17 028X-176.21，r=0.999 8。

唑虫酰胺线性关系如图2所示。

图2 唑虫酰胺线性图Fig.2 linear graph of oxacylamide

由图2可以看出，唑虫酰胺在50.75～507.54 μg/mL范围内，峰面积与浓度呈现良好的线性关系。

2.5.2 精密度实验

精密度实验的具体步骤如下。

（1）准确称取40.0 mg唑虫酰胺样品（含量为96.5%）分别置于50、100、250 mL容量瓶中，用甲醇溶剂溶解，摇匀，定容，备用。

（2）分别抽取3个样品各5μL，注入高效液相色谱仪中，每个样品溶液进3针，记录谱图，测定峰面积，计算其相对标准偏差。

（3）测得3个样品的相对平均偏差分别为0.24%、0.18%、0.22%，结果重复性好。

精密度实验结果见表2。

表2 精密度实验结果Table 2 Precision test results

2.5.3 准确度实验

（1）从已知质量分数（96.5%）的唑虫酰胺样品中称取3个试样，分别加入一定量的唑虫酰胺标样（97.0%）。

（2）每个样品溶液重复进针3次，每个待测溶液进1针，记录谱图，并分别计算样品溶液的回收率。

准确度实验结果见表3。

表3 准确度试验结果Table 3 Accuracy test results

由表3可以看出，唑虫酰胺的回收率及准确度均良好。

3 讨 论

3.1 试验方法的选择

（1）紫外分光光度法的选择项不强，唑虫酰胺制剂中的其他成分可能会影响吸收，不适合该样品含量的测定。

（2）气相色谱法适用于含挥发性或经裂解、衍生化等能气化的药品及多组分混合物的定性、定量分析，而唑虫酰胺的挥发性较低，此方法不适合。

（3）高效液相色谱法适用于挥发性低、热稳定性差、分子量大的高分子化合物及离子型化合物的定性、定量分析，唑虫酰胺分子量大，挥发性较低，故选择高效液相色谱法测定唑虫酰胺的含量。

3.2 色谱柱的选择

分别选用Kromasil C8、3.5μm填料色谱柱和ODS C18、5μm填料色谱柱进行测定，结果表明，2种色谱柱的检测时间影响不大，因此，选择成本较低的ODS C18、5μm填料色谱柱。

3.3 检测波长的选择

量取5μL对照品溶液注入高效液相色谱仪中，在200～400 nm波长范围内进行光谱扫描，对照品在217 nm和372 nm波长处有最大吸收，但在372 nm波长处的响应值太小，故选择217 nm作为检测波长。

3.4 溶剂的选择

依据唑虫酰胺的物化性质，用甲醇作为溶剂来溶解样品，并选择甲醇和水作为流动相。

为得到较好的分离效果和峰形，将流动相按不同比例在色谱柱上进行试验，最终确定流动相为甲醇∶水=70∶30。

3.5 流速的选择

通过实验得出，在流速为1.0 mL/min时，有效成分与杂质均能得到很好的分离，峰形对称，基线平稳，能在短时间得到满意的分析结果，提高了工作的效率。

4 结 语

建立了以高效液相色谱法测定唑虫酰胺中有效成分的分析方法。实验结果表明，唑虫酰胺在测定浓度范围内线性关系良好，方法的准确度和精密度较高，具有操作简便、快速的特点，是产品质量控制和应用研究中较为理想的分析方法。