成都地区表观健康者小而密低密度脂蛋白胆固醇参考区间建立

李 静，全 晖，曾志荣，韦 祎

（成都医学院第二附属医院 核工业四一六医院检验科，四川 成都 610051）

心血管疾病是目前人类死亡的主要原因。低密度脂蛋白（low-density lipoprotein，LDL）水平升高是独立的致动脉粥样硬化的危险因素。LDL根据大小和密度可分为大而轻低密度脂蛋白和小而密低密度脂蛋白（small and dense low-density lipoprotein，sd-LDL）[1]。有研究结果表明，sd-LDL颗粒具有比LDL颗粒更强的致动脉粥样硬化作用[2]。sd-LDL更易于氧化，且清除缓慢，更易进入动脉管壁，促进泡沫细胞的形成。因此，小而密低密度脂蛋白胆固醇（small and dense low-density lipoprotein cholesterol，sd-LDL-C）水平对于评估致动脉粥样硬化风险具有十分重要的作用。目前，sd-LDL的检测方法主要有超速离心法、沉淀分离法、梯度凝胶电泳法和高效液相色谱法等。这些方法均需特殊仪器，操作繁琐，步骤复杂，耗时较长，不适合临床常规检测。而可用于全自动生化分析仪检测sd-LDL-C的过氧化物酶法具有简便、快捷的优点，可大批量检测，适用于临床常规检测[3]。由于目前尚无公认的sd-LDL-C参考区间，所以限制了sd-LDL-C在临床诊疗及健康评估等方面的应用。为此，本研究拟采用过氧化物酶法检测成都地区血脂水平正常的表面健康者的sd-LDL-C水平，初步建立基于过氧化物酶法的sd-LDL-C参考区间。

1 材料和方法

1.1 研究对象

选取2017年7月—2019年8月核工业四一六医院表观健康者846名，其中男474名、女372名，年龄20～69岁，所有对象均经询问病史、体格检查、心电图检查、影像学检查和实验室检查排除冠心病、糖尿病及肝、肾疾病，3个月内未服用降脂药物，空腹三酰甘油（triglyceride，TG）＜1.7 mmol/L、总胆固醇（total cholesterol，TC）＜5.2 mmol/L、低密度脂蛋白胆固醇（low-density lipoprotein cholesterol，LDL-C）＜ 3.4 mmol/L[4]。将所有对象按年龄（20～29岁、30～39岁、40～49岁、50～59和60～69岁）和性别（男性、女性）分别分组。

1.2 方法

采用肝素锂抗凝真空管采集所有对象禁食12 h后清晨安静状态下的空腹静脉血5 mL，1 007×g离心10 min，2 h内完成TC、TG、高密度脂蛋白胆固醇（high-density lipoprotein cholesterol，HDL-C）、LDL-C、载脂蛋白A1（apolipoprotein A1，apo A1）、载脂蛋白B（apolipoprotein B，apo B）和sd-LDL-C 的检测。

TC和TG均采用酶法检测，HDL-C采用直接法-选择抑制法检测，LDL-C采用直接法-表面活性剂清除法检测，apo A1和apo B采用免疫比浊法检测，sd-LDL-C采用过氧化物酶法检测，试剂均购自北京九强生物技术股份有限公司，检测仪器为AU2700 全自动生化分析仪（美国贝克曼库尔特公司）。

1.3 统计学方法

采用SPSS 17.0软件进行统计分析。呈正态分布的数据以表示，呈非正态分布的数据以中位数（M）[四分位数（P25～P75）]表示，多组间比较采用Kruskal-WallisH检验，两两比较采用Mann-WhitneyU检验；不同性别之间比较采用Mann-WhitneyU检验。采用百分位数法建立参考区间[5]，血脂的适宜水平采用M（P2.5～P97.5）表示。采用Spearman等级相关分析评估各项目之间的相关性。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同性别表观健康者血脂水平的比较

男性、女性之间血浆TC、TG、HDL-C、LDL-C、apo A1、apo B和sd-LDL-C水平差异均有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 不同性别表观健康者血脂水平的比较

2.2 表观健康者sd-LDL-C水平分布

表观健康者血浆sd-LDL-C呈近似偏态分布。sd-LDL-C随年龄的增长逐渐升高，男性50～59岁达到峰值（M为0.63 mmol/L），女性60～69岁达到峰值（M为0.63 mmol/L）。20～49岁各年龄段男性血浆sd-LDL-C水平均高于同年龄段女性（P＜0.05）；50～59岁和60～69岁男性、女性之间血浆sd-LDL-C水平差异均无统计学意义（P＞0.05）。见图1。

图1 各年龄段表观健康者sd-LDL-C水平分布

2.3 男性、女性各年龄组血脂适宜水平的分布

不同性别各年龄组之间TC、TG、LDL-C、apo B和sd-LDL-C项目的适宜水平差异均有统计学意义（P＜0.05）。男性HDL-C、apo A1项目和女性HDL-C项目的适宜水平各年龄组之间差异均无统计学意义（P＞0.05）。见表2。

