微生物实验室的风险评估及风险控制措施

卫芳 王艳婷 赵静雪 张二卫

随着科技的不断发展和人们对高质量生活水平的需求增长，许多新兴的产业和物种不断产生，在满足条件的同时一个隐形的杀手——生物安全问题日益凸显。因此，微生物实验室的风险评估和风险控制具有相当重要的意义。

为确保参与微生物实验人员身体健康，环境不受污染，能够正常开展微生物实验，确保出具的数据准确、有效，需要对微生物实验室所有实验活动进行风险识别和分析评估，并提出相应的控制措施[1]。实验室应建立并维持风险评估和风险控制程序，以持续进行危险识别、风险评估和实施必要的控制措施。

生物因子危害及风险控制措施

生物因子危害

实验室使用的菌种基本包括大肠埃希氏菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌、单核增生李斯特氏菌、铜绿假单胞菌、副溶血性弧菌、产气荚膜梭菌、粪链球菌等，存在一定的风险，包括菌种保存不当、未按照规定要求进行菌株传代、操作时菌液溅洒、废弃物处理不当等。

风险控制措施

菌种保存不当：菌种保存应设置生物安全员专人负责保管，保存菌种的低温冰箱设置双人双锁。每次拿放菌种需要做相应的登记，由实验室人员和生物安全员双方签字确认。

菌株传代：菌株传代应有完善的作业指导书和菌株传代记录，标准储备菌株应在规定的时间内转种传代，并做相应的确认试验，记录相关原始数据存档保存。

菌液溅洒：实验室应具备防菌液溅洒措施，出现菌悬液溅洒时用消毒液进行处理，防止对人员和环境造成伤害和污染。

废弃物处理不当：对于实验室用过的带菌的、污染过的培养基、试剂条、枪头、接种环、玻璃器皿等废弃物要采用相应的消毒剂灭菌或者121℃，30min以上高温高压灭菌，废弃物的处理应有相应的制度和废弃物处置记录。

人员风险及风险控制措施

人员风险 由于微生物检测人员专业知识欠缺，操作不规范导致实验数据的不准确，甚至生物安全事故的发生。

风险控制措施 参与微生物检测的人员应具备微生物相关专业知识，学历、工作经验应符合检验检测要求，实验室人员应熟悉生物检测安全操作知识和消毒灭菌知识。

生物安全柜风险及风险控制措施

生物安全柜[2]风险 生物安全柜未按规定要求校准，参数不达标;未按照设备操作规程和使用说明进行操作维护可能使生物安全柜丧失功能，无法保证生物安全。

风险控制措施 应设置专门的设备管理员负责设备的定期校准和维护;制作生物安全柜操作规程，由专业老师培训指导，考核通过方可上岗作业。

高压灭菌器风险及风险控制措施

高压灭菌器风险 高压灭菌器未按规定要求校准，参数不达标，未按照设备操作规程和使用说明进行操作、维护，可能使灭菌效果降低或丧失。未定期做高压灭菌器效果鉴定可能灭菌效果不达标导致灭菌不彻底，易引起空白长菌，样品污染导致实验失败。高压灭菌器内温度过高，容易造成蒸汽烫伤。

