核酸检测技术在基层血站血液筛查中的应用效果探讨

邱彤

（锦州市全民健康保障中心，辽宁 锦州 121000）

在临床治疗过程中需大量血液，而血液的主要来源为志愿献血者。因此，保证血液安全具有重要意义。目前，核酸检测和血清学检测是临床血液筛选的主要方法，主要对志愿者是否感染病毒或病原体进行检测，但病原体的检测会受窗口期影响，且窗口期还会增加血源质量低、健康情况较差的发生风险，对临床的治疗也会存在不良影响[2]。选取2018年6月至2020年6月于基层血站进行无偿献血的45 520名志愿者作为研究对象，旨在分析核酸检测技术在基层血站的应用效果，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料选取2018年6月至2020年6月于基层血站进行无偿献血的45 520名志愿者作为研究对象，其中男28 450例，女17 070例；年龄20～55岁，平均（32.75±10.43）岁。

纳入标准：①经酶联免疫吸附剂测定后未出现任何反应；②符合献血者健康体检相关要求；③经过HBV筛查，呈HBsAg阴性；通过试纸条对丙氨酸氨基转移酶（ALT）筛查，通过硫酸铜比重法对志愿者的血红蛋白进行检测。排除标准：①配合度较差志愿者；②健康度较差志愿者。

1.2 方法

1.2.1 仪器与试剂检测仪器：全自动酶免检测仪（奥斯邦，型号：star）；全自动混样仪（瑞士艾米尔顿，型号：star）。检测试剂：①乙型肝炎病毒e抗原检测试剂盒[蓝十字生物药业（北京）有限公司，国械注准20173401259]；②乙型肝炎病毒e抗体试剂盒[英科新创（厦门）科技有限公司，国械注准20163402559]；③乙型肝炎病毒表面抗体试剂盒[Diagnostic Kit for Antibody to Hepatitis B Surface Antigen（ELISA），国药准字S10910048]；④乙型肝炎病毒表面抗原确认试剂盒（中和试验）[珠海丽珠试剂股份有限公司，国食药监械（准）字2013第300094号]；⑤乙型肝炎表面抗原诊断试剂盒（Diagnostic Kit for Hepatitis B Surface Antigen，国药准字S10910049）；⑥华益美核酸检测试剂。

1.2.2 检测抽取周静脉血，每位志愿者均抽取2管，并在真空采血管中加入5 mL的乙二胺四乙酸进行抗凝处理，其中一管用于核酸检测，管内含有分离胶；另一管用于酶联免疫检测，不含分离胶，采血4 h后，常规离心5 min，保持温度为4℃/1 600 g，之后置于5℃的运输箱，送实验室离心处理，离心20 min，将标本置于5℃冰箱，血液采集后的72 h内完成核酸检测。

核酸检测及酶联免疫检测：对志愿者测定2次，采用酶联免疫吸附剂检测血液得到志愿者血液携带病原体情况，对于2次检测未出现任何反应或检测反应呈阴性的血液标本进行进一步的核酸检测；抽取志愿者血液样本160μL，采用全自动混样仪进行检测。病毒载量检测：抽取志愿者血液样本800μL，采用高精度仪器进行样本制备，并及时扩增和检测。通过高精度的检测仪器自检，可得到样本与质控品中的HBV-DNA浓度差别。高精度检测仪器的线性范围为（20～1.66E+07）IU/mL，若检测结果在数值范围内，说明能直接对HBV-DNA浓度进行计算，若检测仪器显示“Tragel Not Delected”等字样，说明HBV-DNA呈阴性；若HBV-DNA的检测结果数值低于定量下线，说明HBV-DNA浓度≤20 IU/mL；若检测结果数值＞（1.70E+08）IU/mL，为得到准确的HBV-DNA浓度，需将原始血液样本稀释后进行二次检测。补充血清实验：采用中和法、酶联免疫吸附测定法，使用乙型肝炎病毒表面抗体试剂盒（生产批号：2015060612）对e抗体、表面抗体、乙肝e抗原及核心抗体进行再次检测。上述检测严格按照检测标准及试剂盒操作说明进行实验。

1.3 观察指标分析核酸检测结果及HBV-DNA阳性检测结果。

1.4 统计学方法采用SPSS 23.0统计软件进行数据分析，计数资料百分率（%）表示。

2 结果

2.1 核酸检测结果HBV-DNA呈阳性志愿者共47例，阳性确认率为58.75%，见表1。

表1 核酸检测结果

2.2 检测HBV-DNA阳性志愿者结果35例HBV-DNA阳性志愿者中有31例HBV感染患者，感染率为88.57%，见表2。

表2 检测HBV-DNA阳性志愿者结果（n=35）

3 讨论

核酸扩增检测技术是实验室对血液标本进行病原体核酸检测的重要技术，主要通过分子技术进行病原体的检测与诊断，直接开展检测，可减少常规检查中的复杂程序[3]。目前，我国检测技术快速发展，实时荧光PCR技术和反转录介导的扩增技术是我国核酸检测的主要技术，使用高精密仪器提取血液中的核酸，对提取的核酸进行扩增，最后完成对提取核酸的检测[4]。先扩增再检测的操作方式能有效提升检测仪器的敏感性、自动化性。血液样本中的微量核酸检测难度较大，而对核酸扩增后，能清晰检出感染病毒的血液样本中含有的微量核素，能明显缩短对病原体检测的窗口期，对提升阳性确认率具有重要意义[5]。以往临床研究表明，在进行HBsAg、抗-HCV等检测时，窗口期较长，分别为45、73、22 d，针对这一问题，有研究[6]指出，进行NAT混合检测能明显缩短窗口期。

使用核酸检测技术检测病原体基因组，能尽可能缩短病原体指标检测的窗口期，不仅提升检测效率，还避免各种原因导致检测出现的误差（免疫静默、病毒变异及隐匿性感染等），使血液检测更加安全，避免血液中病原体的传播。20世纪90年代末，临床就开始广泛应用核酸检测技术，随着技术的更新和发展，核酸检测技术成为临床最主要的血液筛查的方法之一[7]。本研究结果显示，HBV-DNA呈阳性患者共88例，阳性确认率为0.19%，阳性确认率较高，分析原因为，主要与本地传染病的流性差异、检测仪器、检测试剂操作技巧、检测时间等有关；检测结果为阳性的患者均为HBV病毒携带者，而检出结果不是HCV阳性、HIV阳性患者的标本与样本容量及研究时间等密切相关。对88例特殊标本开展进一步检测，结果显示，47例标本感染HBV病毒，阳性确认率为58.75%，未确认者33例。分析原因为，不排除相关操作人员未能根据检测标准进行操作；抽取的血液样本内的病毒浓度较低；血液样本在运送途中未合理保存或保存温度发生变化、运输时间较长等因素导致核酸物质出现不同程度的分解[8]。

综上所述，在基层血站血液筛查中开展核酸检测技术，应用效果显著，血液筛查结果准确，值得在血液筛查中推广应用。