表2 男性、女性各年龄组血脂适宜水平的分布

续表2

2.4 年龄、sd-LDL-C与各项指标的相关性

年龄与TC、TG、LDL-C、apo A1、apo B和sd-LDL-C呈正相关（r值分别为0.235、0.245、0.298、0.070、0.323、0.278，P＜0.05），与HDL-C呈负相关（r=-0.017，P＜0.05）。

sd-LDL-C与TC、TG、LDL-C、apo B和sd-LDL-C呈正相关（r值分别为0.601、0.544、0.758、0.757，P＜0.05），与HDL-C、apo A1呈负相关（r值分别为-0.256、-0.123，P＜0.05）。

2.5 不同来源sd-LDL-C参考区间的比较

采用百分位数法（P2.5～P97.5）建立本地区表现健康者sd-LDL-C的参考区间。本研究建立的sd-LDL-C参考区间与已有的sd-LDL-C参考区间的比较见表3。

表3 不同来源的sd-LDL-C参考区间的比较

续表3

3 讨论

《中国成人血脂异常防治指南（2016年修订版）》[4]指出，中国成人血脂异常总体发生率高达40.4%，提示未来我国人群血脂异常及相关疾病的负担将继续加重。目前，临床血脂检测面临以下问题：LDL-C水平并不能完全反应LDL的生物学效应，单纯的LDL-C检测并不能完全反映动脉粥样硬化性心血管疾病（atherosclerotic cardiovascular disease，ASCVD）患者的真实血脂水平[10]。因此，临床近年来开始更多地关注脂蛋白“质”的变化及其对疾病的影响。有研究结果显示，人体内高sd-LDL-C水平与ASCVD的发生密切相关，sd-LDL-C作为预测和评估ASCVD风险的指标比LDL-C更敏感[11]。目前，sd-LDL-C已引起临床和实验室的高度重视，被美国国家胆固醇教育计划成人治疗组列入新发现的重要心血管疾病危险因素之一[12]。但受检测技术的限制，目前尚未见成都地区sd-LDL-C分布的报道。为了更好地发挥sd-LDL-C的临床价值，建立本地区sd-LDL-C的参考区间尤为重要。因此，本研究对成都地区表观健康者sd-LDL-C的分布情况进行探讨，并初步建立其参考区间。

本研究结果显示，成都地区表观健康者血清sd-LDL-C呈偏态分布。不同年龄和性别之间sd-LDL-C水平差异均有统计学意义（P＜0.05）。sd-LDL-C与年龄呈正相关（r=0.278，P＜0.05）。20～49岁各年龄段男性血浆sd-LDL-C水平均高于同年龄段女性（P＜0.05）；50～59岁男性血浆sd-LDL-C水平稍高于女性，但差异无统计学意义（P＞0.05）；60～69岁男性血浆sd-LDL-C水平稍低于女性，但差异无统计学意义（P＞0.05）。女性血浆sd-LDL-C水平随年龄增长而升高，60岁后稍高于男性，可能与女性绝经后TG和sd-LDL-C水平升高有关，提示女性绝经后有更高的冠状动脉硬化风险。因此，我们下一步将研究中老年女性血脂水平与绝经的相关性。本研究各年龄段表现健康者sd-LDL-C水平分布趋势与陈立平等[6]和从辉等[7]的报道相似，但总体水平高于陈立平等[6]、从辉等[7]、HIRANO等[8]和ITO等[9]的报道，这可能与人群、生活习惯、检测方法不同有关。刘芳等[13]的研究结果显示，济南地区人群血清sd-LDL-C水平存在性别和年龄差异，与本研究结果一致。本研究使用的过氧化物酶法试剂说明书提供的参考区间相对较宽，高于本研究建立的sd-LDL-C参考区间，提示各临床实验室应建立符合本地区人群的与年龄、性别相关的sd-LDL-C参考区间。

本研究结果还显示，sd-LDL-C与 TC、TG、LDL-C、apo B呈正相关（r值分别为0.601、0.544、0.758、0.757，P＜0.05），与HDL-C、apo A1呈负相关（r值分别为-0.256、-0.123，P＜0.05），与陈力平等[6]、从辉等[7]的研究结果一致。sd-LDL颗粒的形成高度依赖于TG水平和遗传因素，其他环境因素也可能会影响这一过程。糖尿病、代谢综合征、胰岛素抵抗和高TG血症患者LDL颗粒水平会明显升高，这可能是此类患者血管疾病高发的部分原因。sd-LDL的理化特性可能会导致动脉粥样硬化的风险升高，这是因为sd-LDL更易进入动脉壁的内皮下空间，增强了与内膜蛋白多糖的结合能力，导致其更易被巨噬细胞氧化和摄取，促进泡沫细胞形成。LDL受体对sd-LDL识别率较低，导致血浆sd-LDL的半衰期较长，进而使其氧化作用增强，代谢迟缓[8]。

与年龄和性别相关的参考区间是一个质量指标，正确使用这些参考区间可以为临床决策提供有效的参考[14-15]。因此，各临床实验室应根据年龄、性别、地域等实际情况建立自己的参考区间。本研究按年龄和性别分别分组，建立了成都地区基于过氧化物酶法、与年龄和性别相关的sd-LDL-C参考区间。本研究尚存在一些不足，如＞50岁表观健康女性例数较少。在后续工作中，我们会继续关注中老年人群，进一步研究该目标人群血脂水平的影响因素及其对心脑血管的影响。

综上所述，sd-LDL-C的参考区间对监测和控制ASCVD风险有重要意义[16]。本研究建立的sd-LDL参考区间可为患者管理、临床疾病或治疗效果的解释提供可靠的参考信息。