HPLC法测定市售炮制辅料醋中川芎嗪的含量

董月梅 姜其宝 田金凤 宋晓 张超

本文目的为测定不同品种市售炮制辅料醋中川芎嗪的含量。方法  采用HPLC法测定市售醋中川芎嗪的含量，色谱条件为流动相为甲醇-1%HAC（35：65），流速1.0mL·min-1，检测波长280nm，进样量20?L。结果  川芎嗪在0.29300?g·mL-1范围内线性关系良好，回归方程为Y=59.18X+127.16（r=0.9998），平均回收率为98.08%，RSD值为1.56%（n=6）。结论  本研究建立的方法操作简便、准确性好、灵敏度高，适用于市售炮制辅料醋的质量控制。

食醋中氨基酸的种类多达18种，具有促进胃液分泌，降低血脂和胆固醇，延缓衰老等功能 [1]。近年来，炮制辅料用醋缺少严格的药用标准，有文献测定[2]食醋中苯乳酸的含量，为炮制辅料醋的质量控制提供了依据，还有文献[3]用HPLC的方法测定了镇江香醋中的川芎嗪，认为川芎嗪主要是由微生物的发酵而产生的，美拉德反应是川芎嗪含量增加的主要原因。但是，川芎嗪能否作为炮制辅料醋的质量控制指标未见报道。所以，本实验采用HPLC法测定13种市售炮制辅料醋中川芎嗪的含量，结合酿造原料和工艺分析结果，为炮制辅料用醋品种的选择和药用标准的建立提供依据。

仪器与材料

Agilent 1260型高效液相色谱仪（美国Agilent公司）; KQ-250E型医用超声波清洗机（昆山市超声仪器有限公司）;MS105DU型十万分之一电子分析天平（瑞士梅特勒-托利多公司）;高速冷冻离心机（上海市浦东新区新金桥路27号7号楼），pH试纸（天津市金达化学试剂有限公司）。川芎嗪对照品（批号：110817-200305，中国药品生物制品检定所），其余试剂均为分析纯。13种市售炮制辅料醋：山西紫林陈醋（批号：20200531）;紫林原酿陈醋（批号：20200629）;山西溢勺香老陈醋（批号：20150318）;恒顺镇江香醋（批号：20110928）;海天香醋（批号：20200705）;水塔老陈醋（批号：20200310）;恒顺镇江香醋（批号：20200415）;山西西堡泉老陈醋（批号：20130510）;居易米醋（批号：20200616）;正堂食醋（批号：20200227）;德馨斋清香米醋（20190610）;好太太香醋王（20200703）;海天白米醋（20200617）

方法与结果

对照品溶液的制备  取川芎嗪对照品适量，精密称定，加甲醇制成浓度为300?g·mL-1的对照品溶液。

供试品溶液的制备  精密量取食醋15mL，用10%的NaOH溶液调pH10-11，加入CHCL3 20mL，混匀萃取，静置分层。7200r·min-1离心15min，转移CHCL3，重复上述操作一次，合并CHCL3相。将CHCL3水浴60℃蒸干，残渣用0.2moL·L-1的盐酸和甲醇以3：7比例混合均匀的溶液定容至1mL，临用前用0.45?m微孔滤膜过滤，即得供试品溶液。

HPLC色谱条件  采用Inertsil ODS-3C18色谱柱（250×4.6mm，5?m），流动相为甲醇-1%HAC（35：65），流速1.0 mL·min-1，检测波长280nm，进样量20?L，柱温30 ℃。在该色谱条件下，川芎嗪色谱峰图形较好，见图1。

方法学考察

线性关系的考察  分别精密量取川芎嗪标准品溶液（300?g·mL-1）0.010、0.039、0.156、0.625、2.500mL，置10mL棕色量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。分别吸取以上稀释的溶液各20?L，进行检测，记录峰面积，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为 Y=59.18X+127.16（r=0.9998），川芎嗪在0.29300?g·mL-1有良好的线性关系。

精密度实验  取同一供试品溶液，连续检测6次，记录峰面积，计算峰面积的RSD为2.58%，表明仪器精密度良好。

稳定性实验  取同一供试品溶液，按2.3项下的色谱条件分别在0、2、4、8、16、24 h进行测定，川芎嗪峰面积的RSD为2.46%，说明供试品溶液在24h内稳定性良好。

重复性实验  取同一供试品溶液6份，按2.3項下的色谱条件进行测定，结果川芎嗪的含量的RSD为1.86%，说明该方法重复性良好。

加样回收率实验  精密吸取已知含量为9.31?g·mL-1 ，恒顺镇江香醋7.5mL（批号：20200415），共6份，加入川芎嗪对照品溶液适量，按2.2项下制备供试品溶液，2.3项下色谱条件测定，测得的回收率为98.08%，RSD为1.56%，该方法回收率高，符合含量测定的要求。

样品测定  取2.2项下供试品溶液，按2.3项下的HPLC色谱条件依次进行测定，计算样品中川芎嗪的含量，见表2

讨论

本文用HPLC法测定13批市售炮制辅料醋中川芎嗪的含量，发现不同方法酿制的辅料醋中川芎嗪的含量也不同。德馨斋白醋、海天白米醋采用液态发酵技术，均未检测到川芎嗪，这与酿造过程中的脱色[4]有关，脱色过程中选择活性炭作为吸附剂，活性炭对极性基团的吸附能力较强，凡是分子中含有极性基团的物质都容易被活性炭吸附，川芎嗪可能在脱色过程被吸附除去。因此，白醋及白米醋不适合作为中药炮制的辅料醋。批号为20110928的恒顺镇江香醋和批号为20200415的恒顺镇江香醋生产原料均为糯米、麦麸、大米、大曲，川芎嗪的含量相差较大，这与陈放过程中的美德拉反应有关，随着醋存放时间的增长，川芎嗪的含量会持续增加[3]。米醋主要有固态发酵和液态发酵两种发酵方式，而液态发酵法周期较短（大约7d），而固态发酵法生产周期比较长（大约30d），更利于多种微生物及酶的参与，所发酵醋的风味口感更好[5]。因此，固态发酵的食醋更适宜作为中药炮制的辅料。综上，不同食醋中川芎嗪的含量不同，炮制辅料醋的发酵方法、存放时间等都可对川芎嗪的含量产生影响，可考虑将川芎嗪作为醋的质量控制指标，下一步可进行同一品种不同批次食醋间川芎嗪含量的稳定性试验。

参考文献：

[1] 吴晓明，曹岚.我国食醋行业发展现状及趋势[J].中国调味品，2012，37（09）：19-21.

[2] 吴仁蔚，陈亨业，郭俊陆，等.食醋中苯乳酸的提取、鉴定及含量比较[J].中国酿造，2020，39（01）：66-70.

[3] 李丹亚，许泓瑜，陆震鸣，等.镇江香醋在陈放过程中功能因子的变化规律研究[J].食品工业科技，2008（07）：219-221.

[4] 曹宝忠，苏迎会，许新军，等.发酵白醋生产及脱色技术探讨[J].中国酿造，2010（04）：138-141.

[5] 胡本高.液态深层发酵与固态发酵食醋风味差别探讨[J].食品工业，2004（5）：27-28.

基金项目：国家中医药管理局全国中医药创新骨干人才培训项目（国中医药人教函[2019]128号）;山东中医药大学大学生研究训练计划（SRT）项目（2020050）

作者简介

董月梅，女，从事药物分析工作。

*通信作者，张超

董月梅  姜其宝  田金凤  宋晓  张超*

山东中医药大学药学院  山东济南  250355