复方阿莫西林乳房注入剂对临床型奶牛乳房炎的治疗效果

2021-05-12 06:25隋国燕李世宏陈长青崔小七张财祯朱新荣李剑勇
动物医学进展 2021年5期
关键词:乳区阿莫西林乳汁

隋国燕,李世宏,秦 哲,陈长青,崔小七,周 衡,张财祯,朱新荣,李剑勇*,唐 峰*

(1.锦州医科大学畜牧兽医学院,辽宁锦州,121001;2.中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所,甘肃兰州 730050;3.郑州百瑞动物药业有限公司,河南郑州 730050;4.甘肃荷斯坦奶牛繁育示范中心,甘肃兰州 730050)

奶牛乳房炎(bovine mastitis,BM)是由化学、物理因素等刺激或多种病原微生物侵入乳房组织所引起的炎症反应,是世界奶牛养殖中的常见疾病[1]。研究发现,该病普遍存在于世界各地,在美国、挪威、芬兰和瑞典因BM引起的奶牛淘汰率为26.5%、19.0%、35.0%和22.0%。我国奶牛乳房炎的发病率高于世界平均水平,因此病导致的淘汰率约为35%[2]。乳房炎可导致乳汁产生物理、化学和微生物学变化及乳腺组织的病变,并影响奶牛繁殖力、产奶量和乳制品品质,不仅增加兽医治疗和管理费用,而且威胁人类的健康[3]。奶牛乳房炎的临床症状可分为临床型和隐性型,据统计,临床型乳房炎(Clinical mastitis,CM)占总发病率的21%~30%。CM临床症状明显,可出现乳区化脓、坏疽、萎缩等症状,也可导致永久性失去泌乳能力,其淘汰奶牛占总淘汰率相对较高[4-5]。细菌性乳房炎是BM最常见的病因,主要病原菌为葡萄球菌和链球菌,其次是大肠杆菌和酵母样菌等。抗生素目前仍是治疗细菌性乳房炎的首选方案。在多种剂型中抗生素乳房注入剂是最快捷和最有效的剂型[6]。阿莫西林具有广谱、杀菌作用强的特点,但在某些地区存在一定的耐药率[7]。临床上解决耐药性的问题可采用联合用药的方式,复方阿莫西林是将阿莫西林、舒巴坦钠及泼尼松龙联合制备,其能够有效提高药物的抗菌活性,拓宽抗菌谱,增强敏感度,能够有效抑制引起BM的常见病原菌,并且具有消炎作用,从而缓解乳腺组织红肿、胀痛等临床症状,对治疗BM效果良好。为满足奶牛养殖业对复方阿莫西林的市场需求,本研究对郑州百瑞动物药业有限公司中试生产的复方阿莫西林乳房注入剂进行临床疗效评价,为临床用药提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验用动物 70头泌乳期患有CM的荷斯坦奶牛选自甘肃某两个奶牛场。所有试验奶牛都在标准化牛棚隔离饲养,自由采食和饮水。

入选标准:①患病乳区出现红肿、热感、疼痛等症状,且无其他疾病的泌乳期奶牛;或乳汁中出现胶冻状凝块、絮状物以及颜色发生改变等症状。②当前泌乳期没有临床乳房炎(单个乳区)治疗史。③只有单个乳区发生临床型乳房炎。

排除标准:①具有异常乳区/乳房构造的奶牛(如缺少乳区、不产奶乳区、乳头受损及下垂的乳房)。②桀骜不驯,试验难以驾驭的奶牛。③奶牛发生影响试验结果的全身或并发疾病的临床症状。④纳入前28 d内用过抗生素(全身或乳房内)治疗的试验奶牛。⑤纳入前3 d内用过非甾体抗炎药(NSAIDs)。⑥两个或两个以上乳区发生临床型乳房炎的试验奶牛。

剔除标准:①发生伴发疾病的奶牛,如全身性疾病或其它需要抗生素或/和抗炎药物治疗的病症。②不允许偏离研究结果的配合治疗(抗生素或非甾体抗炎药)。③其他严重偏离试验方案者。

1.1.2 试验用药品 试验用药:复方阿莫西林乳房注入剂(批号为20190702),由郑州百瑞动物药业有限公司中试生产,规格为3 g;阿莫西林三水物 0.2 g(以阿莫西林计)+舒巴坦钠 0.05 g(以舒巴坦计)+泼尼松龙 0.01 g。对照用药:复方阿莫西林乳房注入剂(批号为1808005),由齐鲁动物保健品有限公司生产,规格为12 g;阿莫西林三水物 0.8 g(以阿莫西林计)+舒巴坦钠 0.2 g(以舒巴坦计)+泼尼松龙0.04 g。