风险控制措施 设置专门的设备管理员负责设备的定期校准和维护。参加高压灭菌器的专业培训，持证上岗。

建立高压灭菌器效果鉴定作业程序[3]，包括监测方法和监测频率。并记录相关数据。

化学法监测是指将灭菌指示条放入待灭菌的物品中，经一个灭菌周期后，颜色和性状符合规定要求则为合格，反之则不合格。

培养后指示管不变色（呈紫色），表示灭菌通过。培养后指示管变色（呈黄色），表示灭菌不通过。同时培养的对照管应为阳性（呈黄色）。

待高压灭菌器内压力降至0、温度降至规定要求再拿取物品，可带上防高温手袋避免烫伤。

电热鼓风干燥箱风险及风险控制措施

电热鼓风干燥箱风险 灭菌时间不够，灭菌不彻底可能导致培养皿污染空白长菌。高温设备使用不当可能导致烧伤、烫伤等危害。

风险控制措施 制作电热鼓风干燥箱作业指导书，包含规范的操作流程和灭菌时间，避免安全事故的发生。

紫外灯风险及风险控制措施

紫外灯风险 紫外灯未定期更换，超过使用寿命，可能导致灭菌效果不达标。操作时未关闭紫外灯，长期紫外灯光照可能导致操作人员皮肤受损。

风险控制措施 完善紫外灯使用记录，定期更换，加强人员监督力度。制作安全使用警示标识贴在紫外灯开关明显位置，提醒操作人员，操作前关闭紫外灯。

生物安全实验室风险及风险控制措施

生物安全实验室风险 布局不合理，无菌室、阳性对照室、培养间未独立开可能造成交叉污染。未安装压差表，可能无法保证生物安全实验室洁净度。

风险控制措施 生物安全实验室[4] 应设置无菌室、阳性对照室、培养间等功能间，能有效降低感染率。生物安全实验室应安装压差表，通过压力差控制气流方向，保证生物安全实验室洁净度。

洗眼器风险及风险控制措施

洗眼器风险 未安装洗眼器，当发生有害物质喷溅眼睛或者面部时不能起到有效的保护措施。

风险控制措施 在实验室的适当位置安装洗眼器，当发生有害物质喷溅眼睛或者面部时第一时间提供水冲洗，降低伤害。

培养基使用风险及风险控制措施

培养基使用风险 培养基未按规定进行验收，可能原料不合格导致菌种生长异常影响实验结果;培养基未按要求的环境条件储存，造成培养基受潮结块可能影响产品质量;培养基未按标准要求灭菌，導致培养基灭菌不彻底或者营养物质受损影响菌种生长。

风险控制措施 制作培养基验收[5]记录，包括外观验收、内容物检查、产品质量指标验收（包含所用的标准菌株的信息）;培养基、试剂应按照相应的储存环境保存，并在储存柜里放置温湿度表，每天监测温湿度变化，保证储存环境符合培养基、试剂的储存要求;培养基应按照规定的压力、温度、时间要求灭菌。

玻璃器皿、酒精灯风险及风险控制措施

玻璃器皿、酒精灯风险 玻璃器皿破损，可能造成操作员手被划伤;有裂纹的玻璃器皿高温加热可能炸裂造成安全事故。未规范使用酒精灯导致酒精溅洒遇明火燃燒造成火灾。

风险控制措施 避免使用有缺口的玻璃仪器、操作前检查玻璃器皿有无破损裂纹。操作时注意安全，避免划伤。加热玻璃器皿时拿取应戴上隔热手套。酒精灯的使用应注意酒精溅洒，一旦溅洒燃烧可用湿布扑灭。灯内酒精不易装得太满，避免外溢。

无菌室洁净度风险及风险控制措施

无菌室洁净度风险 未定期做无菌室洁净度验证，洁净度不达标，导致样品污染。

风险控制措施 制作无菌室洁净度验证作业指导书，包括验证的方法及频次并做好相应的记录，定期做无菌室洁净度验证[6] ，如大于所设定的风险值则应分析原因，并采取适当措施。

结论

生物安全问题已经受到普遍的关注，随着科学技术的发展，越来越多的科学研究、医疗机构、企业生产等行业涉及到生物安全问题。微生物实验室的风险评估和风险控制是一个持续进行的过程，以上分析的风险因素可能存在评估不全面、不到位、防控措施待改进等缺点，我们将在以后的评估中不断完善改进。

参考文献

[1]GB 19489-2008 实验室 生物安全通用要求[S]. 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会发布，2008.

[2]YY 0569-2011 Ⅱ级生物安全柜[S]. 国家食品药品监督管理局发布，2011.

[3]CNAS-CL01-A001检测和校准实验室能力认可准则在微生物检测领域的应用说明[S]. 中国合格评定国家认可委员会发布，2018.

[4] GB 50346-2011 生物安全实验室建筑技术规范[S].北京：中国建筑工业出版社，2011.

[5]GB 4789.28-2013 食品安全国家标准 食品微生物学检验 培养基和试剂的质量要求[S].中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会发布，2013.

[6]GB/T 27405-2008 实验室质量控制规范 食品微生物检测[S]. 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会发布，2008.

卫芳 王艳婷 赵静雪 张二卫

河南中方质量检测技术有限公司