信宜地区婚育人群地中海贫血筛查及血红蛋白A2 临界值的确定探讨*

任天凤，杨浩，冼国菁（信宜市妇幼保健院检验科，广东 信宜 525300）

地中海贫血是一种由于血红蛋白分子中珠蛋白基因突变或缺失导致合成不平衡的遗传性疾病。 随着人口流动的加速，其发病率开始增多，广东地区婚育人群α 地贫基因携带率约为12.8%［1］。信宜地区处于粤西地区，其人口数量多，且外来人口流入频繁，是广东省地贫的高发地区之一。 目前尚无治疗地贫的有效手段，重型地贫患儿将给家庭、社会带来巨大的精神和经济负担。 临床上主要经血液学参数来评估地中海贫血类型、阳性状况，特别是Hb A2已成为基层医院常规开展地中海贫血筛查的重要指标［2］。目前临床上成人常以Hb A2﹤2.5%作为α 地贫筛査的临界值，但不同地区在筛查地贫时人群存在区域性差异，采用的技术方法和仪器设备不同，Hb A2的临界值也会不同［3］。 本研究回顾性分析4764 例信宜地区婚育人群的地贫筛查与地贫基因诊断，绘制ROC 曲线， 探讨信宜地区婚育人群Hb A2筛查α 地中海贫血的最佳临界值，为更好地进行地贫筛查提供有力证据。 报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 回顾性分析2018 年7 月～2020 年7 月在本院进行地贫筛查及诊断的婚育人群共4764 例，其中男 2195 例，年龄 18～55(29±5.39)岁；女 2569 例，年龄 18～48(26±5.12)岁。

1.2 纳入与排除标准 纳入标准：（1）所选取对象均应符合无糖尿病史；（2）无其他血液系统疾病及自身免疫性疾病等炎症疾病。 排除标准：（1）β 地中海贫血、α 复合 β 地中海贫血；（2）异常血红蛋白变异病等情况。

1.3 研究方法

1.3.1 标本采集 每个研究对象空腹抽取两支2ml EDTA-K2 抗凝剂的静脉血，一支用于Hb A2检测，一支用于α 地贫及β 地贫基因诊断分析。

1.3.2 仪器与试剂 采用sebia Caplillarys2 全自动毛细管血红蛋白电泳仪及配套试剂测定样本全血中的Hb A2含量。 采用杭州博日科技有限公司TC-96/G/H(b)基因扩增仪、广东凯普生物科技股份有限公司HB-2012A 医用核酸分子杂交仪及配套试剂测定α-地贫及β-地贫基因型。

1.3.3 α-地贫检测范围 检测中国人常见的3 种缺失型α-地贫（-α3.7、-α4.2、--SEA）、3 种突变型 α-地贫（CS、QS、WS）。

1.3.4 β-地贫检测范围 检测17 个位点的19 种突变 （CD41-42、CD43、IVS-II-654、CD17、CD14-15、-28、-29、CD71-72、βE、IVS-I-1、CD27/28、IVS-I-5、Cap、Int、CD31、-30、-32）。

1.4 统计学处理 数据采用SPSS 23.0 统计学软件进行处理。 计量资料采用表示，行 t 检验；P﹤0.05示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 α 地贫各基因型分布以及Hb A2水平含量比较1714 例α-地贫中发现静止型α-地贫占40.02%，轻型α-地贫占56.94%，中间型α-地贫组占3.03%，可见信宜地区婚育人群α-地贫基因型分布以轻型东南亚型为主，各组间Hb A2的含量与健康组比较，差异均有统计学意义(P﹤0.05)。 见表 1。

2.2 α 地中海贫血各组不同性别Hb A2含量比较静止型α 地贫组、健康组的不同性别之间Hb A2的含量比较，差异均有统计学意义(P﹤0.05)；轻型α 地贫组、中间型α 地贫组的不同性别之间Hb A2的含量比较，差异无统计学意义(P﹥0.05)。 见表 2。

表1 α 地贫各基因型分布以及Hb A2 水平含量比较(,%)

表1 α 地贫各基因型分布以及Hb A2 水平含量比较(,%)

注：静止型α-地贫组、轻型α-地贫组、中间型α-地贫组Hb A2 含量与健康组比较，P﹤0.05

n Hb A2 含量 t P静止型α-地贫组轻型α-地贫组中间型α-地贫组健康组686 976 52 3050 2.49±0.25 2.34±0.23 1.67±0.64 2.65±0.27-13.793-31.229-23.889 0.000 0.000 0.000

表2 α 地中海贫血各组的性别分布及Hb A2 含量比较(,%)

