乳腺癌、胃癌HER-2免疫组织化学检测中液态阳性对照的制作和应用

李 韬，罗依蔓，伏阳燕

四川绵阳四0四医院病理科，四川绵阳 621000

免疫组织化学是目前病理科使用较多的鉴别诊断方法，但是在检测时会出现假阴性、假阳性的情况。为了保证检测结果的准确性和可靠性，质量控制必不可少。人类表皮生长因子受体2(HER-2)是乳腺癌[1-3]及胃癌[4-5]中最为重要的预后判断因子，它是否存在阳性过表达与治疗方案的制订密切相关[6-7]，所以HER-2检测中的阳性对照尤为重要。目前常用的阳性对照制作步骤比较烦琐，不利于阳性对照的保存。本课题组选取了HER-2免疫组织化学染色呈强阳性的乳腺癌及胃癌组织制作液态阳性对照[8]，旨在解决上述问题。

1 材料与方法

1.1实验材料 已知HER-2免疫组织化学染色呈强阳性的乳腺癌及胃癌组织[9]。

1.2方法

1.2.1组织前期处理 选取已知HER-2免疫组织化学染色呈强阳性的乳腺癌及胃癌组织，切片时注意避开纤维结缔组织以及周围正常组织，保留肿瘤细胞，切片厚度为4 μm。将上述切片放入50 mL离心管中，用玻璃棒将组织切片充分碾碎直到切片完全变成颗粒状为止。向离心管中加入10 mL的脱蜡剂置于振荡器上振荡数秒，直至肉眼观察石蜡完全溶解后离心，4 000 r/min离心5 min，倒掉脱蜡剂，重复该步骤两次直到石蜡完全洗脱干净。再向离心管中加入10 mL的无水乙醇后置于振荡器上振荡数秒后离心，4 000 r/min离心5 min，倒掉无水乙醇，重复该步骤两次，以便充分洗掉脱蜡剂。

1.2.2液态对照制作 将上述沉淀转移至新的离心管中，加入沉淀体积20倍的100%乙醇悬浊沉淀，悬浊液置于4 ℃保存待用，见图1。

图1 制作的液态阳性对照

1.2.3肿瘤细胞确定 将上述悬浊液吸取1～2 μL滴加载玻片上，充分烤片后进行HE染色，显微镜下观察肿瘤细胞数量,以及有无重叠现象，见图2。

图2 液态阳性对照的HE染色

1.2.4免疫组织化学检测 将上述悬浊液吸取1～2 μL滴加至阳离子防脱片载玻片上，干燥后于60 ℃烤箱中过夜。本科室使用丹科的PTLINK修复仪[10]及全自动免疫组织化学染色机[11]，按照设定的程序分别对液态对照的HER-2进行免疫组织化学检测。

1.2.5重复性验证 每隔15 d重复1.2.4步骤，3个月后对比每次染色的效果。

1.2.6实用性验证 将上述液态阳性对照同时用于肿瘤组织HER-2检测结果的判读。

2 结 果

3个月共进行了6次免疫组织化学检测，见图3，发现液态阳性对照长时间放置对HER-2免疫组织化学检测结果无明显影响，染色结果能够保持较高的一致性，均为强阳性，在染色过程中组织没有出现掉片情况。同时，将上述液态阳性对照用于肿瘤组织HER-2染色结果的判读，从弱阳性至强性的结果均有，与已知的判读结果符合。

图3 液态阳性对照3个月内不同时间的HER-2免疫组织化学染色

3 讨 论

HER-2是表皮生长因子受体(HER)家族成员之一，具有重要的信号转导作用，是重要的乳腺癌及胃癌预后判断因子。HER-2的免疫组织化学染色结果的可靠性非常依赖于阳性对照的质量，所以要做好免疫组织化学染色的质控就是要做好阴、阳性对照。传统的阳性对照获取主要是依靠组织芯片法，组织芯片制作时会造成原有组织缺损的情况，多次制作时需要消耗大量的组织，对于病理科的标本保存管理不利，并且做好的组织芯片量大且不易保存。液态阳性对照选用已知阳性的组织，切片后制作成细胞悬浊液，保存在1.5 mL的离心管中，易于保存，不会因切片造成组织浪费。

液态阳性对照中的溶液为75%～100%乙醇，可根据科室实际情况选择合适的乙醇浓度。若采用低浓度的乙醇制作液态阳性对照，其滴加于载玻片时散开非常快，如果滴加位置与实验组织距离很接近，则非常容易引起交叉污染，且组织保存时间不长，长时间存放会导致组织蜕变而引起抗原丢失。若采用100%乙醇进行液态阳性对照的制作时，滴加时乙醇非常容易挥发，组织细胞散开不严重，不易造成交叉污染，保存时间较长，但是长时间浸泡于100%乙醇中的组织会变得干、脆。如果一次制作的液态阳性对照量不多时可以使用100%乙醇，这样制作的对照片效果最好，液态阳性对照不宜长时间保存。本研究中的保存时间为3个月，对组织中的HER-2抗原没有太大影响，但如果长时间放置会引起组织中抗原的丢失[12]。所以建议液态阳性对照制作时需要根据科室实际工作量的情况来决定液态阳性对照制作量的多少，避免长时间保存引起抗原丢失。

病理诊断中判读乳腺癌、胃癌组织HER-2阳性染色的标准不一样，但是乳腺癌、胃癌组织都可以用来制作液态阳性对照。除了HER-2抗体检测以外，制作液态阳性对照的方法还能够运用于其他抗原/抗体的检测。

液态阳性对照的出现对于病理检查中免疫组织化学染色的质控有很大的意义，让阳性对照更加容易制作，方法简单，应用于实际工作中稳定、可靠。