荧光定量PCR仪检测HBV DNA结果比对分析

盘锦市中心医院检验科 （辽宁 盘锦 124010）

内容提要： 目的：探讨分析应用荧光定量PCR仪检测乙型肝炎病毒（HBV）DNA的结果。方法：选取2018年8月～2019年9月本院收治的30例乙型肝炎患者，按数字法随机分两组，各15例，对照组仪器采用RLC480仪检测，观察组仪器采用荧光定量PCR仪检测，通过对患者HBV DNA水平的测定，对比分析不同仪器检测的结果。结果：RLC480型荧光定量PCR仪器和ABI7500型荧光定量PCR仪器两种仪器测定结果未出现离群值；两台仪器的检测HBV DNA结果的相关性良好（r＞0.975）；两台PCR检测仪器检测结果的偏倚度百分比为3.18%（＜7.51%），一致性良好，且系统误差在可接受的范围内。结论：ABI7500型荧光定量PCR仪器和RLC480型荧光定量PCR仪器检测HBA DNA的一致性极高，误差小，测算乙型肝炎DNA结果偏倚度在可控范围内，两种仪器运用于乙型肝炎的测量结果可用于以后的临床检测中。

作为一类常见的传染疾病，HBV感染人数较多，据不完全统计，世界上约19.9亿人曾感染或是现已感染了HBV，中国是乙型肝炎病毒感染最严重的国家之一[1]。乙型肝炎严重化会成为肝功能衰竭、肝硬化、肝癌，危及患者的生命安全。在临床检验中，乙型肝炎的DNA能直观反映HBV的指标，可以明确诊断出患者是否患HBV感染，也可实时动态监控HNV的定量变化。为此，本文选择2018年8月～2019年9月本院收治的30例乙型肝炎患者，分析并对比RLC480型荧光定量PCR仪器和ABI7500型荧光定量PCR仪器这两者检测HBV的结果，报道如下。

1.资料与方法

1.1 临床资料

选取2018年8月～2019年9月本院收治的30例乙型肝炎患者，分为观察组和对照组，各15例。纳入标准：①30例患者均诊断为乙型肝炎；②均签署知情同意书；③均无HBV DNS超敏症状[2]。观察组男9例，女6例；年龄13～36岁，平均（26.42±3.31）岁。对照组男10例，女4例；年龄14～37岁，平均（26.61±3.42）岁。比较两组一般资料，无差异（P＞0.05）。

1.2 方法

常见的检测仪器有RLC480（Roebe Light Cycle）型荧光定量PCR仪器和ABI7500荧光定量PCR仪器，其中，RLC480型荧光定量PCR仪器作为参比仪器，ABI7500荧光定量PCR仪器为实验仪器[3]。为保证检测的数据真实有效，按照仪器说明书操作两台仪器，选择合适的HBV核酸定量检测试剂盒为检测试剂盒；让患者清晨保持空腹状态，选择5mL静脉血液作为样本，且保持溶血样本和含脂肪样本的最低浓度为5.0×102U/mL，最高浓度为1.0×108U/mL；认真遵循试剂说明书的操作准则提取且定期检测血液样本中HBV DNA中的核酸，并采用双孔平行检测；第一次对30例乙型肝炎的患者进行测量后2h再进行第二次测定，然后对两次测量结果取平均值[4]。

1.3 观察指标

对比两种测定仪器的不同结果；且测定两种仪器的相对偏倚=（实验值-参比值）/参比值，取百分值（%）。

1.4 统计学分析

采用SPSS 19.0分析数据，参比仪器测定的结果设为X值，实验仪器测定的结果设为Y值，根据线性方程Y=rX+b计算结果。

2.结果

2.1 比较两台仪器两次检测结果的离群值

RLC480型荧光定量PCR参比仪器与ABI7500型荧光定量PCR实验仪器两次检测结果差值的绝对值＜4倍平均绝对值，且未发现离群值，这充分表明了，RLC480型荧光定量PCR仪器和ABI7500型荧光定量PCR仪器两次检测HBV DNA时未出现离群点。

2.2 比较两种检测仪器HBV DNA的检测结果

经过相关性分析参比仪器和实验仪器两次检测结果的平均值，发现检测结果均在0.975以上，表明RLC480型荧光定量PCR仪器选定的浓度范围适合度低于ABI7500型荧光定量PCR仪器，两台仪器荧光定量PCR检测均符合线性回归要求，详见表1。

表1. 两种检测仪器HBV DNA检测结果的比较

2.3 比较两台仪器测定的相对偏倚

对比分析，RLC480型荧光定量PCR仪器和ABI7500型荧光定量PCR仪器两种仪器测定结果的偏倚度百分比为3.18%（＜7.51%），表明两种PCR仪定量检测HBV DNA结果有着良好的一致性，且系统误差在可接受的范围内。

3.讨论

乙型肝炎病毒感染是全球范围内一项公共性卫生问题，若治疗不及时，极易引起肝硬化、肝癌，据数据统计，肝硬化患者61%是由HBV感染，82%肝癌患者是由HBV感染造成的。所以，准确的检测结果有利于医师的临床诊断、选择治疗方案以及判断预后。RLC480型荧光定量PCR仪器和ABI7500型荧光定量PCR仪器是临床中用于检测HBV DNA的结果，ABI7500型荧光定量PCR仪器比对分析乙型肝炎病毒DNA的结果，作为参比仪器的RLC480型荧光定量PCR仪器则借助热循环专科计数和光学检测系统完全消除边缘效应[5]。本文研究发现，RLC480型荧光定量PCR仪器和ABI7500型荧光定量PCR仪器两种仪器测定结果未出现离群值；两台仪器的检测HBV DNA结果的相关性良好（r＞0.975）；两台PCR检测仪器检测结果的偏倚度在可接受范围内，和陈亘志[6]的研究结果基本一致。这表明，ABI7500型荧光定量PCR仪器和RLC480型荧光定量PCR仪器检测HBA DNA的一致性极高，误差小，准确度较高测量结果可有效作为临床依据，两种仪器可联合运用于乙型肝炎DNA检测中。

综上所述，通过判断RLC480型荧光定量PCR仪器和ABI7500型荧光定量PCR仪器两种仪器测定结果的误差标准，分析两种仪器的线性回归相关性，并测算其结果的偏倚度在可控的范围内，两种仪器皆可运用于乙型肝炎DNA检测中，且结果的准确度为以后的临床检测提供了有力的保障。