表2 α 地中海贫血各组的性别分布及Hb A2 含量比较(,%)

n Hb A2 含量(%) t P静止型α 地贫组男性组女性组轻型α 地贫组男性组女性组中间型α 地贫组男性组女性组健康对照组男性组女性组686 286 400 976 469 507 52 25 27 3050 1415 1635 2.49±0.25 2.46±0.25 2.50±0.25 2.34±0.23 2.34±0.24 2.34±0.23 1.67±0.64 1.79±0.56 1.62±0.68 2.65±0.27 2.66±0.27 2.64±0.28-2.0170.044-0.0650.948 1.0000.322 2.0300.042

2.3 ROC 曲线分析 由于静止型α 地贫组、健康组的不同性别之间Hb A2的含量比较差异均具有统计学意义(P﹤0.05)，为了更大程度上预防重型α 地贫胎儿的产生，将要提高筛查静止型α 地贫的检测性能，故应根据性别建立Hb A2不同的临界值，并计算尤登指数，尤登指数最大时诊断界点可作为Hb A2 对α 地贫筛查的最佳临界值，见表3。 绘制ROC 曲线，见图1 及图2；信宜地区男性婚育人群对α 地贫筛查的最佳Hb A2 临界值为2.6%，其ROC 曲线下面积为0.794；信宜地区女性婚育人群对α 地贫筛查的最佳Hb A2临界值为2.7%，其ROC 曲线下面积为0.748。

3 讨论

α 地中海贫血是一种常染色体遗传病，α 珠蛋白基因位于16p13.3，重型α 地贫多数在围产期因重度胎儿水肿死亡，这给患儿家庭和社会造成极大的经济和心理负担。 目前地贫除了造血干细胞移植之外尚无有效的根治方法，只能通过控制病患儿的出生率来降低地贫的发病率。 血红蛋白电泳是目前产前筛查地贫最常用的技术方法，通过对Hb A2的准确定量可以初步区分 α 和 β 地贫［4］。 但不同地区在筛查地贫时人群存在区域性差异，采用的技术方法和仪器设备不同，Hb A2的临界值也会不同。 我国颁布的地贫防控试点项目技术服务规范中明确指出，各实验室应建立本实验室的Hb A2的参考区间，确定适合本实验室Hb A2筛查α 和β 地贫的最佳截断值。因此，通过ROC 曲线分析建立本实验室筛查信宜地区婚育人群α 地中海贫血的Hb A2最佳临界值，这对做好地区性地贫防控工作，提高地贫筛査的准确度、进行地贫的流行病调查和提高人口素质有重要作用。

表3 不同性别Hb A2 筛查α 地中海贫血的系列临界值指标

图1 男性Hb A2 筛查α 地中海贫血的ROC 曲线

图2 女性Hb A2 筛查α 地中海贫血的ROC 曲线

信宜为粤西城市，是广东省地贫高发地区之一，2012 年由广东省妇幼保健院组织进行统计，广东省育龄人群α 地贫基因携带率约为12.8%。 有学者研究表示，韶关、四会的α 地贫基因携带率分别为10.44%，11.72%。本次研究显示1714 例α-地贫中发现静止型α 地贫占40.02%，轻型α 地贫占56.94%，中间型α 地贫组占3.03%，可见信宜地区婚育人群α-地贫基因型分布以静止型、轻型α 地贫为主。静止型α地贫组、轻型α 地贫组、中间型α 地贫组及健康对照组的 Hb A2的含量分别为(2.49±0.25)%、(2.34±0.23)%、(1.67±0.64)%、(2.65±0.27)%，各组 Hb A2的含量与健康组比较，差异有统计学意义(P﹤0.05)；这表明 Hb A2含量不一定代表α 地贫的严重程度，依然容易漏诊静止型 α 地贫，需结合其他血液学参数（MCV、MCH 等）来综合分析［5，6］。

ROC 曲线可反映诊断试验的准确性，曲线下面积越大，其诊断的准确性越高。 男性、女性婚育人群其ROC 曲线下面积分别为 0.794、0.748，男性 Hb A2临界值的诊断效能稍优于女性，本研究中发现在静止型α 地贫组、健康组的不同性别之间Hb A2的含量比较差异均有统计学意义(P﹤0.05)，故根据性别建立了不同Hb A2的临界值。 有部分文献表明，男性Hb A2的含量略高于女性［7，8］，广东省妇幼骆明勇等［9］研究表明，最佳Hb A2临界值为2.7%，英德市妇幼保健院黄劲柏等［10］研究表明，最佳 Hb A2临界值为 2.7%，这跟本研究的结果较为一致，但根据性别而设定不同Hb A2的临界值尚未见报道。本研究结果显示，广东信宜地区男性、女性婚育人群对α 地贫筛查的最佳Hb A2临界值分别为2.6%、2.7%，性别之间Hb A2有差异，猜测可能与本地区生活水平、营养状态，男性和女性之间机体代偿功能不同或女性婚育人群中有妊娠人群有关。

综上所述， 建立信宜地区婚育人群Hb A2筛查α 地中海贫血的最佳临界值，这对提高本地区地贫筛査的准确度，指导婚育人群遗传咨询及产前诊断，尤为重要。