1.1.3 培养基和试剂 鲜血琼脂平板、TSB培养基,广州迪景微生物科技有限公司;细菌16S rDNA PCR扩增试剂盒,北京天根生化科技有限公司;细菌DNA提取试剂盒,北京天根生化科技有限公司;通用细菌采样管,友康恒业生物科技有限公司。

1.1.4 主要仪器设备 体细胞分析仪,Fossomatic Minor;恒温培养箱,上海一恒科技有限公司;恒温摇床,上海一恒科技有限公司;Sorvall Legend XT/XF 低温高速离心机,美国赛默飞世尔科技公司;SimpliAmp PCR仪,美国ABI公司;GelDoc XR+凝胶成像系统,美国 Bio-Rad 公司。

1.2 方法

1.2.1 试验动物分组及给药 将70头奶牛随机分为试验组(36头)和对照组(34头)。每个感染乳区注入3 g复方阿莫西林乳房注入剂,每12 h注射1次,连续给药3 d。

1.2.2 奶样采集 用温水洗涤乳房后,用750 mL/L酒精擦洗进行消毒,采样前弃掉前段奶样。分别在用药前、停药后7 d(±1 d)和停药后14 d(±2 d)无菌采集单个患病乳区的奶样。每个患病乳区分别采集两份奶样至10 mL和20 mL无菌采样管中,标记后放入4 ℃采样箱中保存,当日进行细菌学检测和乳汁体细胞计数(somatic cell counts,SCC)测定。

1.2.3 细菌的分离培养与鉴定 将采集的奶样充分摇匀,吸取100 μL涂布于血平板,同时吸取50 μL至TSB液体培养基中进行增菌培养,分别置于37℃的恒温培养箱和摇床中,培养18 h~48 h。将血平板中单菌落进行纯化培养,对未生长菌落者,取奶样于TSB液体培养基中增菌培养,再用血平板划线培养,培养48 h后仍未长菌的,即可认为无细菌生长。

(2)加快客运码头建设,建成与杭州市国家级旅游城市地位相协调的特色客运码头。推动实施运河水陆交通、富阳鹿山、桐庐滩头、建德姚坞和城东等五个水上集散中心的建设,以及桐庐旅游码头及停靠点,建德风月轩、梅城七廊庙、乾潭、黄饶、岭后,淳安界首、石林、东北湖区旅游码头,临安青山湖、柳溪江等旅游客运码头的建设。

取纯化后的菌液,进行革兰氏染色,然后镜检。并提取菌液基因组DNA,采用PCR技术扩增16SrDNA,将测序结果在NCBI中进行同源比对,鉴定细菌种类。

1.2.4 体细胞计数 将奶样进行SCC。比较用药前、停药后7 d±1 d和14 d±2 d的变化。

1.2.5 疗效评价 在用药前、停药后7 d±1 d和14 d±2 d分别观察患牛乳房外观和乳汁性状的变化。并统计治愈率、有效率及总有效率。判断标准如下:

治愈:若患病乳区红、肿、热、疼痛等临床症状完全消失,乳汁颜色以及性状均恢复正常,在治疗前检出的病原微生物在治疗后未检出,SCC在75×104个/mL以下则可判定为对该病原微生物引起的乳房炎治愈。

有效:患病乳区临床症状减轻或消退,病原微生物在治疗后仍被检出,SCC明显下降判为对该病原微生物引起的乳房炎有效。

无效:若患病乳区临床症状未得到改善甚至病情加重,在治疗后病原微生物仍被检出或乳汁中SCC下降不显著,视为无效。计算公式如下:

治愈率=治愈数/总数×100%

有效率=有效数/总数×100%

1.2.6 数据处理与统计学分析 使用Microsoft Excel软件对数据进行整理,使用SPSS 25.0软件对数据进行T检验与卡方(χ2)检验。

2 结果与分析

2.1 药物治疗前后乳汁中的病原菌检测结果

细菌学检测结果如表1和表2所示,用药前采集的70份奶样中有58份奶样检出细菌,细菌总检出率为82.86%,试验组和对照组细菌检出率分别为86.11%(31/36)和79.41%(27/34)。该牛场分离的病原菌主要为链球菌(40.63%)、葡萄球菌(31.25%)、大肠埃希氏菌(26.15%)、巨型球菌(1.56%)。停药后14 d,试验组和对照组对病原菌的总清除率分别为94.12%和93.55%。试验组对无乳链球菌、巴黎链球菌、乳房链球菌、马胃葡萄球菌、溶血葡萄球菌、产色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和巨型球菌的清除率均为100%,大肠埃希氏菌为88.89%,猪葡萄球菌为50%。对照组对无乳链球菌、巴黎链球菌、乳房链球菌、猪葡萄球菌、溶血葡萄球菌和表皮葡萄球菌的清除率均为(100%),大肠埃希氏菌为87.5%,马胃葡萄球菌为75%。

表1 用药前后牛奶样品中细菌的变化

2.2 药物治疗前后SCC检测结果

用药前试验组和对照组的SCC均远高于75×104个/mL,停药后7 d、14 d后两组所采集的奶样中SCC明显下降(表3),说明两组均能达到治愈标准。

表3 各试验组用药前后乳汁体细胞数

2.3 临床治疗效果

由表4可见,停药后14d,试验组治愈率和总有效率分别为58.3%(21/36)、88.9%(32/36);对照组分别为61.8%(21/34)、85.3%(29/34);与对照组相比,试验组的治愈率无显著性差异(P>0.05),试验组的总有效率同样无显著性差异(P>0.05)。

表4 试验药物与对照药物治疗CM临床效果统计

3 讨论

BM是危害奶牛健康的重要疾病之一,由于引起BM的致病因素多且病原菌种类复杂,导致其难以得到根治[8]。BM的发生常与病原微生物感染、环境因素及饲养管理不当等其他因素有关[9-10]。使用抗生素进行治疗可以有效控制BM的发生。阿莫西林是临床上治疗BM的常用药物之一,但由于长期使用或使用不当出现一定的耐药性[7]。因此,将阿莫西林、舒巴坦钠及泼尼松龙联合制备为复方阿莫西林乳房注入剂。

本试验研究了复方阿莫西林乳房注入剂对CM的治疗效果。临床上通常以奶牛的精神状态、食欲、产奶量及乳房和乳汁肉眼可见的临床指标作为BM的疗效评判标准。但仅通过肉眼观察临床症状消失即评判为临床治愈,假阴性率过高,部分泌乳期奶牛会复发BM,这与乳汁中细菌没有完全清除有一定关系[11]。停药后14 d,试验用药和对照用药对病原菌的总清除率为94.12%和93.55%。说明两种药物对引起该牛场BM的主要病原菌(大肠埃希氏菌、葡萄球菌和链球菌)具有较好的清除作用。此外,研究表明乳汁SCC与BM的发生呈正相关,SCC也是评价奶牛乳房感染程度的重要指标之一。SCC结果显示,两组在用药前后均显著下降,且两组间无显著性差异,说明两种试验用药均能够改善由乳房炎引起的乳汁SCC升高。临床结果显示,试验组和对照组的临床治愈率分别为58.3%和61.8%,总有效率分别为88.9%和85.3%。说明了试验用药和对照用药两组临床疗效相当。

葡萄球菌与大肠埃希氏菌是导致食源性中毒病和引起BM的主要病原菌,而且乳汁中的营养成分与pH值适宜多种细菌的生长[12]。β内酰胺类抗生素的错误使用导致了临床耐药菌分离率的增加[7]。配方中舒巴坦是一种β内酰胺酶抑制剂,可有效抑制多种产A类β内酰胺酶的细菌,增强阿莫西林对耐药菌的抗菌效果[13],达到更好的临床治效果。

复方中添加抗炎药泼尼松龙配伍阿莫西林使用来提高治疗效果。在乳房炎的炎症期间,主要由乳腺上皮细胞组成的血-乳屏障失去完整性,血液与乳汁之间的梯度无法维持。抗炎药的使用虽然无法阻止血-乳屏障被破坏,但有研究证明抗炎药的使用可以帮助重建屏障的完整性,促进乳房炎症的恢复。同时,研究发现抗炎药物的使用可以有效地减少与疾病和疼痛相关的行为,并显著改善牛的福利[14]。在另一项乳房炎的自然感染研究中,同样证实了抗菌药与抗炎药的配伍使用可以通过减轻与乳房炎乳腺炎引起的疼痛和不适,促进轻度或中度乳房炎的恢复[15]。

复方阿莫西林乳房注入剂可以通过舒巴坦钠增强阿莫西林对临床菌株的抑制作用和泼尼松龙减轻乳房炎症反应和相关疼痛反应来更好地实现对CM的治疗效果。

综上所述,郑州百瑞动物药业有限公司生产的复方阿莫西林乳房注入剂与对照用药的临床疗效相近,两者无统计学差异(P>0.05),说明本试验中复方阿莫西林乳房注入剂(试验用药)能够有效治疗泌乳期奶牛临床型乳房炎,可以进一步推广与应用。

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